【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫领域，特别是靶向kras g12突变的t细胞受体(tcr)，及其用途，特别是在预防、治疗或检测kras突变阳性疾病和/或病症中的用途。
技术介绍
1、ras基因家族包含nras、hras和kras三个基因，其编码的是一种小型gtpase膜结合蛋白，在细胞生长调节的信号转导中起主要作用。ras在细胞信号转导过程中发挥核心作用：在分子水平上可以调控转录、翻译等过程，在细胞水平上可以调节细胞增殖、分化、衰老、凋亡等等。
2、早在1982年，研究者们在人类膀胱癌细胞中发现了突变的ras基因，这使ras成为首个被发现的人类肿瘤基因。其中，kras基因对人类癌症影响最大，在激活状态下，kras将来自细胞表面受体的上游信号传递给下游途径，以控制正常的细胞功能和增殖。kras最常见的激活方式为点突变，是实体肿瘤中最常见的突变之一，位点几乎都集中在2号外显子的第12位密码子上，最常见的类型是g12d，g12v和g12c。
3、尽管kras突变在肿瘤中的重要作用已经得到了广泛共识，但是至今尚无靶向kras的药物获批上市。近年，专门针对kras g12c突变的新型药物取得了一些进展：靶向kras的小分子药物可直接抑制kras蛋白活性。kras蛋白广泛表达，随意抑制野生型和突变型kras蛋白可能会产生不可接受的毒性。直接抑制kras活性的另一种方法为干扰kras与脂膜外围结合，同样因为不太可能区分突变型蛋白与野生型蛋白，导致潜在的毒性问题。kras蛋白可调节众多下游效应分子，主要有raf/mek/erk和pi3
4、大量研究结果提示kras突变抗原表位是一个可被tcr高效识别的靶点，kras突变抗原特异性tcr是一个值得期待的治疗kras突变实体瘤的手段，开发kras突变抗原特异性tcr-t产品具有重要的临床意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种新型抗原结合蛋白，其特异性结合kras g12突变抗原，特别是kras g12v突变表位或所述表位与mhc分子的复合物，例如kras g12v突变表位与hla-a*11的复合物。本公开的抗原结合蛋白可以是tcr或其抗原结合片段的形式。本公开的抗原结合蛋白能够以高亲和力结合靶抗原肽，在细胞膜上具有良好的表达稳定性，并且能够介导效应细胞对抗原阳性靶细胞的特异性杀伤作用，且对不同分型的hla不具有同种异体反应。
2、相应地，在一方面，本公开提供了一种抗原结合蛋白，其包含t细胞受体(tcr)α链可变区和tcrβ链可变区，其中所述tcrα链可变区包含具有以下氨基酸序列的cdr3：vvpggtgggnklt(seq id no:3)，或者插入、缺失或取代一个或几个氨基酸所形成的功能变体，其中所述抗原结合蛋白结合包含氨基酸序列vvgavgvgk(seq id no:11)的表位或所述表位与mhc分子的复合物。
3、在另一方面，本公开提供了一种抗原结合蛋白，其包含t细胞受体(tcr)α链可变区和tcrβ链可变区，其中所述tcrβ链可变区包含具有以下氨基酸序列的cdr3：asshwgaqetqy(seq id no:8)，或者插入、缺失或取代一个或几个氨基酸所形成的功能变体，其中所述抗原结合蛋白结合包含氨基酸序列vvgavgvgk(seq id no:11)的表位或所述表位与mhc分子的复合物。
4、在又一方面，本公开提供了一种抗原结合蛋白，其包含t细胞受体(tcr)α链可变区和tcrβ链可变区，其中所述tcrα链可变区包含具有以下氨基酸序列的cdr3：vvpggtgggnklt(seq id no:3)，或者插入、缺失或取代一个或几个氨基酸所形成的功能变体；并且所述tcrβ链可变区包含具有以下氨基酸序列的cdr3：asshwgaqetqy(seq id no:8)，或者插入、缺失或取代一个或几个氨基酸所形成的功能变体，其中所述抗原结合蛋白结合包含氨基酸序列vvgavgvgk(seq id no:11)的表位或所述表位与mhc分子的复合物。
5、在一些实施方案中，所述mhc分子为hla-a*11型，例如，hla-a*11:01。
6、在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白能以小于或等于约1.0*10^-7m的ec50与靶抗原肽结合。
7、在一些实施方案中，所述tcrα链可变区包含具有如seq id no:3所示的氨基酸序列的cdr3，和/或所述tcrβ链可变区包含具有如seq id no:8所示的氨基酸序列的cdr3。
8、在一些实施方案中，所述tcrα链可变区包含分别具有如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3，或者插入、缺失或取代一个或几个氨基酸所形成的功能变体；和/或所述tcrβ链可变区包含分别具有如seq id no:6、seqidno:7和seq id no:8所示的氨基酸序列的β链cdr1、cdr2和cdr3，或者插入、缺失或取代一个或几个氨基酸所形成的功能变体。
9、在另一方面，本公开提供了一种抗原结合蛋白，其包含t细胞受体(tcr)α链可变区和tcrβ链可变区，其中所述tcrα链可变区包含分别具有如seq id no:1、seq id no:2和seqidno:3所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；和/或所述tcrβ链可变区包含分别具有如seq id no:6、seq id no:7和seq id no:8所示的氨基酸序列的β链cdr1、cdr2和cdr3。
10、在一些实施方案中，所述tcrα链可变区包含分别具有如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；并且所述tcrβ链可变区包含分别具有如seq id no:6、seq id no:7和seq id no:8所示的氨基酸序列的β链cdr1、cdr2和cdr3。
11、在本公开的抗原结合蛋白的一些实施方案中，所述tcrα链可变区包含与seq idno:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述tcrβ链可变区包含与seq id no:9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
12、在一些实施方案中，所述tcrα链可变区包含与seq id no:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且所述tcrβ链可变区包含与seq idno:9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
