本发明专利技术涉及一种新的荧光标记复合扩增检验系统，该系统可以同时分析人基因组ＤＮＡ？２２个基因座的遗传多态性，其中的２２个基因座分为４组，共涉及５种颜色的荧光标记。本发明专利技术的荧光标记复合扩增检验系统提供用于复合扩增２２个基因座的寡核苷酸引物混合物；系统中还包括每个基因座的等位基因标准物，以确定待检ＤＮＡ样品中各个基因座的基因型；系统中包含的用于鉴别ＤＮＡ样品性别的基因座是Ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ基因座。该系统的检测结果表明其多态性高、平衡性好、灵敏度高、特异性高、分型结果准确，完全能够满足实际案件检验、ＤＮＡ数据库建设以及亲子鉴定的需要。在中国汉族人群中的总体随机匹配概率为８．３×１０－２０，累积非父排除率为０．９９９９９９９８９３。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种荧光标记复合扩增检验系统，具体涉及通过复合扩增，检测人基 因组中21个STR基因座和Amelogenin基因座的荧光标记复合扩增检验系统，该系统可以 广泛用于公安部门日常检案、DNA数据库建立、个体识别、亲子鉴定以及考古等方面，有助于 解决公安部打拐数据库一子多父母问题和亲子鉴定中突变和近亲鉴定问题。
技术介绍
短串联重复序列(STR)是目前普遍应用的遗传标记，由于它具有片段小容易扩 增、适宜于检验微量或降解检材、各基因座的扩增条件相似而能够实现复合扩增等特点，因 而采用STR的检验系统具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点，尤其是在建立DNA数据库方 面，STR复合扩增技术具有极大的优越性。因此美国FBI选择了 13个STR基因座用于建立DNA数据库-CODIS (Combined DNA Index System) :CSFIPO、 D3S1358、 D5S818、 D7S820、D8S1179、 D13S317、 D16S539、 D18S51、 D21S11、 FGA、 THOl、 TP0X、 vWA。这些STR基因座通常 被称为13个核心基因座。 正是因为STR基因座具备以上优点和应用前景，许多科研机构和公司投入了大量 经费对其进行开发性的研究。国内外已有较多基于STR-PCR技术的荧光检测技术产品<table>table see original document page 3</column></row><table>ABI AMPFLSTlf Identifiler PCR五色CSF1P0、 D7S820、 D8S1179、 D21S11、 D2S1338、 D3S1358、 D13S317、 D16S539、 THOl、 D18S51、 D19S433、 TPOX、 vWA、 Amelogenin、 D5S818、 FGA16ABI Sinofiler multiplex PCR五色CSF1P0、 D7S820、 D8S1179、 D21S11、 D2S1338、 D3S1358、 D13S317、 D16S539、 D6S1043、 D18S51、 D19S433、 D12S391、 vWA、 Amel。genin、 D5S818、 FGA16专利 ZL200510096613 .6四色Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、 D7S820、 D8S1179、 D13S317、 D16S539、 D18S51、 D21S11、 Penta E、 CSF1P0、 vWA、 FGA15AGCU 17+1 STR 荧光检测试剂盒 (专利公开号CN 101440410A)五色CSF1P0、 D7S820、 D8S1179、 D21S11、 D2S1338、 D3S1358、 D13S317、 D16S539、 THOl、 D18S51、 D19S433、 TPOX、 vWA、 Amelogenin、 D5S818、 FGA、 Penta E、 D6S104318 为了提供一种新的荧光标记复合扩增检验系统，使其更适合于中国人群在个体识 别和亲子鉴定等方面的应用，进一步提高系统的累计个体识别力和累积非父排除率，该检 验系统中必须包含数目更多的、在中国人群中具有高度遗传多态性的STR基因座。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种22个基因座的荧光标记复合扩增检验系统，用于 个体识别和亲子鉴定。为此，本专利技术者对中国人群中STR基因座的遗传多态性进行了深入 的研究，并以此为依据，开发了新的STR基因座的5色荧光复合扩增检验系统，提供对包括 Amelogenin在内的22个基因座的分型结果，提高了系统的累计个体识别力和累积非父排 除率。该系统单独或与其他商品化试剂盒联合使用，有助于解决公安部打拐数据库一子多 父母、亲子鉴定中突变和近亲鉴定问题。 本专利技术的同时分析人基因组DNA的22个基因座的荧光标记复合扩增系统中，所 涉及的22个基因座为Amelogenin、 D6S474、 D12ATA63、 D22S1045、 D10S1248、 D1S1677、 D11S4463、 D1S1627、 D3S4529、 D2S441、 D6S1017、 D4S2408、 D19S433、 D17S1301、 D1GATA113、 D18S853、 D20S482、 D14S1434、 D9S1122、 D2S1776、 D10S1435和D5S2500。 