【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于甘油磷脂酰胆碱的制备，具体涉及一种通过磷脂酶水解法制备甘油磷脂酰胆碱的方法。
技术介绍
1、甘油磷脂酰胆碱(gpc)是由磷脂分子上两条脂肪酸链水解后生成的产物，是人体内卵磷脂的分解代谢产物。其在磷脂的合成和代谢中起着极为重要的作用，对于人体认知能力的提高、荷尔蒙水平的维持等均有着极为重要的意义。研究发现，其对于降低高血脂、改善老年人的记忆和认知能力、治疗阿尔兹海默症等均有着一定的效果。
2、目前，制备gpc的方法一般采用大豆粉末磷脂初始原料，经过甲醇钠降解，层析方法去除甘油磷脂酰乙醇胺、乙醇胺、甘油磷脂酰肌醇、甘油磷脂酸等杂质，再用树脂去除中性油脂、脂肪酸、胆碱等其他杂质，最后使用活性炭脱色，浓缩得到产品。由于使用的粉末磷脂中磷脂酰胆碱的含量低(22％左右)，导致杂质较多，给分离带来了很大的困难，为此国内有学者对gpc的分离纯化进行了研究，其分离纯化方法包括浸提法、沉淀结晶法、离子交换树脂柱层析法、硅胶柱层析法等，但这些分离纯化方法在纯度、旋光度、杂质控制、工业化和环境方面都面临着不同程度的问题，不能满足药物生产的需求。
3、因此，能够探索出一种制备方法简单，合成得率高，纯度高，且绿色环保的甘油磷脂酰胆碱的制备方法是本领域面临的一大挑战难题。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种通过磷脂酶水解法制备甘油磷脂酰胆碱的方法，所述方法简单高效，收率高，产物纯度高，为推广工业化生产奠定基础。
2、为达此目的，本
3、一方面，本专利技术提供一种通过磷脂酶水解法制备甘油磷脂酰胆碱的方法，所述方法包括以下步骤：
4、(1)将卵磷脂与相转移催化剂在溶剂中混合，向其中加入磷脂酶的缓冲溶液，进行反应，得到反应液；
5、(2)向步骤(1)得到的反应液中加入萃取溶剂进行萃取，收集下层水相，浓缩得到浓缩液；
6、(3)向浓缩液中加入脱色剂进行脱色，减压浓缩除去水，利用萃取溶剂进行溶解，大孔吸附树脂除杂，而后浓缩至干，得到甘油磷脂酰胆碱。
7、在本专利技术中，通过引入相转移催化剂至磷脂酶水解反应体系中，有利于磷脂酶在反应溶剂和水溶液的两相体系的水解反应，提高水解反应的转化率，从而提高产率和纯度。
8、优选地，步骤(1)所述卵磷脂为大豆卵磷脂。
9、优选地，步骤(1)所述的相转移催化剂为季铵盐类化合物或膦盐类化合物中的一种或至少两种的混合物。
10、优选地，步骤(1)所述溶剂为正己烷、环己烷或正庚烷中的任意一种或至少两种的组合。
11、优选地，步骤(1)所述的磷脂酶为磷脂酶a1和/或磷脂酶a2。
12、优选地，步骤(1)所述的缓冲溶液为醋酸和醋酸盐组成的溶液或磷酸和磷酸盐组成的溶液。
13、优选地，步骤(1)所述的磷脂酶水溶液的质量百分比浓度为0.1-1％，例如0.1％、0.3％、0.5％、0.7％、0.9％或1％。
14、优选地，步骤(1)所述的卵磷脂与相转移催化剂的质量比为1:0.01-0.05，例如1:0.01、1:0.02、1:0.03、1:0.04或1:0.05。
15、优选地，步骤(1)中相对于1g卵磷脂，所述溶剂用量为8-12ml，例如8ml、9ml、10ml、11ml或12ml。
16、优选地，步骤(1)中相对于1g卵磷脂，所述磷脂酶水溶液的用量为0.1-1ml，例如0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.8ml或1ml。
17、优选地，步骤(1)所述溶剂与缓冲溶液的体积比为1:2-1:5，例如1:2、1:2.5、1:2.8、1:3、1:3.5、1:3.8、1:4、1:4.5或1:5。
18、优选地，步骤(1)所述的缓冲溶液的ph为5-7，例如5、5.3、5.5、5.8、6、6.3、6.5、6.8或7。
19、优选地，步骤(1)所述反应的温度为30-60℃，例如30℃、35℃、38℃、40℃、45℃、50℃、55℃、58℃或60℃，所述反应的时间为3-12小时，例如3小时、4小时、5小时、8小时、10小时或12小时。
20、优选地，步骤(1)所述的溶剂与步骤(2)所述的萃取溶剂的体积比为1:1-4，例如1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5或1:4。
21、优选地，步骤(2)所述萃取溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇或水中的任意一种或至少两种的组合。
22、优选地，步骤(2)所述萃取为向步骤(1)得到的反应液中加入萃取溶剂，搅拌1-3小时(例如1小时、1.5小时、2小时、2.5小时或3小时)，分层。
23、优选地，步骤(3)所述脱色剂为活性炭。
