【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及抗体，具体涉及抗ildr2的抗体及其片段、制备方法以及它们的用途。
技术介绍
1、抗体是由重链和轻链共同组成的生物大分子，由b淋巴细胞分泌，在机体的体液免疫中发挥重要作用。抗体分子的重链或轻链分别由可变区和恒定区组成，可变区主要发挥靶抗原结合作用，恒定区主要发挥免疫调控效应。根据空间结构和氨基酸序列特征，抗体可分为igg、igm、ige、iga、igd等，并且重链和轻链也可进一步细分为多个亚型。比如，人igg重链可分为igg1、igg2、igg3和igg4，轻链可分为κ和λ。由于抗体可以特异、高效地结合靶分子或靶细胞，调控靶分子下游的信号通路，或者通过免疫效应杀伤靶细胞，因此抗体可以开发为药物用于疾病治疗。当前，抗体已经发展成为一种重要的生物技术药物，其中单克隆抗体占据了绝大部分，这其中又以igg型抗体为主，因此通常所说的单克隆抗体往往指的是igg型抗体。
2、igg型抗体分子是由2条重链和2条轻链通过链间二硫键构成的四聚体，分子量约150kd。根据结构和功能特征，抗体分子可分为可变区和和恒定区，其中可变区主要发挥抗原结合作用，而恒定区主要发挥免疫学效应和转运等功能。抗体的可变区可进一步分为互补决定区cdr和框架区fr，其中重链或轻链各含有3个cdr区(重链vh-cdr1、vh-cdr2、vh-cdr3，轻链vl-cdr1、vl-cdr2、vl-cdr3。)和cdr区两侧的4个fr区(fr1、fr2、fr3、fr4)。cdr区形成的loop环是抗体分子与抗原结合的主要部位，fr区则通过空间折叠形成cdr
3、杂交瘤技术是目前抗体发现过程中的重要技术。抗原免疫小鼠后，小鼠b细胞在淋巴组织发育形成生发中心，经过体细胞高频突变(shm)，抗体亲和力得以逐步提高。分离小鼠脾细胞，在体外与小鼠骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤，通过测定杂交瘤细胞培养上清中的抗体活性，可以筛选到产生目标抗体的杂交瘤。杂交瘤细胞经过亚克隆后逐渐单克隆化，提取亚克隆细胞的mrna进行抗体可变区基因测序，可以分析出抗体可变区的氨基酸序列。目前，上市的多数抗体是由杂交瘤技术筛选所获得的。由于杂交瘤技术来源的抗体分子是在小鼠体内完成亲和力成熟过程，那些与小鼠自身蛋白有交叉反应性的b细胞在小鼠骨髓内经过“阴性选择”而被清除，因此抗体分子可有效减少与自身蛋白或其相似蛋白的非特异性结合。
4、单克隆抗体可以通过多种机制发挥药理作用。抗体可变区可以结合细胞外的可溶性配体，阻断配体与受体的结合，切断配体诱导的下游信号传递，因此以免疫细胞因子为靶点开发的抗体药物可以改善炎症性疾病，比如adalimumab、belimumab、siltuximab等抗体已经获批上市。抗体恒定区可以发挥免疫调控作用，包括抗体依赖的细胞毒性作用(antibody-dependent cellular cytotoxicity，adcc)、补体依赖的细胞毒性作用(complement-dependent cytotoxicity，cdc)等，因此以肿瘤细胞表面分子为靶点开发的抗体药物可以杀伤肿瘤细胞，比如rituximab、trastuzumab、cetuximab等上市抗体都获得了巨大成功。此外，以单克隆抗体为基础衍生出的双特异性抗体、抗体药物偶联物(antibody-drug conjugate，adc)等新型抗体技术在近些年发展也很快，均实现了不同程度的突破。截止目前，癌症和炎症性疾病是抗体药物应用最多的疾病领域。
5、癌症是严重威胁人类健康和生命的一类疾病。随着老龄化和人们生活方式的改变，癌症的发病率不断升高，并且还呈现出年轻化趋势，因此癌症治疗一直是医药领域的研究热点。癌症免疫治疗是一种成功的癌症治疗方式，已经获得了医学界的普遍认可。免疫系统具有识别和杀伤肿瘤细胞的能力，然而肿瘤细胞能够通过多种机制逃避抗肿瘤免疫。免疫检查点(checkpoint)分子可以调节免疫细胞的活化程度，在机体免疫系统的正常活化和防止自身免疫方面发挥重要作用。pd-1、pd-l1、ctla4等免疫检查点分子的过度表达是导致肿瘤免疫逃逸的重要因素之一，免疫检查点抑制剂也是肿瘤免疫治疗的热点。目前，尽管以pd-1、pd-l1、ctla4等靶点为代表的抗体药物在临床获得了巨大成功，但其仅对少数肿瘤有效，而对大多数肿瘤的疗效仍不理想，因此急需开发针对其他新靶点的抗体药物，以解决未满足的临床需求。
6、含ig样结构域受体2(ig-like domain–containing receptor 2,ildr2)是免疫球蛋白超家族(ig superfamily,igsf)的成员，被认为与三细胞紧密连接(tricellulartight junctions,ttjs)有关。ildr2主要在单核细胞、巨噬细胞和成纤维细胞网状细胞(fibroblastic reticular cell,frc)中表达，其假定受体ildr2-r表达在活化的t细胞，但目前仍未鉴定。近年来研究发现ildr2是一类新的b7样蛋白，可以抑制t细胞的活化，是肿瘤免疫治疗的潜在靶点。由于ildr2在除了免疫豁免组织(睾丸、大脑)以外的正常组织中低表达或不表达，因此可以作为抗体药物的作用靶点。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是提供一系列阻断型抗ildr2抗体或抗体片段，具有良好的亲和力、特异性和功能活性，可以有效促进t细胞的活化。
2、本专利技术提供了一系列抗ildr2的抗体或其片段。
3、本专利技术首先提供的抗ildr2的抗体或其片段，其含有氨基酸序列分别为seq idno.2、seq id no.3、seq id no.4所示的重链互补决定区vh-cdr1、vh-cdr2、vh-cdr3。
4、或者，其含有氨基酸序列分别为seq id no.6、seq id no.7、seq id no.8所示的轻链互补决定区的vl-cdr1、vl-cdr2、vl-cdr3。
5、进一步的，其含有氨基酸序列为seq id no.1所示的重链可变区vh。