本专利技术的荧光标记复合扩增系统还涉及在一个体系中同时扩增22个基因座，将 22个基因座分为四组并分别用四种不同的荧光染料FAM、 HEX、 TAMRA、 ROX进行标记。 本专利技术的荧光标记复合扩增系统优选的一种分组及荧光染料标记方式为FAM标 记的Amelogenin、 D6S474、 D12ATA63、 D22S1045、 D10S1248、 D1S1677和D11S4463为一组; HEX标记的D1S1627、 D3S4529、 D2S441、 D6S1017、 D4S2408和D19S433为 一 组；TAMRA标 记的D17S1301、 D1GATA113、 D18S853、 D20S482和D14S1434为一组；ROX标记的D9S1122、 D2S1776、 D10S1435和D5S2500为一组。 本专利技术所采用的22个基因座分别采用位于该基因座核心重复区两侧的一对引物 进行扩增，其中每对引物中有一条引物的5'端进行荧光染料标记；本专利技术还提供用于复合 扩增22个基因座的寡核苷酸引物混合物。 本专利技术的系统中包括每个基因座的等位基因标准物，以确定待检DNA样品中各个基因座的基因型；本专利技术的系统中包含的用于鉴别DNA样品性别的基因座是Amelogenin基 因座。 本专利技术的扩增采用聚合酶链式反应进行，扩增产物的检测方法采用多道或单道毛 细管电泳。 本专利技术的荧光标记复合扩增检验系统适用于人的精斑、唾液斑、组织、血痕或血液等检材来源DNA样品的检测分析。 为实现本专利技术的上述目的，采用如下技术方案 —、基因座的确定 采用STR分型技术进行个体识别和亲子鉴定，一方面是因为STR基因座具有高度 多态性，所用的STR基因座都有较多等位基因，具有较高的非父排除率；但另一方面其突变 率也很高，往往会对结果分析(尤其是对亲子鉴定样本中的结果分析)及最后作出判断带 来许多困难。在实践中，往往可以发现一些案例，在检测的STR基因座中有l-2个出现矛盾 现象，此时就需要增加检测的STR基因座数目。 根据中山大学伍新尧教授在第二届全国亲子鉴定理论与实践研讨会上发表的 《亲子鉴定判断标准和结论表述的推荐意见(讨论稿)》 对于三联体亲子鉴定案①最少检测15个STR基因座，若没有发现矛盾基因座，父 权指数达10000，可以作出肯定亲生关系的结论；②若出现1个矛盾基因座，要增加检测 基因座至19个；若发现有2个矛盾基因座，要增加检测至28个，没有新矛盾基因座发现时， 父权指数达10000，可作出肯定亲生关系的结论；③若发现有3个矛盾基因座，要增加检 测至35个本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同时分析人基因组ＤＮＡ ２２个基因座的荧光标记复合扩增系统，其特征在于：复合扩增分析的２２个基因座为：Ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ、Ｄ６Ｓ４７４、Ｄ１２ＡＴＡ６３、Ｄ２２Ｓ１０４５、Ｄ１０Ｓ１２４８、Ｄ１Ｓ１６７７、Ｄ１１Ｓ４４６３、Ｄ１Ｓ１６２７、Ｄ３Ｓ４５２９、Ｄ２Ｓ４４１、Ｄ６Ｓ１０１７、Ｄ４Ｓ２４０８、Ｄ１９Ｓ４３３、Ｄ１７Ｓ１３０１、Ｄ１ＧＡＴＡ１１３、Ｄ１８Ｓ８５３、Ｄ２０Ｓ４８２、Ｄ１４Ｓ１４３４、Ｄ９Ｓ１１２２、Ｄ２Ｓ１７７６、Ｄ１０Ｓ１４３５和Ｄ５Ｓ２５００。
【技术特征摘要】
一种同时分析人基因组DNA 22个基因座的荧光标记复合扩增系统，其特征在于复合扩增分析的22个基因座为Amelogenin、D6S474、D12ATA63、D22S1045、D10S1248、D1S1677、D11S4463、D1S1627、D3S4529、D2S441、D6S1017、D4S2408、D19S433、D17S1301、D1GATA113、D18S853、D20S482、D14S1434、D9S1122、D2S1776、D10S1435和D5S2500。2. 如权利要求1所述的复合扩增系统，其特征在于所说的22个基因座在一个复合扩 增反应体系中同时扩增。3. 如权利要求2所述的复合扩增系统，其特征在于所述的22个基因座分为四组并分 别用四种不同的荧光染料进行标记。4. 如权利要求3所述的复合扩增系统，其特征在于所述的22个基因座的分组及荧光 标记的方式为Amelogenin、 D6S474、 D12ATA63、 D22S1045、 D10S1248、 D1S1677和D11S4463 为 一 组；D1S1627、 D3S4529、 D2S441、 D6S1017、 D4S2408和D19S433为 一 组；D17S1301、 D1GATA113、D18S853、D20S482和D14S1434为一组；D9S1122、D2S1776、D10S1435和D5S2500 为一组，使用FAM、 HEX、 TAMRA、 ROX分组标记。5. 如权利要求4所述的复合扩增系统，其特征在于所述的22...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘未斌，万慧荣，夏子芳，杜蔚安，汤文文，熊勇华，郑卫国，
申请(专利权)人：无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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