人类免疫缺陷病毒抗体免疫磁珠快速检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术是涉及生物应用技术领域，涉及一种运用纳米免疫磁珠检测人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）抗体的快速检测剂盒。检测时将被检样品从加样孔加在试纸条上样垫上，使样品溶解标记磁珠并在ＮＣ膜上层析，然后在规定的时间内用磁力检测仪检（ＭＩＣＴ）测试纸条上数据，根据所读取的数据判定结果，本试剂盒用于ＨＩＶ感染的筛查或临床诊断，具有灵敏度高、特异性强、检测快速、操作简便、适合现场检测和实时记录保存结果等优点。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术是涉及生物应用
，本技术涉及HIV抗体诊断试剂，特别是涉及一种以纳米免疫磁珠技术检测抗体的免疫层析快速诊断试剂。
技术介绍
获得性免疫缺陷综合症(Acquired Immunodeficiency syndrome,AIDS)简称艾滋病，是由人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiencyvirus, HIV)感染引起的一种严重传染病。自美国1981年诊断出首例艾滋病患者以来，据最新的WHO数据评估，至2007年底，全球估计共有3300万艾滋病病毒感染者，中国国内有艾滋病病毒感染者约70万。艾滋病病毒的传播途径主要包括血液传播、性接触、毒品注射和母婴传播。在人体内的潜伏期平均为7 10年。HIV感染潜伏期病人没有明显的临床症状，但具有高度的传染性。对HIV进行检测以发现传染源和切断传播途经是防制AIDS最有效的手段。HIV免疫学检测是最有效和最广泛使用的方法，HIV抗体筛査是我国法定的的四个血源性筛査项目之一。HIV抗体检测最常用的试剂为HIV抗体酶联免疫试剂(ELISA)和胶体金类试剂，采用双抗原夹心法的第三代HIV抗体诊断试剂盒，灵敏度达到99%以上，特异性大于97%，目前得到广泛使用。两类试剂的基本特点如下ELISA试剂需要专用的实验室和专业人员进行检验，操作复杂，但灵敏度更高；胶体金类试剂操作简便、快速、适于现场检测，但灵敏度稍低，结果用肉眼直接观察，会产生误差，亦不能记录。纳米免疫磁珠是含有铁元素的超顺磁纳米颗粒，外面包覆着聚乙烯类高分子物质，并可带有羧基或氨基，用于和蛋白质分子交联。免疫磁珠在细胞和大分子分离、纯化及诊断上都已得到应用。但在免疫层析诊断试剂上还鲜有运用。美国Quantum Design公司最新推出了测定层析试纸上微量磁性物质的检测仪(MICT)，能定量检测到微量(pg级)的磁性物质，为纳米免疫磁珠检测试剂的研制提供了可能。纳米免疫磁珠检测试剂基本原理如下利用免疫磁珠标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，标记磁珠颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，聚集在检测线3纳米免疫磁珠检测试剂基本原理如下利用免疫磁珠标记一种抗原或抗体，在试剂的NC膜上包被相应的配对抗原或抗体，检测时当样品中含相应的特异性抗体或抗原时，标记磁珠颗粒和样品中配体相结合形成复合物，然后在NC膜上层析，再被包被抗原或抗体捕获，聚集在检测线上，通过MICT测定检测线上捕获磁珠的含量实现结果的判定。和胶体金试类剂相比，免疫磁珠检测试剂最大的不同在于将标记胶体金改为标记磁珠，检测结果时用MICT对检测线上的磁珠含量进行检测，而不是依靠肉眼去总判定，使结果判定更为精确、灵敏、客观和便于记录保存。利用纳米免疫磁珠研制HIV抗体检测快速诊断试剂尚无报道。
技术实现思路
本技术是提供一种灵敏度高、特异性强、检测快速、操作简便、适合现场检测和实时记录保存结果的HIV抗体纳米免疫磁珠快速检测试剂盒技术方案如下一种人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒10，其特征是试纸条(9)由在塑料支撑板(8) —端搭接上样垫(l)，上样垫(l)的一端搭接含有标记HIV抗原gp41、 gp36的纳米免疫磁珠垫(2)，在磁珠垫(2)的一端搭接硝酸纤维素NC膜(3)，NC膜(3)包被有相互分离的gp41检测线(T1)检测线(T1) (5) gp36检测线(T2) (6)和质控线(C) (7)， NC膜(3)另一端搭接吸样垫(4)组成，将试纸条(9)装入塑料试剂盒10中构成。所述的人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒，其特征在于所述的标记和包被用抗原为重组表达HIV抗原gp41、 gp36，亦可再增加或替换为HIV其它特异性抗原gpl60、 gpl20、 P24及0亚型gp41。