作为用于活性成分的载体的亚微粒子的胶体悬浮液及其制备方法技术

本发明专利技术涉及作为活性成分（ＰＡ）载体（ＰＶ）的粒子的悬浮液。所述的载体粒子（ＰＶ）是以聚氨基酸（ＰＡＡ）为基础的。它们具有的平均流体动力学直径（Ｄｈ）为３０－１２０ｎｍ，并且具有相对于形成载体成分的聚氨基酸的有关的胰岛素数量为５－２５％的胰岛素负载因子（Ｔａ）。聚氨基酸为含有亲水性（ＡＡＩ）和疏水性（ＡＡＯ）单体的二嵌段聚合物。本发明专利技术还涉及可以衍生载体粒子的粉末状物质以及所述的固体粉末物质和所述的载体粒子的悬浮液的制备。所述的制备由以下步骤组成：使疏水性单体的Ｎ－羧基酸酐与亲水性单体的前体在Ｎ－甲基吡咯烷酮和甲醇的存在下进行共聚。然后通过酸水解将亲水性单体的前体转化为亲水性单体。任选地，中和共聚体、透析、浓缩并去除水。由此得到固体粉末物质或悬浮的载体粒子。活性成分（例如胰岛素或疫苗）与所述的用于制备特定的药物产品的载体粒子有关。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
作为用于活性成分的载体的亚微粒子的胶体悬浮液及其制备方法本申请是申请号为00816107.0的申请的分案申请。
本专利技术的领域是载体粒子(PV)的领域，载体粒子用于活性成分(PA)的给药。后者优选是通过如下方式向动物或人体有机体给药的药物或营养物：口服、鼻、阴道、眼睛、皮下、静脉内、肌内、皮内、腹膜内、大脑内或胃肠外途径等。然而，这也可以涉及化妆品产品或植物生产产品，如除草剂、灭害剂、杀昆虫剂或杀真菌剂等。在化学本性方面，本专利技术涉及的PA最特别但不限于是例如蛋白质、糖蛋白、肽、多糖、脂多糖、低聚核苷酸、多核苷酸和有机分子。更精确地，本专利技术涉及基于聚氨基酸(PAA)载体粒子、有利地是亚微型载体粒子的胶体悬浮液。本专利技术既涉及如此未涂敷的粒子，也涉及由负载PA的粒子组成的PA载体系统。本专利技术也涉及包括这些PV的粉状固体。本专利技术也涉及含有或不含PA的所述粒子胶体悬浮液的制备方法。现有技术将PA封囊到PV中的目的特别在于改进它们的作用的持续时间和/或将它们转运到治疗部位和/或增加该PA的生物利用度。已经提出过许多封囊技术。这种技术的目的，一方面在于允许将PA转运到它的治疗作用部位，同时保护它免受躯体的侵袭(水解，酶消化等)，并且另一方面在于在它的作用部位控制PA的释放，以保持可用于身体的量处在所需的水平。在这些变化物的转运和存在中涉及的PA是例如蛋白质，但也可以是完全不同的合成或天然来源的有机分子。M.J.HUMPHREY的综述(用于肽药物的转运系统，由S.DAVIS和L.ILLUM，Plenum Press，N.Y.1986出版)报导了涉及PA的生物利用度的增强和载体和控制释放系统益处的问题。在所有可用于形成PV的材料中，由于聚合物的固有性能越来越多地-->被使用。就希望获得的用于PV的详细说明而言，它们特别需要并特别包括如下要求：1用于PV所需的第一个要求是构成PV的聚合物是生物相容的，能够被消除(通过排泄)和/或生物可降解的和，更好地，是它代谢成对身体无毒的产物。此外，对于身体内的生物降解来说合适的是具有足够短的持续时间。2对于PV有利的是能够形成稳定的含水悬浮液，而不借助于有机溶剂和/或表面活性剂。3对于PV也需要具有足够小的尺寸以能够在处于液体的悬浮液中承受通过过滤器的除菌过滤，该过滤器的孔直径小于或等于0.2μm。4需要PV和PV-PA系统是通过对于PA是非变性的方法获得的。5PV有利地应当可以控制PA的释放速率。6另一个重要要求是PV-PA系统可构成优异的可注射药物。