【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
专利
本申请涉及与疼痛有关的蛋白的抗体。更具体地，本专利技术进一步涉及对犬和猫ngf具有高结合亲和力的犬源化或猫源化的人ngf抗体。本专利技术还涉及本专利技术抗体在治疗患有骨关节炎的犬科动物和猫科动物的疼痛中的用途。专利技术背景神经生长因子(ngf)是一种特性良好的分泌蛋白，在神经系统的发育中起着重要作用。此外，ngf还被证明对非神经元细胞和组织(包括免疫系统细胞)具有生物学作用。ngf最初是在小鼠颌下腺中分离出来的，是由三个非共价连接的亚基组成的复合物。ngf的α和γ亚基属于丝氨酸蛋白酶的激肽释放酶家族，而ngf复合物的β亚基表现出归因于ngf的生物活性。ngf(也称为βngf)是一种产生具有18个氨基酸残基信号肽的前肽[wiesmannand devos,clms:58,748-759,(2001)]。重组人β-ngf是两个120个氨基酸多肽的同型二聚体。人ngf的c末端120个氨基酸与其他物种(包括犬科动物和猫科动物)ngf的预测c末端具有约98％的同源性。很多研究表明，ngf在疼痛的传播中起着关键作用。例如，在人类中，患有一些关节炎病况的患者的滑液中ngf水平升高[aloe等，arch.rheum.,35:351-355(1992)]。此外，在患有关节炎的犬的滑液中已证明犬ngf表达水平升高[isola等，vetcomp.orthop.traumatol.,4:279(2011)]。还已经证明，抑制ngf功能的药物(如中和抗体)可以预防神经性疼痛动物模型中的痛觉过敏和触诱发痛[参见，例如，ramer等，eur.j.neurosci.11:
技术介绍
技术实现思路
1、本申请涉及犬源化和猫源化抗人神经生长因子(ngf)抗体，其对犬和/或猫ngf具有特异性结合亲和力，并且具有阻断犬和/或ngf与各自ngf受体结合的能力。本专利技术包括此类抗体在治疗动物痛觉过敏和触诱发痛中的用途。所述抗体还可以用于治疗在患有骨关节炎的犬科动物(狗)或猫科动物(猫)中的疼痛。
2、因此，本专利技术提供了能够结合并中和ngf的包含重链和轻链的新型犬源化和猫源化抗体，及所述犬源化和猫源化抗体的抗原结合片段。犬源化抗体的重链包含可变区(vh)和三个恒定区，其包含犬片段可结晶区(cfc或cfc区)。轻链也包含可变区(vl)，但仅有一个恒定区。重链和轻链的每个可变区分别包含三个高变区，即，互补性决定区(cdr)。因此，轻链包含三个轻链互补性决定区(cdr)：cdr轻链1(cdrl1)、cdr轻链2(cdrl2)和cdr轻链3(cdrl3)，其各自包含一个氨基酸序列，而重链包含三个重链cdr：cdr重链1(cdrh1)、cdr重链2(cdrh2)和cdr重链3(cdrh3)，其各自包含一个氨基酸序列。cdrh1包含seq id no:1的氨基酸序列，cdrh2包含seq id no:2的氨基酸序列和cdrh3包含seq id no:3的氨基酸序列，而cdrl1包含seq id no:4的氨基酸序列，cdrl2包含seq id no:5的氨基酸序列和cdrl3包含seq id no:6的氨基酸序列。
3、在某些实施方式中，犬源化抗体包含含有seq id no:27的氨基酸序列的重链可变区。在其他实施方式中，犬源化抗体包含含有seq id no:28的氨基酸序列的重链可变区。在相关实施方式中，犬源化抗体包含含有seq id no:29的氨基酸序列的轻链可变区。在其他相关实施方式中，犬源化抗体包含含有seq id no:30的氨基酸序列的轻链可变区。本专利技术还提供了所有这些抗体的抗原结合片段。
4、在特定实施方式中，犬源化抗体包含重链可变区，其包含seq id no:27的氨基酸序列，以及犬源化抗体包含轻链可变区，其包含seq id no:29的氨基酸序列。在其他实施方式中，犬源化抗体包含重链可变区，其包含seq id no:27的氨基酸序列，以及犬源化抗体包含轻链可变区，其包含seq id no:30的氨基酸序列。在另外其他实施方式中，犬源化抗体包含重链可变区，其包含seq id no:28的氨基酸序列，以及犬源化抗体包含轻链可变区，其包含seq id no:29的氨基酸序列。在另外其他实施方式中，犬源化抗体包含重链可变区，其包含seq id no:28的氨基酸序列，以及犬源化抗体包含轻链可变区，其包含seq id no:30的氨基酸序列。本专利技术进一步提供了所有这些抗体的抗原结合片段。
5、犬源化抗体还包含铰链区。铰链区优选地是犬铰链区。在某些实施方式中，犬铰链区包含氨基酸序列，其包含与seq id no:45的氨基酸序列含有至少90％、95％或100％同一性。在其他实施方式中，犬铰链区包含氨基酸序列，其包含与seq id no:46的氨基酸序列含有至少90％、95％或100％同一性。在另外其他实施方式中，犬铰链区包含氨基酸序列，其包含与seq id no:47的氨基酸序列含有至少90％、95％或100％同一性。在另外其他实施方式中，犬铰链区包含氨基酸序列，其包含与seq id no:48的氨基酸序列含有至少90％、95％或100％同一性。本专利技术进一步提供了所有这些抗体的抗原结合片段。
6、本专利技术的犬源化抗体包含犬片段可结晶区(cfc区)。在一个实施方式中，犬cfc区包含氨基酸序列，其包含与seq id no:49含有至少90％、95％、98％、99％或100％同一性。在另一个实施方式中，犬cfc区包含氨基酸序列，其包含与seq id no:50含有至少90％、95％、98％、99％或100％同一性。在另外其他实施方式中，犬cfc区包含氨基酸序列，其包含与seq id no:52含有至少90％、95％、98％、99％或100％同一性。在另外其他实施方式中，犬cfc区包含氨基酸序列，其包含与seq id no:53含有至少90％、95％、98％、99％或100％同一性。在另外其他实施方式中，犬cfc区是cfc igg-bm，其包含与seq id no:20和/或seqid no:51的氨基酸序列含有至少90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中seq id no:50的位置31处的天冬氨酸残基(d)和seq id no:50的位置63处的天冬酰胺残基(n)两者均被丙氨酸残基(a)置换。本专利技术进一步提供了所有这些抗体的抗原结合片段。
7、在一些实施方式中，犬源化抗体包含轻链，其包含se本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种猫源化抗体或其抗原结合片段，其任一个结合猫神经生长因子(NGF)，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链；其中所述轻链包含三个轻链互补性决定区(CDR)，每个包含以下氨基酸序列：CDR轻链1(CDRL1)、CDR轻链2(CDRL2)和CDR轻链3(CDRL3)；和其中所述重链包含三个重链CDR，每个包含以下氨基酸序列：CDR重链1(CDRH1)、CDR重链2(CDRH2)和CDR重链3(CDRH3)：
