【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及黄酮类化合物的测定，尤其涉及发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法。
技术介绍
1、黑小麦作为一种新兴的食品原料，以其天然性、营养性和功能性备受关注，食品天然的颜色与它的营养功能有许多密切关系。黑小麦是采用育种手段培育出的优质小麦品种，富含许多天然花色苷，含量在56-198mg/kg，除此之外还富含多酚、蛋白质、脂肪酸、矿物质以及各种微量元素。其中酚类物质是谷物抗氧化能力的最主要成分。ghumman a等的研究发现小麦发芽后其营养成分、生物活性物质以及各种抗营养因子较发芽前会发生显著变化，尤其是酚类物质的组成和含量变化较大。通过发芽不仅将种子中的大分子物质转化为更利于人体吸收的小分子物质，还能激发生物活性，提升蛋白的消化率，减少抗营养因子。chen等对不同地区小麦种子进行发芽过程的研究，发现发芽后的小麦中酚类物质含量较发芽前有显著提高。
2、黄酮属于多酚类化合物，广泛存在于水果蔬菜以及谷物当中，植物源性黄酮类化合物是人体最容易摄取到的具有广泛生物活性的营养物质。黑小麦作为一种富含天然色素的优质谷物资源，其含有丰富的黄酮类化合物，主要包括葛根素、表儿茶素、芦丁、木犀草素、槲皮素、芹菜素、柚皮素、山奈酚、异鼠李素和查耳酮等。研究表明富含类黄酮的食物能够有效预防脑血管疾病，增强大脑神经血管功能。发芽后的黑小麦的黄酮类化合物含量较发芽前有所上升，因此对发芽黑小麦中所含的黄酮类化合物进行测定及定量分析有助于黑小麦产品进一步开发利用。
3、目前对以上10种黄酮类化合物虽然有了测定的方法，但只限于一种或少
技术实现思路
1、本专利技术提供发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法，以解决现有技术无法同时测定发芽黑小麦等谷物中10种黄酮类化合物的问题。
2、本专利技术的发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法，包括以下步骤：
3、步骤1：将发芽黑小麦粉加入乙醇-盐酸-水溶液回流提取，冷却后离心，取上清液过滤，得到样品溶液；
4、步骤2：分别称取等量的葛根素、表儿茶素、芦丁、木犀草素、槲皮素、芹菜素、柚皮素、山奈酚、异鼠李素和查耳酮标准品，制得以上10种黄酮类化合物同浓度的标准品母液；再分别吸取等量的各标准品母液混合后稀释，稀释不同倍数，得到多份不同浓度的混合标准品溶液；
5、步骤3：将所有的混合标准品溶液分别通过高效液相色谱仪进行检测，根据混合标准品溶液中每种黄酮类化合物的浓度及其对应的色谱峰面积绘制标准曲线；
6、步骤4：将样品溶液通过高效液相色谱仪进行检测，依据色谱峰面积对应的标准曲线，及相关参数，计算样品中相应黄酮类化合物的含量。
7、优选的，步骤1中，称取过60目筛的发芽黑小麦粉2.00g于50ml圆底烧瓶中，加入40ml乙醇-盐酸-水溶液，于85℃回流提取90min，冷却后转移至50ml容量瓶中，用乙醇-盐酸-水溶液定容至刻度50ml，混匀后于6000r/min离心10min，上清液过0.22μm滤膜，得到样品溶液；将700ml乙醇和100ml盐酸加超纯水定容至1l，获得所述乙醇-盐酸-水溶液。
8、优选的，所述发芽黑小麦粉的制备方法包括：称取100g黑小麦种子，用自来水淋洗5遍，沥干后将黑小麦种子用自来水以1g：6ml的比例浸泡8h；将其沥出并置于底部有孔的发芽盒中于恒温恒湿培养箱中避光发芽，温度25℃，湿度85％；发芽期间每隔8h浇自来水1次，每次100ml；在发芽期的第5天时取样品，样品收取后置于-80℃冰箱中冷冻12h，再于真空冷冻干燥机中干燥后磨粉，即得发芽黑小麦粉。
9、优选的，步骤2中，分别称取50mg的葛根素、表儿茶素、芦丁、木犀草素、槲皮素、芹菜素、柚皮素、山奈酚、异鼠李素和查耳酮标准品，分别以色谱甲醇溶解后定容于50ml容量瓶中，制得10种1.00mg/ml的标准品母液；再分别吸取各标准品母液1.00ml于50ml容量瓶中混合，以此类推，再分别吸取各标准品母液2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00ml于4个50ml容量瓶中混合，以色谱甲醇定容，对应得到每种黄酮类化合物浓度分别为20μg/ml、40μg/ml、60μg/ml、80μg/ml、100μg/ml的混合标准品溶液，然后分别过0.22μm滤膜。
10、优选的，步骤3中，标准曲线以混合标准品溶液中每种标准品的质量浓度x为横坐标，标准品色谱峰面积y为纵坐标。
