【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及包含il2和对发炎组织具有特异性的靶向部分的嵌合构建体。
技术介绍
1、白介素-2(il2或il-2)是一种调节免疫系统的关键方面的细胞因子。已尝试将il2用于增强癌症以及自身免疫疾病和/或炎性疾病患者的免疫应答。il2是一种有效的t细胞生长因子，它促进免疫应答(包括抗原激活t细胞的克隆扩增)，驱动cd4+辅助性t细胞(th)1和th2细胞的发育，最终分化cd8+细胞毒性t淋巴细胞(ctl)并抑制cd4+th17和滤泡辅助性t细胞(tfh)的发育。il2还塑造t细胞记忆召回应答。
2、已使用低剂量的il2选择性地增强耐受性，以抑制与自身组织的自身免疫样攻击相关的不需要的免疫应答。迄今为止的经验表明，这种疗法是安全的，没有迹象表明会再激活自身攻击性t细胞，同时几乎所有患者的调节性t细胞(treg)都会增加，伴随临床改善。
3、尽管如此，可以对作为治疗剂的il2进行改善。值得注意的是，需要通过使il2靶向目标组织，从而局部增加目标组织处的浓度来改善治疗功效。还需要提供具有靶向特异性的il-2构建体，以限制与无处不在的能够响应于il-2而被激活的淋巴细胞群体有关的潜在“脱靶”效应。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种对炎性组织具有靶向特异性的il2嵌合构建体。
2、令人惊讶地，专利技术人已经证明这些靶向嵌合构建体显著改善了il2治疗的功效。特别地，本专利技术的专利技术人已经证明，使用本专利技术的靶向嵌合构建体导致被征募到炎性部位的tr
3、具体地，本专利技术的嵌合构建体包含(i)至少一个白介素2部分；和ii)至少一个靶向部分，所述靶向部分结合氧化蛋白质或氧化脂质，如促炎性氧化蛋白质或氧化脂质。
4、在一个优选实施方式中，所述靶向部分结合氧化特异性表位(ose)。
5、在一个特定的实施方式中，所述靶向部分结合(i)丙二醛(mda)表位，(ii)2-(ω-羧基乙基)吡咯(cep)表位，(iii)4-羟基壬烯醛(4-hne)表位，或(iv)氧化磷脂(oxpl)如含磷酸胆碱的氧化磷脂(pc-oxpl)、氧化磷脂酰乙醇胺(oxpe)、氧化磷脂酰丝氨酸(oxps)或氧化心磷脂(oxcl)，优选含磷酸胆碱的氧化磷脂(pc-oxpl)。
6、在一个特定的实施方式中，所述靶向部分是抗体或抗体片段，如单链可变片段(scfv)。
7、在一个特定的实施方式中，所述靶向部分选自：e06抗体或e06抗体片段，如e06scfv；lr04抗体或lr04抗体片段，如lr04 scfv；na17抗体或na17抗体片段，如na17 scfv；e014抗体或e014抗体片段，如e014 scfv；mda2抗体或mda2抗体片段，如mda2 scfv；ik17抗体或ik17抗体片段，如ik17 scfv；lr01抗体或lr01抗体片段，如lr01 scfv，及其功能变体。
8、在一个优选实施方式中，所述靶向部分是e06抗体或e06抗体片段，如e06 scfv，或其功能变体。在一个特定的实施方式中，所述e06scfv包含：
9、-包含如seq id no:12中所示的氨基酸序列或者与seq id no:12具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的氨基酸序列的可变重链(vh)结构域；以及
10、-包含如seq id no:11中所示的氨基酸序列或者与seq id no:11具有至少75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或至少99％同一性的氨基酸序列的可变轻链(vl)结构域。
11、在一个特定的实施方式中，所述il-2部分是人il-2或其同源变体，其中所述变体与人野生型il-2具有至少85％氨基酸同一性，优选其中所述变体是与人野生型il-2具有至少90％氨基酸同一性的人il-2活性类似物，其中所述il-2部分优选是在seq id no:2的n88位上包含取代，更优选包含取代n88r或n88d的il2突变蛋白。
12、在一个特定的实施方式中，所述il2部分和所述靶向部分框内融合或通过氨基酸接头，优选通过polyg接头融合。
13、在一个特定的实施方式中，所述嵌合构建体还包含能够形成二聚体蛋白质的c4b结合蛋白的β链(c4bpβ)或其至少一个片段或功能变体。
14、在一个特定的实施方式中，c4bpβ片段包含c4bpβ的氨基酸残基194至252或c4bpβ的在n端至多延伸到氨基酸135的较长片段，或者由其组成。
15、在一个特定的实施方式中，所述嵌合构建体包含c4bpβ的功能变体，所述功能变体包含：
16、a)所述c4bpβ片段的修饰序列，其中所述片段中少于25％、优选少于10％的氨基酸被切掉或替换，其中位于202位和216位的半胱氨酸以及每个半胱氨酸上游和下游的至少3个氨基酸得以保留；或
17、b)所述c4bpβ片段的修饰序列，其中负责二聚的半胱氨酸被优选选自丙氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和色氨酸的氨基酸取代，所述片段的另一个氨基酸被半胱氨酸取代；或
18、c)通过在负责二聚的半胱氨酸之间插入与β链异源的序列进行修饰的c4bpβ片段的序列；或
19、d)通过切掉负责二聚的半胱氨酸之间的氨基酸进行修饰的c4bpβ片段的序列。
20、在一个特定的实施方式中，所述il-2部分融合在c4bpβ或其所述片段的n端，其中c4bpβ或其所述片段的c端优选与靶向部分融合。
21、在一个特定的实施方式中，所述嵌合构建体是二聚体形式，其中所述单体通过c4bpβ的两个半胱氨酸之间的共价键合相关联。下面更详细描述了同二聚体和异二聚体。
