【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及宠物食品消化检测，尤其是涉及一种体外胃蛋白酶消化率测定方法及在宠物食品测定中的应用。
技术介绍
1、饲料消化率是饲料能够被动物机体所消化吸收的真实反映，是验证饲料质量的重要指标之一。随着养宠人数的不断增加，人们对宠物饲粮产品的关注度逐渐加深，宠物食品中的蛋白质含量逐渐成为宠主判断一款产品优劣的关键指标之一。目前胃蛋白酶消化率评价饲料蛋白质量的方法已经被人们普遍认可，测定方法一般都是根据国家标准gb/t17811-2008胃蛋白酶消化率测定法(过滤法)进行。该方法为：已脱脂的试样用温热的胃蛋白酶在恒温、持续不断的振摇条件下作用16h水解蛋白质，过滤分离不溶性残渣，测定残渣的粗蛋白质含量，同时测定脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量，通过蛋白质酶解程度计算消化率。计算公式如下：
2、消化率＝(脱脂未酶解样品粗蛋白质含量—脱脂酶解样品残渣粗蛋白质含量)/脱脂未酶解样品粗蛋白质含量×100％。
3、上述检测方式具有标准化程度高、易于本领域技术人员理解和操作的优点，但在实际使用过程中，现有技术所用的体外胃蛋白酶测定法(国家标准法)存在以下问题：
4、1、过滤法操作繁琐，滤纸的质量、使用方式均可能导致实验的误差；过滤时间长，样品过滤时间在30min-1h不等，不能适应实际生产中的快速测定要求，时间、人工成本较高；
5、2、易制毒试剂的使用如丙酮等，增加试剂管控成本和实验室安全风险；
6、3、国标法胃蛋白酶消化率与实际动物消化结果直接相关性不高。根据国标法《gb/t 17811
技术实现思路
1、针对现有技术不足，本专利技术提供了一种可有效提高体外模拟胃蛋白酶消化率检测结果准确性及与体内消化率相关性的宠物食品体外胃蛋白酶消化率测定方法。
2、本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：
3、一种体外胃蛋白酶消化率测定方法，包括以下步骤：
4、(1)待测样品处理：将样品粉碎混匀为试样，保存备用；
5、(2)脱脂：将试样进行脱脂处理，脱脂后自然风干；
6、(3)胃蛋白酶消化：称取一定量已脱脂风干后的试样于滤袋中，放入带盖消化瓶中，加配制好的并已预热的胃蛋白酶溶液，盖紧瓶盖，将消化瓶置于体外培养箱内恒温搅动进行保温酶解消化；
7、(4)消化残渣的处理：分别于消化后2h、4h、6h、8h、10h、16h取出滤袋，将滤袋置于烧杯中，加入蒸馏水，放置于振荡器洗涤2次后，将滤袋取出；
8、(5)粗蛋白质的测定：测定上述滤袋残渣的粗蛋白质的质量分数，同时，称取脱脂风干的样品测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数；
9、试样胃蛋白酶消化率x，以质量分数计，数值以％表示，按式(1)计算：
10、x＝(w1-w2)/w1×100…………………………(1)
11、式中：w1为脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数(％)，w2为脱脂酶解后残渣中粗蛋白质的质量分数(％)；
12、(6)根据不同消化时间的胃蛋白酶消化率绘制消化率曲线。
13、进一步地，步骤(1)中所述的粉碎后的试样的粒径为0.6-0.84mm。
14、进一步地，步骤(2)中所述的脱脂处理为，将盛有试样的滤袋放入石油醚中浸泡多次，直至液体呈无色或淡黄色。
15、进一步地，步骤(3)中所述的胃蛋白酶消化的处理工艺为：将装有试样的滤袋放入带盖消化瓶中，加新配制并已预热至42℃-45℃的胃蛋白酶溶液，确保试样完全被胃蛋白酶溶液浸湿，盖紧瓶盖，将消化瓶置于体外培养箱内，于45℃恒定速度搅动进行保温酶解消化。
16、进一步地，所述胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的浓度为20iu/ml。
17、进一步地，所述滤袋内试样的质量为2-3g。
18、进一步地，步骤(5)中，所述粗蛋白质的测定中，对每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，平行测定残渣粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果，测定结果的相对偏差≤6％。
19、进一步地，步骤(6)中，所述体外胃蛋白酶消化率测定方法中，根据犬猫消化生理特点，确定体外胃蛋白酶消化酶解的时间点为2h、4h、6h、8h；其中犬胃排空1/2的时间1.2-4h，猫胃排空1/2的时间0.36-7.5h。
