本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了一种亚精胺抑制核糖体RNA合成的应用，首先获得稳定表达的GFP‑TP53INP2的细胞系，再利用亚精胺处理细胞，最后检测亚精胺对rDNA转录的影响。本发明专利技术提供了亚精胺的一种新用途，即亚精胺抑制核糖体RNA合成，基于此应用于抗肿瘤。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，尤其涉及一种亚精胺抑制核糖体rna合成的方法及其应用。
技术介绍
1、亚精胺(spermidine)，又称三盐酸亚精胺、精脒、n-(3-氨基丙基)-1,4-丁二胺，是一种多胺。亚精胺的化学式为c7h19n3。亚精胺广泛分布在生物体内，是由腐胺(丁二胺)和腺苷甲硫氨酸生物合成的。亚精胺可抑制神经元合成酶，结合并沉淀dna；也可用于纯化dna结合蛋白，刺激t4聚核苷酸激酶活性。
2、亚精胺作为一种生物胺类化合物，具有广泛的应用前景，但目前存在一些技术缺陷和需要解决的技术问题，包括：
3、1.产量低：目前，亚精胺的生物合成方法仍然依赖于传统的微生物发酵或化学合成方法，产量较低，难以满足大规模生产的需求。
4、2.纯度低：目前亚精胺的分离纯化技术仍然存在着一些问题，导致亚精胺的纯度较低，难以满足应用要求。
5、3.缺乏有效的药物递送系统：尽管亚精胺具有多种生物活性，但由于其分子量较大，难以通过细胞膜，因此缺乏有效的药物递送系统，限制了其在医药领域的应用。
6、4.缺乏完整的生物学作用机制：尽管亚精胺已被广泛研究，但其完整的生物学作用机制仍然不完全清楚，限制了其在应用中的发挥。
7、综上所述，亚精胺的生产、纯化、递送与作用机制等方面仍然存在一些技术缺陷和问题，需要进一步的研究和解决。
技术实现思路
1、针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种亚精胺抑制核糖体rna合成的方法及其应用。
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p>2、本专利技术是这样实现的，一种亚精胺抑制核糖体rna合成的方法，亚精胺抑制核糖体rna合成的方法包括：获得稳定表达的gfp-tp53inp2的细胞系；利用亚精胺处理细胞；检测亚精胺对rdna转录的影响。3、进一步，亚精胺抑制核糖体rna合成的方法包括以下步骤：
4、步骤一，在mef细胞中表达gfp-tp53inp2，利用抗生素g418进行筛选，获得稳定表达的gfp-tp53inp2的细胞系；
5、步骤二，在正常细胞培养条件下，利用亚精胺处理细胞，在荧光显微镜下观察gfp-tp53inp2的亚细胞定位；
6、步骤三，利用适宜技术检测亚精胺对rdna转录的影响。
7、进一步，步骤三中利用荧光定量pcr技术，检测亚精胺对细胞rdna转录产物47srna含量的影响。
8、进一步，步骤三中利用荧光素酶报告系统，检测亚精胺对rdna启动子活性的影响。
9、进一步，步骤三中利用蛋白质免疫共沉淀和蛋白分子筛技术，检测亚精胺对rna聚合酶i转录起始复合物组装的影响。
10、进一步，步骤三中检测亚精胺对细胞内rdna转录相关信号通路的影响，如mtor信号通路和ampk信号通路等。
11、本专利技术的另一目的在于提供一种亚精胺的抗肿瘤作用。具体包括利用不同的肿瘤细胞系，检测亚精胺对新生蛋白质合成速率的影响；检测亚精胺对肿瘤细胞生长增殖的影响。
12、结合上述的技术方案和解决的技术问题，本专利技术所要保护的技术方案所具备的优点及积极效果为：
13、第一，本专利技术提供了一种亚精胺抑制核糖体rna合成的新用途，具体方法包括：获得稳定表达的gfp-tp53inp2的细胞系；利用亚精胺处理细胞；检测亚精胺对rdna转录的影响。
14、这个方法描述了使用亚精胺来抑制核糖体rna(rdna)的合成，并具体依赖于稳定表达gfp-tp53inp2的细胞系作为一个模型系统。每个步骤的显著技术进步：
15、1)获得稳定表达的gfp-tp53inp2的细胞系：
16、显著技术进步：通过创建一个标记有绿色荧光蛋白(gfp)的tp53inp2蛋白，实验者可以直观地在活细胞中观察到tp53inp2蛋白的定位和表达。这意味着可以实时观察到蛋白的动态，无需进行复杂的细胞固定或染色步骤。此外，稳定表达系统确保了所有细胞都有相似的表达水平，从而增加了实验的可靠性。
17、2)利用亚精胺处理细胞：
18、显著技术进步：亚精胺作为一种众所周知的化合物，其对细胞生物学的多种过程有所影响。在这里，利用亚精胺专门针对rdna转录的抑制效应，提供了一种有效的策略来评估该药物如何干扰核糖体的合成。
19、3)检测亚精胺对rdna转录的影响：