22、本专利技术的另一个方面涉及一种编码本专利技术的嵌合构建体的核酸。本专利技术还涉及一种包含所述核酸的载体，以及一种包含所述核酸或所述载体的宿主细胞。
23、本专利技术还涉及本专利技术的嵌合构建体，其用于治疗自身免疫疾病和/或炎性疾病。
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1.一种嵌合构建体，其包含：
2.根据权利要求1所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分结合促炎性氧化蛋白质或氧化脂质。
3.根据权利要求1或2所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分结合氧化特异性表位(OSE)。
4.根据前述权利要求中的任一项所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分结合(i)丙二醛(MDA)表位，(ii)2-(ω-羧基乙基)吡咯(CEP)表位，(iii)4-羟基壬烯醛(4-HNE)表位，或(iv)氧化磷脂(OxPL)如含磷酸胆碱的氧化磷脂(PC-OxPL)、氧化磷脂酰乙醇胺(OxPE)、氧化磷脂酰丝氨酸(OxPS)或氧化心磷脂(OxCL)，优选含磷酸胆碱的氧化磷脂(PC-OxPL)。
5.根据前述权利要求中的任一项所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分是抗体或抗体片段，如单链可变片段(scFv)，优选其中所述靶向部分选自：E06抗体或E06抗体片段，如E06scFv；LR04抗体或LR04抗体片段，如LR04 scFv；NA17抗体或NA17抗体片段，如NA17 scFv；E014抗体或E014抗体片段，如E014 scFv；MDA2
6.根据权利要求5所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分是E06scFv或其变体，所述E06scFv或其变体包含：
7.根据前述权利要求中的任一项所述的嵌合构建体，其中所述IL-2部分是人IL-2或其同源变体，其中所述变体与人野生型IL-2具有至少85％氨基酸同一性，优选其中所述变体是与人野生型IL-2具有至少90％氨基酸同一性的人IL-2活性类似物，其中所述IL-2部分优选是在SEQ ID NO:2的N88位上包含取代，更优选包含取代N88R或N88D的IL2突变蛋白。
8.根据前述权利要求中的任一项所述的嵌合构建体，其中所述IL2部分和所述靶向部分框内融合或通过氨基酸接头，优选通过polyG接头融合。
9.根据前述权利要求中的任一项所述的嵌合构建体，所述嵌合构建体还包含能够形成二聚体蛋白质的C4b结合蛋白的β链(C4BPβ)或其至少一个片段或功能变体，优选其中C4BPβ片段包含C4BPβ的氨基酸残基194至252或C4BPβ的在N端至多延伸到氨基酸135的较长片段，或者由其组成。
10.根据权利要求9所述的嵌合构建体，其包含C4BPβ的功能变体，所述功能变体包含：
11.根据权利要求9或10中任一项所述的嵌合构建体，其中所述IL-2部分融合在C4BPβ或其所述片段的N端，其中C4BPβ或其所述片段的C端优选与所述靶向部分连接。
12.一种核酸，其编码根据权利要求1至11中任一项所述的嵌合构建体。
13.一种载体，其包含根据权利要求12所述的核酸。
14.一种宿主细胞，其包含根据权利要求12所述的核酸或根据权利要求13所述的载体。
15.根据权利要求1至11中的任一项所述的嵌合构建体，其用于治疗自身免疫疾病和/或炎性疾病。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种嵌合构建体，其包含：
2.根据权利要求1所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分结合促炎性氧化蛋白质或氧化脂质。
3.根据权利要求1或2所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分结合氧化特异性表位(ose)。
4.根据前述权利要求中的任一项所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分结合(i)丙二醛(mda)表位，(ii)2-(ω-羧基乙基)吡咯(cep)表位，(iii)4-羟基壬烯醛(4-hne)表位，或(iv)氧化磷脂(oxpl)如含磷酸胆碱的氧化磷脂(pc-oxpl)、氧化磷脂酰乙醇胺(oxpe)、氧化磷脂酰丝氨酸(oxps)或氧化心磷脂(oxcl)，优选含磷酸胆碱的氧化磷脂(pc-oxpl)。
5.根据前述权利要求中的任一项所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分是抗体或抗体片段，如单链可变片段(scfv)，优选其中所述靶向部分选自：e06抗体或e06抗体片段，如e06scfv；lr04抗体或lr04抗体片段，如lr04 scfv；na17抗体或na17抗体片段，如na17 scfv；e014抗体或e014抗体片段，如e014 scfv；mda2抗体或mda2抗体片段，如mda2 scfv；ik17抗体或ik17抗体片段，如ik17 scfv；lr01抗体或lr01抗体片段，如lr01 scfv，及其功能变体。
6.根据权利要求5所述的嵌合构建体，其中所述靶向部分是e06scfv或其变体，所述e06scfv或其变体包含：
7.根据前述权利要求中的任一项所述的嵌合构建体，其中所述il-2...
【专利技术属性】
技术研发人员：大卫·克拉茨曼，艾莲·泰德古伊，托马斯·瓦兹奎兹，尼古拉斯·比里尔德，
申请(专利权)人：艾尔图制药公司，
类型：发明
国别省市：
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