20、进一步地，本专利技术同时提供了所述体外胃蛋白酶消化率测定方法在宠物食品测定中的应用。
21、与现有技术相比，本专利技术的技术效果为：
22、本专利技术为根据宠物的消化生理特点设计的测定方法，应用体外培养箱设备，不仅提高了实验效率，降低实验试剂管控成本，而且针对宠物这一靶动物特点调整了实验参数，提高体外模拟胃蛋白酶消化率检测结果的准确性及与体内消化率的相关性。
23、1、本专利技术应用体外培养箱替代恒温摇床，提供360°旋转，胃蛋白酶充分接触样品实现全面消化的环境；而且体外培养箱一次可完成80个样品的检测工作，可进行大批量检测，省时省力，符合实际生产的需求；
24、2、本专利技术使用滤袋消化法替代国标法过滤方式，滤袋品质均一度高，具有通透性强、不易破损、耐酸碱腐蚀、耐高温等特性，使用滤袋进行胃蛋白酶消化的好处为：①采用滤袋盛装样品进行消化洗涤，残渣直接由滤袋获得，简便快捷，减少操作误差，缩短操作时间，人工成本减少。②装有消化残渣的滤袋，经蒸馏水洗涤后放入凯氏定氮仪进行粗蛋白质的测定，节省烘干残渣的时间。
25、3、本专利技术根据犬猫的实际胃排空时间设计测定时间，将胃蛋白酶消化时间调整为2h、4h、6h、8h、10h、16h分别测试样品的胃蛋白酶消化率，与国标法测量相比较，同时绘制胃蛋白酶消化曲线，更加清晰地体现不同样品在不同时间胃蛋白酶消化程度的差异；结合胃蛋白酶消化的不同时间检测消化率结果，大幅度缩短胃蛋白酶液消化的时间，提高了检测效率；
26、4、本专利技术的检测方法应用蒸馏水冲洗消化后滤袋的方式替代丙酮试剂，减少了试剂成本，避免使用易制毒试剂，增加了实验的安全系数。
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1.一种体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于：步骤(1)中所述的粉碎后的试样的粒径为0.6-0.84mm。
3.根据权利要求1所述的体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于：步骤(4)中所述的消化后2h、4h、6h、8h、10h、16h取出滤袋，将滤袋置于烧杯中，加入蒸馏水放置于振荡器洗涤2次。
4.根据权利要求1所述的体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于：步骤(3)中所述的胃蛋白酶消化的处理工艺为：将装有试样的滤袋放入带盖消化瓶中，加新配制并已预热至42℃-45℃的胃蛋白酶溶液，确保试样完全被胃蛋白酶溶液浸湿，盖紧瓶盖，将消化瓶置于体外培养箱内，于45℃恒定速度搅动进行保温酶解消化。
5.根据权利要求4所述的体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于：所述胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶的浓度为20IU/mL。
6.根据权利要求4所述的体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于：所述滤袋内试样的质量为2-3g。
7.根据权利要求1所述的体外胃蛋
8.权利要求1-7任一项所述的体外胃蛋白酶消化率测定方法在宠物食品测定中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于：步骤(1)中所述的粉碎后的试样的粒径为0.6-0.84mm。
3.根据权利要求1所述的体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于：步骤(4)中所述的消化后2h、4h、6h、8h、10h、16h取出滤袋，将滤袋置于烧杯中，加入蒸馏水放置于振荡器洗涤2次。
4.根据权利要求1所述的体外胃蛋白酶消化率测定方法，其特征在于：步骤(3)中所述的胃蛋白酶消化的处理工艺为：将装有试样的滤袋放入带盖消化瓶中，加新配制并已预热至42℃-45℃的胃蛋白酶溶液，确保试样完全被胃蛋白酶溶液浸湿，盖紧...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘耀庆，陈若楠，李红梅，温敏，
申请(专利权)人：乖宝宠物食品集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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