【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及新材料，尤其涉及一种聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法。
技术介绍
1、聚羟基脂肪酸酯(polyhydroxyalkanoate，pha)是一种新型生物可降解塑料，因其具有很好的生物兼容性、可降解性，在国家大力推广绿色环保的当下，逐渐进入到大众的日常生活中。pha的应用场景很广，目前已在吸管、一次性餐具、包装盒、3d打印等领域广泛使用，除此之外，还可以在化妆品、生物器械等领域有很大的发展前景。
2、目前工业化提取pha的方法主要采用的是水相提取法，即通过破壁、酶解、离心洗涤，将洗净后的pha乳液干燥后得到粉料产品。但由于发酵过程中会使用大量有机物、无机盐等成分，以及提取工艺相对复杂，产品在质量上会出现不稳定的现象，例如总氮超标、融化后有异味，颜色过深等，这些在后续的产品应用及市场推广上都是极为不利的。
3、造成上述不稳定的主要原因之一就是酶解不充分，及酶解后水洗不彻底。酶解不充分会导致一些蛋白、细胞碎片附着在pha上，即使后续增加水洗次数也无法将这些酶解不完全的部分洗涤干净；水洗不彻底则会导致水中的一些如蛋白质、盐类等杂质在干燥过程中附着在产品上，导致产品不合格，若洗涤次数过多，耗水量加大，生产废水加多，电能、人工成本加大，导致产品生产成本加大，不满足生产需求。且洗涤次数与料液也杂质有关，批次之间存在差异。
4、然而，目前判断细胞破碎的方法可以使用流式细胞仪、显微镜等，但该类设备昂贵，使用环境需要严格的温度环境，仅适合在实验室使用，不适用于生产线。且pha发酵使用嗜盐菌，其细胞
技术实现思路
1、若能在生产线上对酶解程度和洗净程度进行监控，及时了解酶解状态和洗涤状态，控制批次间差异，对于确保工业化提取聚羟基脂肪酸酯产品的质量稳定性和产品合格率起到关键作用。基于此，本专利技术提供一种聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，通过快速判定酶解终点，从而及时监控酶解状态，还通过快速判定水洗终点，从而在稳定聚羟基脂肪酸酯产品的质量和产品合格率的前提下，有效控制洗涤次数。
2、第一方面，本专利技术提供一种聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，包括：对源自发酵液的菌体进行酶解，所述菌体的胞内含有聚羟基脂肪酸脂；所述酶解包括将酶解剂和菌体进行混合以破坏菌体的细胞壁，进行酶解后获得包含聚羟基脂肪酸脂的提取液，以提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量作为酶解终点的判定指标。
3、根据本专利技术提供的所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，以提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量小于等于0.1％作为酶解终点。
4、根据本专利技术提供的所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，所述聚羟基脂肪酸酯干料总氮量的测试包括：
5、将提取液与水混合后进行第一固液分离，得第一沉淀；
6、将所述第一沉淀与水混合后进行第二固液分离，得第二沉淀；
7、由所述第二沉淀的总氮量确定提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量。
8、根据本专利技术提供的所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，将体积比为1:5～10的提取液与水混合后进行第一固液分离；和/或，将体积比为1:7～15的所述第一沉淀与水混合后进行第二固液分离；
9、优选地，第一固液分离采用离心法，进一步优选地，第一固液分离的离心转速为8000～12000rpm，优选9000rpm，离心时间为2～10min，优选5min；
10、和/或，第二固液分离采用离心法，进一步优选地，第二固液分离的离心转速为8000～12000rpm，优选9000rpm，离心时间为2～10min，优选5min。
11、根据本专利技术提供的所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，聚羟基脂肪酸酯干料总氮量x的计算公式如下：
12、x＝b/(1-a)；
13、其中，a为所述第二沉淀的含水率，b为所述第二沉淀的总氮量。
14、第二方面，本专利技术还提供一种聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，包括：对源自发酵液的菌体或者包含聚羟基脂肪酸脂的提取液进行水洗，所述菌体的胞内含有聚羟基脂肪酸脂；
15、所述水洗包括用液体清洗，清洗后获得包含聚羟基脂肪酸脂的水洗液，以水洗液中干重含量以及水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度作为水洗终点的判定指标。
16、根据本专利技术提供的所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，以水洗液中干重含量大于等于10％，以及水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度小于0.03g/l作为所述水洗终点；或，以水洗液中干重含量大于4％且小于10％，以及水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度小于0.015g/l作为所述水洗终点。
17、根据本专利技术提供的所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，所述水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度测试包括：在所述清液中加入考马斯亮蓝溶液反应后采用分光光度计测定其吸光度值，并由标准曲线计算得到所述水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度；所述标准曲线主要由已知蛋白浓度的蛋白液及其对应的吸光度值得到；
18、优选地，测量所述水洗液离心所得清液的吸光度值时包括：将所述水洗液在8000～12000rpm转速下离心5～15min得所述清液；在所述清液中加入考马斯亮蓝溶液反应5～30min后采用分光光度计测定其吸光度值，并由所述标准曲线计算得到水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度。
19、根据本专利技术提供的所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，所述标准曲线采用如下方法得到：