13、在一些实施方案中，所述tcrα链可变区包含如seq id no:4所示的氨基酸序列，和/或所述tcrβ链可变区包含如seq id本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗原结合蛋白，其包含T细胞受体(TCR)α链可变区和TCRβ链可变区，其中所述TCRα链可变区包含分别具有如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3；和/或所述TCRβ链可变区包含分别具有如SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的β链CDR1、CDR2和CDR3。
2.根据权利要求1的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白具有下述性质中的一种或多种：
3.根据权利要求1或2的抗原结合蛋白，其中所述TCRα链可变区包含与SEQ ID NO:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述TCRβ链可变区包含与SEQ ID NO:9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；
4.根据权利要求1-3中任一项的抗原结合蛋白，其中所述TCRα链可变区包含在第一多肽上，并且所述TCRβ链可变区包含在不同的第二多肽上；或
5.根据权
6.根据权利要求1-5中任一项的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白选自TCR、嵌合抗原受体(CAR)、Fc多肽、或它们的抗原结合片段；
7.根据权利要求6的抗原结合蛋白，其中所述TCRα链恒定区包含与SEQ ID NO:14-19中的任一项具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述TCRβ链恒定区包含与SEQ ID NO:21-30中的任一项具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；
8.根据权利要求6或7的抗原结合蛋白，所述抗原结合蛋白还包含跨膜区和/或胞质区；和/或
9.根据权利要求1-8中任一项的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白包含以下的TCRα链：其包含与选自SEQ ID NO:32-37中的任一项具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；和/或以下的TCRβ链：其包含与选自SEQ ID NO:38-47中的任一项具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列。
10.一种核酸，其编码根据权利要求1-9中任一项的抗原结合蛋白；
11.一种载体，其包含根据权利要求10的核酸；
12.一种细胞，其包含根据权利要求1-9中任一项的抗原结合蛋白、根据权利要求10的核酸、或根据权利要求11的载体。
13.一种制备权利要求12的细胞的方法，其包括用权利要求11的载体转导或转染细胞的步骤；
14.一种偶联物，其包含根据权利要求1-9中任一项的抗原结合蛋白和与所述抗原结合蛋白偶联或缀合的活性剂；
15.一种组合物，其包含根据权利要求1-9中任一项的抗原结合蛋白、根据权利要求10的核酸、根据权利要求11的载体、根据权利要求12的细胞、或根据权利要求13的方法制备的细胞；
16.一种试剂盒，其包含根据权利要求1-9中任一项的抗原结合蛋白或根据权利要求14的偶联物，所述试剂盒用于检测待测样品中阳性表位的存在，其中，所述表位为包含VVGAVGVGK(SEQ ID NO:11)的表位。
17.根据权利要求1-9中任一项的抗原结合蛋白、根据权利要求10的核酸、根据权利要求11的载体、根据权利要求12的细胞、根据权利要求13的方法制备的细胞、权利要求14的偶联物、或权利要求15的组合物在制备用于治疗和/或预防受试者中KRAS突变阳性疾病和/或病症的药物中的用途；
...【技术特征摘要】
1.一种抗原结合蛋白，其包含t细胞受体(tcr)α链可变区和tcrβ链可变区，其中所述tcrα链可变区包含分别具有如seq id no:1、seq id no:2和seq id no:3所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；和/或所述tcrβ链可变区包含分别具有如seq id no:6、seq id no:7和seq id no:8所示的氨基酸序列的β链cdr1、cdr2和cdr3。
2.根据权利要求1的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白具有下述性质中的一种或多种：
3.根据权利要求1或2的抗原结合蛋白，其中所述tcrα链可变区包含与seq id no:4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述tcrβ链可变区包含与seq id no:9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；
4.根据权利要求1-3中任一项的抗原结合蛋白，其中所述tcrα链可变区包含在第一多肽上，并且所述tcrβ链可变区包含在不同的第二多肽上；或
5.根据权利要求1-4中任一项的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白是可溶的或膜结合的；和/或
6.根据权利要求1-5中任一项的抗原结合蛋白，其中所述抗原结合蛋白选自tcr、嵌合抗原受体(car)、fc多肽、或它们的抗原结合片段；
7.根据权利要求6的抗原结合蛋白，其中所述tcrα链恒定区包含与seq id no:14-19中的任一项具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列，和/或所述tcrβ链恒定区包含与seq id no:21-30中的任一项具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％序列同一性的氨基酸序列；
8.根据权利要求6或7的抗原结合蛋白，...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋栋，谢兴旺，翟佳慧，闫宝琪，党子懿，王江华，李雅真，毕晶磊，史云强，
申请(专利权)人：北京可瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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