24、优选地，步骤(3)所述脱色为在温度30-60℃(例如30℃、35℃、38℃、40℃、45℃、50℃、55℃、58℃或60℃)下搅拌1-6小时(例如1小时、2小时、3小时、4小时、5小时或6小时)，过滤，得到无色澄清的脱色液。
25、优选地，步骤(3)所述萃取溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇或水中的任意一种或至少两种的组合。
26、优选地，步骤(3)所述大孔吸附树脂为na型或h型酸性大孔吸附阳离子树脂的、或cl型或oh型碱性大孔吸附阴离子树脂中的任意一种或至少两种的组合。
27、作为优选的技术方案，本专利技术所述的通过磷脂酶水解法制备甘油磷脂酰胆碱的方法，具体包括以下步骤：
28、(1)将卵磷脂与相转移催化剂以质量比为1:0.01-0.05在溶剂中混合，向其中加入磷脂酶水溶液和缓冲溶液，相对于1g卵磷脂，所述磷脂酶水溶液的用量为0.1-1ml，磷脂酶水溶液的质量百分比浓度为0.1-1％，所述溶剂与缓冲溶液的体积比为1:4，在30-60℃反应3-12小时，得到反应液；
29、(2)向步骤(1)得到的反应液中加入为步骤(1)所述溶剂体积的1-4倍的萃取溶剂，搅拌1-3小时，分层，收集下层水相，浓缩得到浓缩液；
30、(3)向浓缩液中加入脱色剂，在30-60℃搅拌1-6小时进行脱色，过滤，得到无色澄清的脱色液，减压浓缩除去水，利用萃取溶剂进行溶解，大孔吸附树脂除杂，而后浓缩至干，得到甘油磷脂酰胆碱。
31、本专利技术通过优化选择操作工序，对卵磷脂、相转移催化剂、反应溶剂、磷脂酶及缓冲溶液的参数比进行一定的优化，从而提高产率和纯度。
32、相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：
33、本专利技术通过引入相转移催化剂至磷脂酶水解反应体系中，有利于磷脂酶在反应溶剂和水溶液的两相体系的水解反应，提高水解反应的转化率，获得70％以上的产物收率，产品纯度高达94％以上。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种通过磷脂酶水解法制备甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述卵磷脂为大豆卵磷脂；
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述溶剂为正己烷、环己烷或正庚烷中的任意一种或至少两种的组合；
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的磷脂酶水溶液的质量百分比浓度为0.1-1％；
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述溶剂与缓冲溶液的体积比为1:2-1:5；
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述反应的温度为30-60℃，所述反应的时间为3-12小时；
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述萃取溶剂选自乙醇、甲醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇或水中的任意一种或至少两种的组合；
8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述脱色剂为活性炭；
9.根据权利要求1
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种通过磷脂酶水解法制备甘油磷脂酰胆碱的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述卵磷脂为大豆卵磷脂；
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述溶剂为正己烷、环己烷或正庚烷中的任意一种或至少两种的组合；
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的磷脂酶水溶液的质量百分比浓度为0.1-1％；
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述溶剂与缓冲溶液的体积比为1:2-1:5；
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晓红，丁建飞，钱庆，
申请(专利权)人：苏州富士莱医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。