20、将磷酸盐缓冲液和考马斯亮蓝溶液混合反应5～30min作为空白对照组；按照不同比例将标准蛋白液、磷酸盐缓冲液和考马斯亮蓝溶液混合反应5～30min，形成若干组已知蛋白浓度的蛋白液；
21、采用分光光度计测定空白对照组和若干组已知蛋白浓度的蛋白液的吸光度值，绘制所述标准曲线。
22、根据本专利技术提供的所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，所述提取液包括酶解后获得的包含聚羟基脂肪酸脂的提取液；
23、优选地，所述提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量小于等于0.1％。
24、进一步优选地，所述方法包括：从发酵液中分离菌体；
25、将酶解剂和菌体进行混合以破坏菌体的细胞壁，进行酶解后获得包含聚羟基脂肪酸脂的提取液，所述酶解进行至提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量小于等于0.1％时结束酶解；
26、酶解结束后提取液进行固液分离和水洗，所述水洗包括：用液体清洗固液分离所得沉淀，清洗后获得包含聚羟基脂肪酸脂的水洗液，以水洗液中干重含量以及水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度作为水洗终点的判定指标；
27、更优选地，以水洗液中干重含量大于等于10％，以及水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度小于0.03g/l作为所述水洗终点；或，以水洗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，包括：对源自发酵液的菌体进行酶解，所述菌体的胞内含有聚羟基脂肪酸脂；所述酶解包括将酶解剂和菌体进行混合以破坏菌体的细胞壁，进行酶解后获得包含聚羟基脂肪酸脂的提取液，以提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量作为酶解终点的判定指标。
2.根据权利要求1所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，以提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量小于等于0.1％作为酶解终点。
3.根据权利要求1或2所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，所述聚羟基脂肪酸酯干料总氮量的测试包括：
4.根据权利要求3所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，将体积比为1:5～10的提取液与水混合后进行第一固液分离；和/或，将体积比为1:7～15的所述第一沉淀与水混合后进行第二固液分离；
5.根据权利要求3或4所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量X的计算公式如下：
6.一种聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，包括：
7.根据权利要求6所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，以水洗液中干重含量大于等于10％，以及水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度小于0.03g/L作为所述水洗终点；或，以水洗液中干重含量大于4％且小于10％，以及水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度小于0.015g/L作为所述水洗终点。
8.根据权利要求6或7所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，所述水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度测试包括：在所述清液中加入考马斯亮蓝溶液反应后采用分光光度计测定其吸光度值，并由标准曲线计算得到所述水洗液离心所得清液中蛋白的质量浓度；所述标准曲线主要由已知蛋白浓度的蛋白液及其对应的吸光度值得到；
9.根据权利要求8所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，所述标准曲线采用如下方法得到：
10.根据权利要求6～9中任一项所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，所述提取液包括酶解后获得的包含聚羟基脂肪酸脂的提取液；
...【技术特征摘要】
1.一种聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，包括：对源自发酵液的菌体进行酶解，所述菌体的胞内含有聚羟基脂肪酸脂；所述酶解包括将酶解剂和菌体进行混合以破坏菌体的细胞壁，进行酶解后获得包含聚羟基脂肪酸脂的提取液，以提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量作为酶解终点的判定指标。
2.根据权利要求1所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，以提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量小于等于0.1％作为酶解终点。
3.根据权利要求1或2所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，所述聚羟基脂肪酸酯干料总氮量的测试包括：
4.根据权利要求3所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，将体积比为1:5～10的提取液与水混合后进行第一固液分离；和/或，将体积比为1:7～15的所述第一沉淀与水混合后进行第二固液分离；
5.根据权利要求3或4所述聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，提取液中聚羟基脂肪酸酯干料总氮量x的计算公式如下：
6.一种聚羟基脂肪酸脂提取终点判定的检测方法，其特征在于，包括：对源...
【专利技术属性】
技术研发人员：高紫君，杨历帆，刘兴甜，杨宏宇，杨继帅，
申请(专利权)人：北京微构工场生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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