对于通过注射给药-如静脉内或肌内注射的这种增强能力-“可注射性”的特征为：(i)降低的注射体积(对于给定的治疗剂量)(ii)低粘度。当PA的治疗剂量与PA的最小数量相联系时，可以满足这两种性能。换言之，PV应当具有高的PA负载因子。7应当降低在可注射制剂中特异于PV的成本，在此再一次地，对于PV来说合适的是具有高的PA负载因子。在最终分析中，小尺寸和高负载因子是用于寻找PV的主要要求。8有利地，对于构成的PV聚合物不诱导免疫响应。以下描述的较早技术申请试图满足所有这些要求。通过示例，可以提及的是较早的申请(a)-(h)：(a)专利US-A-5286495涉及使用具有相反电荷的材料，即：藻酸盐(带负电荷)和聚赖氨酸(带正电荷)，通过蛋白质在水相中的蒸发而封囊的技术。此制造方法使得可以生产尺寸大于35μm的粒子。(b)此外，乳液技术通常用于制备负载PA的微粒子。例如，专利申请WO91/06286，WO91/06287和WO89/08449公开了这样的乳液技术，其-->中使用有机溶剂以溶解聚合物，例如聚乳酸类的聚合物。然而发现特别是对于肽或多肽PA，溶剂可能是变性的。(c)已经自1970年由X.FOX和K.DOSE描述在“分子进化和生命起源”，(Marcel DEKKER Inc编辑(1977))中称作类蛋白质的生物相容性PV也是已知的。因此，专利申请WO88/01213提出了基于合成多肽的系统，它的溶解性依赖于pH。为了获得根据该专利技术的基体微粒子，它们溶解多肽的混合物，并然后随着pH的变化，它们引起类蛋白质粒子的沉淀。当沉淀在PA存在的情况下进行时，将后者封囊入粒子中。(d)作为其余部分，也可以提及专利US4351337，它属于一个不同于特异于本专利技术PA载体化(vectorization)的领域。此专利公开了块状植入物，它在体内相当精确的位置连接和定位。这些植入物是中空管或显微尺寸(160μm并具有等于2000μm的长度)的胶囊，由共聚(氨基酸)-如聚(谷氨酸-亮氨酸)或聚(谷氨酸苄酯-亮氨酸)-的共聚物组成，它是通过氨基酸的N-羧基酸酐(NCA)的单体的共聚获得的。通过用于聚合物的混合物和PA的混合物的溶剂蒸发技术进行PA的引入。专利US4450150属于以上研究的专利US4351337的同族专利并基本具有相同的目的。组分PAA是聚(谷氨酸-谷氨酸乙酯)。(e)专利申请PCT/FR WO97/02810公开了用于活性成分控制释放的组合物，其包括至少部分结晶的(乳酸聚合物)生物可降解聚合物和吸收在所述粒子上的PA的许多层状粒子。在此情况下，活性成分的释放通过解吸进行。(f)出版物“CHEMISTRY LETTERS1995，707，AKIYOSHI等”涉及通过与多糖超分子络合的胰岛素的稳定化，所述多糖通过胆固醇的接枝而疏水化。(g)出现在“MACROMOLECULES 1997，30，4013-4017”中的文章描述了由如下物质组成的共聚物：基于L-苯基苯胺、(-苄基-L-谷氨酸酯或O-(四-O-乙酰基-D-吡喃葡萄糖基)-L-丝氨酸的多肽嵌段，以及合成嵌段如聚(2-甲基-2-噁唑啉)或聚(2-苯基-2-噁唑啉)。聚合物在含水介质中聚集以形成400nm的粒子，它能够与酶、脂肪酶结合。术语结合表示蛋白质-->通过物理现象(无共价键合)吸附在粒子上。(h)专利申请FR2 746 035，28页，3-16行特别描述了复合凝胶微粒子的胶体悬浮液，它是从聚亮氨酸/谷氨酸钠类型的聚氨基酸，分馏的椰子油(miglyol)和去离子水或缓冲的盐水溶液(磷酸盐缓冲剂pH7.4，25℃)获得的。这些复合凝胶微粒子的平均参考直径D[4，3]为2800nm。从FR2 746 035的实施例来看，显然最小的平均参考直径D[4，3]等于1900nm。