2.根据权利要求1所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其包含猫重链恒定区；其中所述猫重链恒定区包含与选自SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:54的氨基酸序列含有至少90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的位置151处的天冬氨酸残基(D)和位置183处的天冬酰胺残基(N)均被SEQ ID NO:55丙氨酸残基(A)和SEQ ID NO:55置换，其中所述氨基酸序列的位置151处的天冬氨酸残基(D)和位置183处的天冬酰胺残基(N)均被丙氨酸残基(A)置换。>
3.根据权利要求1或权利要求2所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:62的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中
6.根据权利要求1-5中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69的氨基酸序列。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:61和SEQ ID NO:62的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中
9.根据权利要求8所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中
10.一种核酸，其编码根据权利要求1-9中任一项所述的轻链。
11.一种核酸，其编码根据权利要求1-9中任一项所述的重链。
12.核酸对，其中所述核酸对中的一个包含编码根据权利要求1-9所述的抗体中的任一个的特异性猫源化抗体的重链的核苷酸序列和所述核酸对中的另一个包含编码所述特异性猫源化抗体的轻链的核苷酸序列。
13.一种表达载体，其包含根据权利要求12所述的核酸对或者根据权利要求10或权利要求11所述的核酸。
14.表达载体对，一个包含根据权利要求12所述的核酸对中的一个，其包含编码所述特异性猫源化抗体的重链的核苷酸序列，和另一个包含所述核酸对中的另一个，其包含编码所述特异性猫源化抗体的轻链的核苷酸序列。
15.一种宿主细胞，其包含根据权利要求13所述的表达载体或者根据权利要求14所述的表达载体对。
16.宿主细胞对，其中所述宿主细胞对中的一个包含表达载体，所述表达载体包含根据权利要求12所述的核酸对中的一个，所述核酸对中的一个包含编码所述特异性猫源化抗体的重链的核苷酸序列，而所述宿主细胞对中的另一个包含表达载体，所述表达载体包含所述核酸对中的另一个，所述核酸对中的另一个包含编码所述特异性猫源化抗体的轻链的核苷酸序列。
17.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-9中任一项所述的猫源化抗体，或根据权利要求13所述的表达载体，或根据权利要求14所述的表达载体对，或者其任何组合，以及药学上可接受的载体或稀释剂。
18.一种帮助治疗与猫科动物疼痛相关病况的方法，其包括向所述猫科动物施用治疗有效量的根据权利要求17所述的药物组合物。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述方法用于治疗骨关节炎、痛觉过敏、触诱发痛、疼痛或其任何组合。
20.一种产生结合猫NGF的猫源化抗体的方法，其包括：
21.一种用于治疗与猫科动物疼痛相关病况的用途的药物组合物，其包含根据权利要求1-9中任一项所述的猫源化抗体，或根据权利要求12所述的表达载体，或根据权利要求14所述的表达载体对，或者其任何组合，以及药学上可接受的载体或稀释剂。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种猫源化抗体或其抗原结合片段，其任一个结合猫神经生长因子(ngf)，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链；其中所述轻链包含三个轻链互补性决定区(cdr)，每个包含以下氨基酸序列：cdr轻链1(cdrl1)、cdr轻链2(cdrl2)和cdr轻链3(cdrl3)；和其中所述重链包含三个重链cdr，每个包含以下氨基酸序列：cdr重链1(cdrh1)、cdr重链2(cdrh2)和cdr重链3(cdrh3)：
2.根据权利要求1所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其包含猫重链恒定区；其中所述猫重链恒定区包含与选自seq id no:54、seq id no:55、seq id no:56、seq id no:54的氨基酸序列含有至少90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列的位置151处的天冬氨酸残基(d)和位置183处的天冬酰胺残基(n)均被seq id no:55丙氨酸残基(a)和seq id no:55置换，其中所述氨基酸序列的位置151处的天冬氨酸残基(d)和位置183处的天冬酰胺残基(n)均被丙氨酸残基(a)置换。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含选自seq id no:57、seq id no:58、seq id no:59和seq id no:60的氨基酸序列。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含选自seq id no:61和seq id no:62的氨基酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中
6.根据权利要求1-5中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含选自seq id no:68和seq id no:69的氨基酸序列。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含选自seq id no:61和seq id no:62的氨基酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的猫源化抗体或其抗原结合片段，其中
9.根据权利要求8所述的猫...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·莫尔塞耶，张远征，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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