【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、rna干扰(rnai)为一种通过小干扰rna(sirna)介导的序列特异性转录后基因沉默过程。相当关注放在影响rnai以特异性地沉默标靶基因表达的能力，以便达到预期的治疗效果。
2、sirna治疗剂所面临的挑战显著。这是因为sirna的固有性质，例如为聚阴离子性质、易受核酸酶切割，以及由于细胞摄入不良和清除速度快而临床应用困难。已采取对sirna分子中的核苷酸进行修饰，以增强稳定性和抵抗核酸酶切割。然而，发现许多的sirna修饰对其基因沉默活性具有负面影响。
3、据此，越来越需要开发具有期望的稳定性和基因沉默活性的有效sirna。
技术实现思路
1、本公开至少部分基于开发针对小干扰rna的特定修饰模式，以在不影响基因沉默活性的情况下增强稳定性和核酸酶消化抗性，并减少脱靶效应。
2、据此，本公开的一个方面的特点是修饰的小干扰rna(sirna)，其包含具有19个核苷酸的有义链和具有21个核苷酸的反义链。有义链、反义链或两者含有一个或多个硫代磷酸酯(ps)键。在一些情况下，有义链和反义链形成双链sirna，任选地在反义链的3'端处具有两个核苷酸的悬突物。
3、在一些实施例中，反义链含有(i)7至9个2'-氟修饰的核苷酸，以及(ii)12至14个2'-o-甲基修饰的核苷酸。举例来说，反义链在位置2-12、14-16和18的7或更多处可含有2'-氟修饰的核苷酸。替代地或另外，反义链在位置2或3和位置14和任选的位置18处可包含
4、在一些情况下，本文公开的化学上修饰的sirna(例如，反义链、有义链或两者)可进一步包含修饰的5'-磷酸酯。在一些实例中，反义链包含修饰的5'磷酸酯。在一些实例中，修饰的5'-磷酸酯为e-乙烯基膦酸酯或硫代磷酸酯。
5、在本文公开的任何修饰的sirna中，有义链含有(i)2至5个2'-氟修饰的核苷酸，以及(ii)11至16个2-o-甲基修饰的核苷酸。举例来说，有义链在位置5和7-11的两处或更多处可含有2'-氟修饰的核苷酸。替代地或另外，有义链在位置5和7-10处或在位置5、7、9和11处包含2'-氟修饰的核苷酸。在另一实例中，有义链在位置1-6、8和10-19的11或更多处可含有2'-o-甲基修饰的核苷酸。替代地或另外，有义链在位置4、6和11-19处包含2'-o-甲基修饰的核苷酸。在实例中，有义链在位置8和10处可进一步包含2'-o-甲基修饰的核苷酸。在又其它实例中，有义链中的位置1-3的一处或多处可含有2'-o-甲基修饰的核苷酸。或者，有义链中的位置1-3的一处或多处为未修饰的。替代地或另外，有义链可含有2'-去氧核苷酸，其任选地位于位置9。在一些情况下，有义链在位置1与2、位置2与3、位置4与5、位置5与6、位置17与18和/或位置18与19之间可含有ps键。
6、在一些实施例中，本文公开的修饰的sirna的反义链(顶部)和有义链(底部)可具有下式之一：
7、(i)5'-mffmmffmmffmmffmmfmmm-3'
8、3'-mmmmmmmmmmdffmmmmmm-5'；
9、(ii)5'-mmfmfmfmfmmmmfmfmfmmm-3'
10、3'-mmmmmmmmmffffmfmmmm-5'；
11、(iii)5'-mmfmfmfmfmmmmfmfmfmmm-3'
12、3'-mmmmmmmmmffffmfmrrr-5'；
13、(iv)5'-mfmfmfmffmmmmfmfmfmmm-3'
14、3'-mmmmmmmmmffffmfmrrr-5'
15、(v)5'-mfmffmmffmmmmfmfmfmmm-3'
16、3'-mmmmmmmmmffffmfmmmm-5'；
17、(vi)5'-mfmfmfmfmfmfmfmfmfmmm-3'
18、3'-mmmmmmmmfmfmfmfmmmm-5'；
19、(vii)5'-mfmfmfmfmfmfmfmfmfmmm-3'
20、3'-mmmmmmmmfmfmfmfmrrr-5"或
21、(viii)5'-mfmfmfmfmfmfmfmfmmmmm-3'
22、3'-mmmmmmmmfmfmfmfmrrr-3'；以及
23、其中m代表2'-o-甲基核苷酸、f代表2'-氟核苷酸、d代表dna残基，并且r代表未修饰的核苷酸。
24、在一些实例中，本文公开的修饰的sirna的反义链(顶部)和有义链(底部)可具有下式：
25、(i)5'-m*f*fmmffmmffmmffmmfm*m*m-3'
26、3'-m*m*mmmmmmmmdffmmmm*m*m-5'；
27、(ii)5'-m*m*fmfmfmfmmmmfmfmfm*m*m-3'
28、3'-m*m*mmmmmmmffffmfmm*m*m-5'；
29、(iii)5'-m*m*fmfmfmfmmmmfmfmfm*m*m-3'
30、3'-m*m*mmmmmmmffffm*f*mrrr-5'；
31、(iv)5'-m*f*mfmfmffmmmmfmfmfm*m*m-3'
32、3'-m*m*mmmmmmmffffm*f*mrrr-5'
33、(v)5'-m*f*mffmmffmmmmfmfmfm*m*m-3'
34、3'-m*m*mmmmmmmffffmfmm*m*m-5'；
35、(vi)5'-m*f*mfmfmfmfmfmfmfmfm*m*m-3'
36、3'-m*m*mmmmmmfmfmfmfmm*m*m-5'；
37、(vii)5'-m*f*mfmfmfmfmfmfmfmfm*m*m-3'
38、3'-m*m*mmmmmmfmfmfm*f*mrrr-5"或
39、(viii)5'-m*f*mfmfmfmfmfmfmfmmm*m*m-3'
40、3'-m*m*mmmmmmfmfmfm*f*mrrr-3'；以及
41、其中m代表2'-o-甲基核苷酸、f代表2'-氟核苷酸、d代表dna残基、r代表未修饰的核苷酸，并且*代表ps键。
42、在一些实施例中，本文公开的任何修饰的sirna的有义链可缀合于标靶部分体，例如，缀合于n-乙酰基半乳胺糖(galnac本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种修饰的小干扰RNA(siRNA)，其包含具有19个核苷酸的有义链和具有21个核苷酸的反义链，