11、优选的，步骤3和4中，色谱柱：zorbax sb-c18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：流动相a为乙腈，流动相b为体积分数为0.8％的磷酸水溶液；进样量为10μl；流速0.8ml/min；检测波长为225nm；柱温25℃；梯度洗脱程序：0-5min，18％a→24％a，82％b→76％b；5-8min，24％a→36％a，76％b→64％b；8-10min，36％a→38％a，64％b→62％b；10-0min，38％a→40％a，62％b→60％b；20-20.01min，40％a→45％a，60％b→55％b；20.01-25min，45％a→65％a，55％b→35％b；25-30min，65％a→70％a，35％b→30％b；30-35min，70％a→71％a，30％b→29％b。
12、优选的，步骤4中，计算方法如下：
13、
14、式中，ω：样品中所测黄酮类化合物的含量(mg/g)；ρ：标准曲线上对应的样品溶液中被测成分的浓度(μg/ml)；v:样品溶液的定容体积(ml)；m：样品的质量(g)；f：样品溶液的稀释倍数。
15、本专利技术的发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法优化了发芽黑小麦中10种黄酮类化合物的提取方法并建立了使用hplc(即高效液相色谱仪)快速测定的方法，可以在35min内对发芽黑小麦中葛根素、表儿茶素、芦丁、木犀草素、槲皮素、芹菜素、柚皮素、山奈酚、异鼠李素、查耳酮这10种黄酮类化合物进行测定及定量。
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1.发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法，其特征在于，步骤1中，称取过60目筛的发芽黑小麦粉2.00g于50mL圆底烧瓶中，加入40mL乙醇-盐酸-水溶液，于85℃回流提取90min，冷却后转移至50mL容量瓶中，用乙醇-盐酸-水溶液定容至刻度50mL，混匀后于6000r/min离心10min，上清液过0.22μm滤膜，得到样品溶液；将700mL乙醇和100mL盐酸加超纯水定容至1L，获得所述乙醇-盐酸-水溶液。
3.根据权利要求1或2所述的发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法，其特征在于，所述发芽黑小麦粉的制备方法包括：称取100g黑小麦种子，用自来水淋洗5遍，沥干后将黑小麦种子用自来水以1g：6mL的比例浸泡8h；将其沥出并置于底部有孔的发芽盒中于恒温恒湿培养箱中避光发芽，温度25℃，湿度85％；发芽期间每隔8h浇自来水1次，每次100mL；在发芽期的第5天时取样品，样品收取后置于-80℃冰箱中冷冻12h，再于真空冷冻干燥机中干燥后磨粉，即得发芽黑小麦粉。<...
【技术特征摘要】
1.发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法，其特征在于，步骤1中，称取过60目筛的发芽黑小麦粉2.00g于50ml圆底烧瓶中，加入40ml乙醇-盐酸-水溶液，于85℃回流提取90min，冷却后转移至50ml容量瓶中，用乙醇-盐酸-水溶液定容至刻度50ml，混匀后于6000r/min离心10min，上清液过0.22μm滤膜，得到样品溶液；将700ml乙醇和100ml盐酸加超纯水定容至1l，获得所述乙醇-盐酸-水溶液。
3.根据权利要求1或2所述的发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法，其特征在于，所述发芽黑小麦粉的制备方法包括：称取100g黑小麦种子，用自来水淋洗5遍，沥干后将黑小麦种子用自来水以1g：6ml的比例浸泡8h；将其沥出并置于底部有孔的发芽盒中于恒温恒湿培养箱中避光发芽，温度25℃，湿度85％；发芽期间每隔8h浇自来水1次，每次100ml；在发芽期的第5天时取样品，样品收取后置于-80℃冰箱中冷冻12h，再于真空冷冻干燥机中干燥后磨粉，即得发芽黑小麦粉。
4.根据权利要求1所述的发芽黑小麦中多种黄酮类化合物的测定方法，其特征在于，步骤2中，分别称取50mg的葛根素、表儿茶素、芦丁、木犀草素、槲皮素、芹菜素、柚皮素、山奈酚、异鼠李素和查耳酮标准品，分别以色谱甲醇溶解后定容于50ml容量瓶中，制得10种1.00mg/ml的标准品母液；再分别吸取各标准品母液1.00ml于50ml容量瓶中混合，以此类推，再分别吸...
【专利技术属性】
技术研发人员：于章龙，刘瑞，李倩，蔡岳，李峰，宋昱，张国华，郑军，
申请(专利权)人：山西农业大学棉花研究所，
类型：发明
国别省市：
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