【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，尤其涉及到一种β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突变基因glu16a-1、突变葡聚糖酶及其在麦糟中的应用。
技术介绍
1、β-葡聚糖是葡萄糖结构单元以β-糖苷键连接而成的一类非淀粉类多糖，广泛存在于高等植物、真菌、细菌等生物体中。β-葡聚糖酶能催化β-葡聚糖分解成具有益生元价值的可溶性寡糖，在工业、农业及医疗领域具有重要应用价值。而β-1,3-1,4-葡聚糖酶(ec3.2.1.6)属于β-葡聚糖酶并且能专一性地水解β-葡聚糖中的β-1,3-1,4-糖苷键。啤酒酿造过程中产生的富含β-葡聚糖的麦糟的绿色高值转化一直是一个难题，使用β-葡聚糖酶进行降解并转化成益生寡糖是一种经济高效的手段。
2、疏棉状嗜热丝孢菌(thermomyces lanuginosus)发酵啤酒麦糟可以产生寡糖，并且其分泌酶的耐高温特性使得在工业中具有一定的应用前景。在麦糟发酵中被特异性诱导2种β-1,3-1,4-葡聚糖酶，其中分泌量较高的是gh16家族的β-1,3-1,4-葡聚糖酶glul6a(gil301070474)。故如何高效地利用β-1,3-1,4-葡聚糖酶，使其在工业、农业及医疗领域发挥重要应用价值值得我们重点关注。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突变基因glu16a-1、突变葡聚糖酶及其在麦糟中的应用。研究发现，该突变葡聚糖酶在降解燕麦来源的葡聚糖和啤酒气爆麦糟方面发挥着重要应用。实验证明，所得突变葡聚糖酶活性可达到110iu/mg，
2、为了达到上述目的，本专利技术提供了一种β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突变基因glu16a-1，其核苷酸序列如seq id no.1所示。
3、作为优选，由其核苷酸编码的蛋白质序列如seq id no.2所示。
4、作为优选，所述突变基因glu16a-1的突变位点为v147s。
5、本专利技术还提供了一种含有突变基因glu16a-1的重组载体的构建方法，包括以下步骤：
6、获取β-1,3-1,4-葡聚糖酶glu16a基因，将其与质粒pet22b(+)连接，获得pet22b-glu16a重组质粒，所得重组质粒的核苷酸序列如seq id no.3所示；
7、以上述重组质粒为模板，设计v147s，即glu16a-1的突变引物，进行定点突变，以获得含有突变基因glu16a-1的重组载体。
8、作为优选，突变引物的序列如下：
9、v147s-sense：accacatgtcactccacaccagcgatggt
10、v147s-antisense：tgtggagtgacatgtggttgaaggtatt
11、本专利技术还提供了一种含有上述任一项技术方案所述的突变基因glu16a-1的突变葡聚糖酶glu16a-v147s，突变基因glu16a-1的核苷酸序列如seq id no.1所示。
12、本专利技术还提供了一种根据上述技术方案所述的突变葡聚糖酶glu16a-v147s在降解燕麦来源的葡聚糖中的应用，突变基因glu16a-1的核苷酸序列如seq id no.1所示。
13、作为优选，相比于野生型葡聚糖酶wt，突变葡聚糖酶的酶活性是其1.15倍。
14、本专利技术还提供了一种根据上述技术方案所述的突变葡聚糖酶glu16a-v147s在降解啤酒生产中产生的啤酒麦糟中的应用，其特征在于，突变基因glu16a-1的核苷酸序列如seq id no.1所示。
15、作为优选，相比于野生型葡聚糖酶wt，突变葡聚糖酶的酶活性是其1.18倍。
16、与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：
17、本专利技术异源表达了glul6a并对其进行了突变研究，研究得到了β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突变基因glu16a-1，该基因的突变位点为v147s，其核苷酸序列如seq id no.1所示，蛋白质序列如seq id no.2所示。本专利技术还进一步研究了基于该突变基因所得的突变葡聚糖酶在降解燕麦来源的葡聚糖和汽爆预处理的啤酒麦糟中的应用。实验证明，所得突变葡聚糖酶活性可达到110iu/mg，比野生型酶活性提高了15％，并且在降解啤酒生产中产生的啤酒气爆麦糟方面也有着广泛的应用，比野生型酶活性提高了18％。
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1.一种β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突变基因Glu16A-1，其特征在于，其核苷酸序列如SEQID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的突变基因Glu16A-1，其特征在于，由其核苷酸编码的蛋白质序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求2所述的突变基因Glu16A-1，其特征在于，所述突变基因Glu16A-1的突变位点为V147S。
4.一种含有突变基因Glu16A-1的重组载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，突变引物的序列如下：
6.一种含有权利要求1-3任一项所述的突变基因Glu16A-1的突变葡聚糖酶Glu16A-V147S，其特征在于，突变基因Glu16A-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
7.根据权利要求6所述的突变葡聚糖酶Glu16A-V147S在降解燕麦来源的葡聚糖中的应用，其特征在于，突变基因Glu16A-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，相比于
9.根据权利要求6所述的突变葡聚糖酶Glu16A-V147S在降解啤酒生产中产生的啤酒麦糟中的应用，其特征在于，突变基因Glu16A-1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，相比于野生型葡聚糖酶WT，突变葡聚糖酶的酶活性是其1.18倍。
...【技术特征摘要】
1.一种β-1,3-1,4-葡聚糖酶的突变基因glu16a-1，其特征在于，其核苷酸序列如seqid no.1所示。
2.根据权利要求1所述的突变基因glu16a-1，其特征在于，由其核苷酸编码的蛋白质序列如seq id no.2所示。
3.根据权利要求2所述的突变基因glu16a-1，其特征在于，所述突变基因glu16a-1的突变位点为v147s。
4.一种含有突变基因glu16a-1的重组载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，突变引物的序列如下：
6.一种含有权利要求1-3任一项所述的突变基因glu16a-1的突变葡聚糖酶glu16a-v147s，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡淑敏，王禄山，余俊红，吴秀芸，黄淑霞，闫鹏，刘佳，
申请(专利权)人：青岛啤酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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