20、显著技术进步：通过检测亚精胺如何影响rdna转录，该方法为我们提供了一种策略来更深入地理解药物对细胞核糖体合成的具体影响。而核糖体合成是细胞增殖和生长的关键过程，因此这一研究不仅在基础生物学上具有重要意义，而且在制药和治疗领域也具有潜在的价值。
21、总的来说，这个方法提供了一种简洁、直接和特异性的方式来研究亚精胺对核糖体rna合成的影响，利用了现代分子生物学技术，并为更深入的药物作用机制研究奠定了基础。
22、第二，本专利技术提供了一种亚精胺抑制核糖体rna合成的新用途，基于亚精胺抑制核糖体rna合成的用途应用于抑制肿瘤细胞增殖。
23、第三，作为本专利技术的权利要求的创造性辅助证据，还体现在以下几个重要方面：
24、(1)本专利技术的技术方案转化后的预期收益和商业价值为：
25、本专利技术提供的亚精胺的潜在抗肿瘤作用：
26、根据该方法，亚精胺具有抑制核糖体rna合成的能力，这可能会导致细胞生长和增殖的抑制，这一特性为其提供了潜在的抗肿瘤作用。具有这样活性的化合物可能为新的抗肿瘤治疗提供一个有价值的途径，尤其是在其他治疗方法无效或产生耐药的情况下。
27、(2)本专利技术的技术方案填补了国内外业内技术空白：
28、在当前的文献和研究中，使用亚精胺来针对核糖体rna合成并结合gfp-tp53inp2标记的策略尚未被广泛报道。因此，该方法为核糖体生物学和肿瘤治疗领域提供了新的研究工具和策略。
29、(3)本专利技术的技术方案是否解决了人们一直渴望解决、但始终未能获得成功的技术难题：
30、肿瘤的治疗一直是医学领域的挑战。通过提出新的机制和策略，如使用亚精胺来抑制核糖体rna的合成，本专利技术可能为难以治疗的肿瘤或对其他治疗方法产生耐药的肿瘤提供了新的治疗途径。
31、(4)本专利技术的技术方案是否克服了技术偏见：
32、在核糖体rna合成的研究中，研究者可能之前未考虑亚精胺作为一个潜在的调节因子。此外，结合使用gfp-tp53inp2作为一种细胞内标记可能也被视为非传统的策略。因此，本专利技术的技术方案成功地克服了现有的技术偏见，采用了一种新的和创新的方法来研究和抑制核糖体rna的合成。
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【技术保护点】
1.一种亚精胺抑制核糖体RNA合成的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的亚精胺抑制核糖体RNA合成的方法，其特征在于，亚精胺抑制核糖体RNA合成的方法包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的亚精胺抑制核糖体RNA合成的方法，其特征在于，步骤三中利用荧光定量PCR技术，检测亚精胺对细胞rDNA转录产物47S RNA含量的影响。
4.如权利要求2所述的亚精胺抑制核糖体RNA合成的方法，其特征在于，步骤三中利用荧光素酶报告系统，检测亚精胺对rDNA启动子活性的影响。
5.如权利要求2所述的亚精胺抑制核糖体RNA合成的方法，其特征在于，步骤三中利用蛋白质免疫共沉淀和蛋白分子筛技术，检测亚精胺对RNA聚合酶I转录起始复合物组装的影响。
6.如权利要求2所述的亚精胺抑制核糖体RNA合成的方法，其特征在于，步骤三中检测亚精胺对细胞内rDNA转录相关信号通路的影响，如mTOR信号通路和AMPK信号通路等。
7.如权利要求1～6任意一项所述的亚精胺抑制核糖体RNA合成的方法在抗肿瘤作用的应用。
8.如权利要求7所述的亚精胺抑制核糖体RNA合成的方法在抗肿瘤作用的应用，其特征在于，具体包括利用不同的肿瘤细胞系，检测亚精胺对新生蛋白质合成速率的影响；检测亚精胺对肿瘤细胞生长增殖的影响。
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【技术特征摘要】
1.一种亚精胺抑制核糖体rna合成的方法，其特征在于，包括：
2.如权利要求1所述的亚精胺抑制核糖体rna合成的方法，其特征在于，亚精胺抑制核糖体rna合成的方法包括以下步骤：
3.如权利要求2所述的亚精胺抑制核糖体rna合成的方法，其特征在于，步骤三中利用荧光定量pcr技术，检测亚精胺对细胞rdna转录产物47s rna含量的影响。
4.如权利要求2所述的亚精胺抑制核糖体rna合成的方法，其特征在于，步骤三中利用荧光素酶报告系统，检测亚精胺对rdna启动子活性的影响。
5.如权利要求2所述的亚精胺抑制核糖体rna合成的方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：许银丰，万伟，陈颖卓，申柳，杨洁，岳杰宇，
申请(专利权)人：湖南第一师范学院，
类型：发明
国别省市：
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