6、或者，含有氨基酸序列为seq id no.5所示的轻链可变区vl。
7、更进一步的，上述抗ildr2的抗体或其片段含有氨基酸序列为seq id no.1所示的重链可变区vh和氨基酸序列为seq id no.5所示的轻链可变区vl。含有氨基酸序列为seqid no.1所示的重链可变区vh和氨基酸序列为seq id no.5所示的轻链可变区vl的抗体命名为42b8。
8、本专利技术另提供的抗ildr2的抗体或其片段，其含有氨基酸序列分别为seq idno.10、seq id no.11、seq id no.12所示的重链互补决定区vh-cdr1、vh-cdr2、vh-cdr3。
9、或者，其含有氨本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
2.根据权利要求1所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
3.根据权利要求1或2任一项所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于：含有氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的重链可变区VH和氨基酸序列为SEQ ID NO.5所示的轻链可变区VL。
4.抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
5.根据权利要求4所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
6.根据权利要求4或5任一项所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于：含有氨基酸序列为SEQ ID NO.9所示的重链可变区VH和氨基酸序列为SEQ ID NO.13所示的轻链可变区VL。
7.抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
8.根据权利要求7所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
9.根据权利要求7或8任一项所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征
10.抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
11.根据权利要求10所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
12.根据权利要求10或11任一项所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于：含有氨基酸序列为SEQ ID NO.25所示的重链可变区VH和氨基酸序列为SEQ ID NO.29所示的轻链可变区VL。
13.根据权利要求1～12任一项所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于：所述抗体的可变区可以由相应抗体的互补决定区CDR与人源抗体框架区FR拼接而成。
14.根据权利要求1～13任一项所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
15.根据权利要求1～14任一项所述的抗ILDR2的抗体或其片段，其特征在于：所述的抗体片段为Fab(antigen binding fragment)或scFv(single-chain fragment variable)。
16.编码权利要求1～15中任一项所述抗ILDR2的抗体或其片段的核酸分子。
17.包含权利要求16所述的核酸分子的重组载体。
18.包含权利要求17所述的重组载体的细胞。
19.权利要求1～15中任一项所述抗ILDR2的抗体或其片段在制备治疗或预防肿瘤药物中的用途。
20.根据权利要求19所述的用途，其特征在于：所述的肿瘤为结肠癌。
...【技术特征摘要】
1.抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
2.根据权利要求1所述的抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
3.根据权利要求1或2任一项所述的抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于：含有氨基酸序列为seq id no.1所示的重链可变区vh和氨基酸序列为seq id no.5所示的轻链可变区vl。
4.抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
5.根据权利要求4所述的抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
6.根据权利要求4或5任一项所述的抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于：含有氨基酸序列为seq id no.9所示的重链可变区vh和氨基酸序列为seq id no.13所示的轻链可变区vl。
7.抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
8.根据权利要求7所述的抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
9.根据权利要求7或8任一项所述的抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于：含有氨基酸序列为seq id no.17所示的重链可变区vh和氨基酸序列为seq id no.21所示的轻链可变区vl。
10.抗ildr2的抗体或其片段，其特征在于,满足以下至少一项：
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