此外，根据因子Ta≥7％，这些复合凝胶微粒子不能与胶体悬浮液中未溶解状态的胰岛素结合。在这些条件下，显然复合凝胶微粒子不能满足要求，并特别是涉及可注射性和涉及与胰岛素相关的结合和释放能力的要求。此外，根据FR2 746 035的方法不包括非芳族极性溶剂并且微粒子的形成在含水介质中并不自发进行，但其涉及借助于转子/定子型设备的剧烈匀化的使用。(i)PCT申请WO96/29991的主题是用于PA载体化的聚氨基酸粒子。这些粒子的尺寸为10-500nm，优选30-400nm。在此PCT申请的实施例中，粒子的尺寸由回转半径测量。在这些实施例中获得的粒子的回转半径从55到280nm变化。存在用于测量胶体粒子尺寸的其它技术。通过准弹性光散射(QELS)测量粒子的平均流体动力学直径(Dh)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种亚微粒子的胶体悬浮液，该粒子特别可用于携带活性成分，其中这些粒子是个体化的超分子排列：.基于线性的两亲聚氨基酸，含有肽键和包括至少两种不同类型的重复氨基酸：亲水性ＡＡＩ和疏水性中性ＡＡＯ，每种类型的氨基酸彼此相同或不同，.以及能够在胶体悬浮液中，以非溶解的状态结合至少一种活性成分并能够以延长和／或延迟的方式释放它，其特征在于：ａ）其中ＡＡＩ选自含有可离子化侧链的氨基酸，ｂ）其中ＡＡＯ选自天然中性氨基酸，ｃ）在４－１３的ｐＨ下，所述悬浮液在不存在表面活性剂的情况下是稳定的，ｄ）以与胰岛素结合的负载因子Ｔａ为特征，其以质量为基准的结合胰岛素质量的％表示并根据方法Ｍａ测量，Ｔａ为如下所述：△８≤Ｔａ≤５０，ｅ）并且以用ｎｍ表示的并根据方法Ｍｄ测量的平均流体动力学直径Ｄｈ为特征，Ｄｈ为如下所述：△２０ｎｍ≤Ｄｈ≤１００ｎｍ。

【技术特征摘要】
FR 1999-11-23 99/147511.一种亚微粒子的胶体悬浮液，该粒子特别可用于携带活性成分，其中这些粒子是个体化的超分子排列：●基于线性的两亲聚氨基酸，含有肽键和包括至少两种不同类型的重复氨基酸：亲水性AAI和疏水性中性AAO，每种类型的氨基酸彼此相同或不同，●以及能够在胶体悬浮液中，以非溶解的状态结合至少一种活性成分并能够以延长和/或延迟的方式释放它，其特征在于：a)其中AAI选自含有可离子化侧链的氨基酸，b)其中AAO选自天然中性氨基酸，c)在4-13的pH下，所述悬浮液在不存在表面活性剂的情况下是稳定的，d)以与胰岛素结合的负载因子Ta为特征，其以质量为基准的结合胰岛素质量的％表示并根据方法Ma测量，Ta为如下所述：Δ8≤Ta≤50，e)并且以用nm表示的并根据方法Md测量的平均流体动力学直径Dh为特征，Dh为如下所述：Δ20nm≤Dh≤100nm。2.权利要求1的悬浮液，其特征在于AAI选自羧酸形式和/或盐形式的天然氨基酸Glu和Asp。3.权利要求2的悬浮液，其特征在于AAI选自Leu，Ile，Val，Ala，Gly，Phe。4.权利要求1的悬浮液，其特征在于10≤Ta≤30。5.权利要求1的悬浮液，其特征在于亚微粒子并不从以下三种化合物的存在获得它们的内聚：-I)油-II)水相-->-III)以及至少一种合成非交联线性共聚氨基酸，其包括至少两种不同类型的氨基酸共聚单体：亲水性AAI和疏水性AAO。6.权利要求1的悬浮液，其特征在于粒子的组分聚氨基酸是“嵌段”聚氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：F图劳德，N布莱森，
申请(专利权)人：弗拉梅技术公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]