所述的人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒，其特征在于纳米免疫磁珠为含铁的超顺磁乳胶颗粒，直径为200土50nm，表面富含羧基；塑料支撑板厚度小于0. 3mm; NC膜的宽度为35mm;上样垫为玻璃纤维膜或无纺布，吸样垫由吸水滤纸构成。所述的人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒，其特征在于，抗原的包被方法为以0.01M pH 7.2磷酸盐缓冲液(PBS)分别将gp41、 gp36抗原配制成lmg/ml、 0. 5mg/ml的溶液，用喷膜仪在NC膜下部以lul/cm的参数分别划线，包被T1、 T2线，分别用于检测gp41、gp36抗体；同时在NC膜上部包被抗HIV抗体作为C线。各包被线之间的距离为5mm,划线后将NC膜在干燥间(温度20-25t:，湿度小于30%)干燥8-10小时。所述的人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒，其特征在于抗原的标记方法为取10mg磁珠，用50mM 2-(N-吗啉)乙磺酸(MES，pH5. 7)配制成1%的磁珠溶液，加入0. 5mg水溶性碳二亚胺(EDC) ， 37°C10min，再加入200ug HIV gp41， gp36融合或混合抗原，37。C孵育2小时，期间不断摇晃，然后用磁力架吸附磁珠，将缓冲液更换至0.01mPBS(pH7.2)，含O. 596牛血清白蛋白(BSA)， 0. 5%吐温，完成标记。再用工作液将磁珠配制成0. 5mg/ml的溶液，按lml溶液铺22^112的比例均匀地铺在玻璃纤维膜或无纺布上，再置干燥间(温度20-25。C，湿度小于30%)干燥2-4小时，制成纳米免疫磁垫。所述的人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒，其特征在于，试剂盒的装配方法为在干燥室内(温度20-25°C，湿度小于30%)，取塑料支撑板板，将已包被的NC膜放置在塑料支撑板板的中部粘贴，在NC膜T线一侧搭接免疫磁珠垫(搭免疫磁珠垫的1/3)粘贴，在免疫磁珠垫另一侧搭接粘贴上样垫(搭免疫磁珠垫的1/5);在NC膜C线一侧搭接吸样垫(搭吸样垫的1/10);最上面贴一层标志膜，然后用裁剪机将贴好塑料支撑卡切成5mm宽的试纸条，然后将切好的试纸装入塑料卡，完成试剂盒的组装。所述的人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒，其特征在于，检测方法为将被检血清或血浆平衡至温室，将试剂盒平放，在上样垫上加入40ul被检样品，然后再加入60-100ul样品稀释液(0.01MPBS)，样品将溶解胶体金并在NC膜上层析，加样后25—40分钟内用磁力检测仪检(MICT)测试纸条上数据，根据所读取的数据判定结果。若读取的数据大于设定的标准值，说明样品中含有抗HIV抗体，若低于设定的标准值，说明样品为阴性或含量低于试剂盒的最低检测限。所述的人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒，其特征在于所述的试剂盒10是由盒盖11、盒底20构成，盒盖ll、盒底20均是采用塑料注塑一体形成的，盒盖ll、盒底20均是两个上角为圆弧形状的长条形状且其下边中部设置向上的方形凹陷；盒盖11的长、宽以试剂条的长、宽配合设置，盒盖ll为板形，在盒盖前面左侧设置长方形孔为加样孔13，位于其方形凹陷上方设置多条长、短不同的反应区标示凸起肋12,在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人类免疫缺陷病毒抗体免疫磁珠快速检测试剂盒（１０），其特征是试纸条（９）由在塑料支撑板（８）一端搭接上样垫（１），上样垫（１）的一端搭接含有标记ＨＩＶ抗原ｇｐ４１、ｇｐ３６的纳米免疫磁珠垫（２），在磁珠垫（２）的一端搭接硝酸纤维素ＮＣ膜（３），ＮＣ膜（３）包被有相互分离的ｇｐ４１检测线（Ｔ１）检测线（Ｔ１）（５）ｇｐ３６检测线（Ｔ２）（６）和质控线（Ｃ）（７），ＮＣ膜（３）另一端搭接吸样垫（４）组成，将试纸条（９）装入两个上角为圆弧形状的长条形状的盒盖（１１）、盒底（２０）构成的试剂盒（１０）中。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李洲，杨发青，
申请(专利权)人：天津中新科炬生物制药有限公司，
类型：实用新型
国别省市：12[中国|天津]