2.根据权利要求1所述的修饰的siRNA，其中所述反义链含有修饰的5'-磷酸酯。
3.根据权利要求2所述的修饰的siRNA，其中所述修饰的5'-磷酸酯为E-乙烯基膦酸酯或硫代磷酸酯。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的修饰的siRNA，其中所述反义链在位置2-12、14-16和18的7或更多处含有2'-氟修饰的核苷酸。
5.根据权利要求4所述的修饰的siRNA，其中所述反义链在位置2或3和位置14以及任选的位置18处包含2'-氟修饰的核苷酸。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的修饰的siRNA，其中在(a)中，所述反义链在位置1、2-13和15-21的12或更多处含有2'-O-甲基修饰的核苷酸。
7.根据权利要求6所述的修饰的siRNA，其中所述反义链在位置1、13、17和19-21处包含2'-O-甲基修饰的核苷酸。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的修饰的siRNA，其中在(b)中，所述有
9.根据权利要求8所述的修饰的siRNA，其中所述有义链在位置5和7-10处或在位置5、7、9和11处包含2'-氟修饰的核苷酸。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的修饰的siRNA，其中所述有义链在位置1-6、8和10-19的11或更多处含有2'-O-甲基修饰的核苷酸。
11.根据权利要求10所述的修饰的siRNA，其中所述有义链在位置4、6和11-19处包含2'-O-甲基修饰的核苷酸。
12.根据权利要求11所述的修饰的siRNA，其中所述有义链在位置8和10处更包含2'-O-甲基修饰的核苷酸。
13.根据权利要求10-12中任一项所述的修饰的siRNA，其中所述有义链中的位置1-3的一处或多处含有2'-O-甲基修饰的核苷酸。
14.根据权利要求10-12中任一项所述的修饰的siRNA，其中所述有义链中的位置1-3的一处或多处为未修饰的。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的修饰的siRNA，其中所述有义链含有2'-去氧核苷酸，其任选地位于位置9。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的修饰的siRNA，其中所述反义链在位置1与2、位置2与3、位置19与20和/或位置20与21之间含有PS键。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的修饰的siRNA，其中所述有义链在位置1与2、位置2与3、位置4与5、位置5与6、位置17与18和/或位置18与19之间含有PS键。
18.根据权利要求1所述的修饰的siRNA，其中(a)的反义链和(b)的有义链具有下式：
19.根据权利要求18所述的修饰的siRNA，其中(a)的反义链和(b)的有义链具有下式：
20.根据权利要求1-19中任一项所述的修饰的siRNA，其中所述有义链缀合于标靶部分体，其任选地为N-乙酰基半乳胺糖(GalNAc)。
21.一种医药组合物，其包含根据权利要求1-20中任一项所述的siRNA和医药上可接受的载体。
22.一种用于调控基因表达的方法，其包含以根据权利要求1-20中任一项所述的siRNA或根据权利要求21所述的医药组合物接触细胞，其中所述siRNA靶向感兴趣的基因。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述接触步骤通过施用具有与所述感兴趣的基因相关联的疾病的受试者siRNA或所述医药组合物而进行。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种修饰的小干扰rna(sirna)，其包含具有19个核苷酸的有义链和具有21个核苷酸的反义链，
2.根据权利要求1所述的修饰的sirna，其中所述反义链含有修饰的5'-磷酸酯。
3.根据权利要求2所述的修饰的sirna，其中所述修饰的5'-磷酸酯为e-乙烯基膦酸酯或硫代磷酸酯。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的修饰的sirna，其中所述反义链在位置2-12、14-16和18的7或更多处含有2'-氟修饰的核苷酸。
5.根据权利要求4所述的修饰的sirna，其中所述反义链在位置2或3和位置14以及任选的位置18处包含2'-氟修饰的核苷酸。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的修饰的sirna，其中在(a)中，所述反义链在位置1、2-13和15-21的12或更多处含有2'-o-甲基修饰的核苷酸。
7.根据权利要求6所述的修饰的sirna，其中所述反义链在位置1、13、17和19-21处包含2'-o-甲基修饰的核苷酸。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的修饰的sirna，其中在(b)中，所述有义链在位置5和7-11的两处或更多处含有2'-氟修饰的核苷酸。
9.根据权利要求8所述的修饰的sirna，其中所述有义链在位置5和7-10处或在位置5、7、9和11处包含2'-氟修饰的核苷酸。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的修饰的sirna，其中所述有义链在位置1-6、8和10-19的11或更多处含有2'-o-甲基修饰的核苷酸。
11.根据权利要求10所述的修饰的sirna，其中所述有义链在位置4、6和11-19处包含2'-o-甲基修饰的核苷酸。
12.根据权利要求11所述的修饰的sirna，其中所述有义链在位置8和10...
【专利技术属性】
技术研发人员：张翼中，杨奇凡，陈慧瑜，陈怡芬，
申请(专利权)人：中天上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。