【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测，涉及一种液相色谱串联质谱法同时检测两类代谢物的方法。
技术介绍
1、tmao及其代谢物参与多种重要的生物学功能，如渗透压调节、稳定蛋白结构、参与细胞分裂等。研究表明tmao及其代谢物浓度水平与心血管疾病及多种慢性疾病密切相关，tmao及相关代谢物的研究在探索tmao代谢、相关疾病发病机理、诊断、治疗及预防手段等方面均有重要的参考价值。因此，tmao及其相关代谢产物在血液中的定量检测方法具有重要的临床价值。
2、维生素是生物为维持正常生长代谢而必需从食物中获取的一类营养物质。b族维生素的缺乏会导致不同的疾病发生，如贫血、心血管疾病等。但是盲目补充维生素也会对身体健康造成一定伤害。因此，通过检测体内维生素b族的含量，有针对性的调整需要补充的维生素是非常有必要的。
3、目前，维生素和tmao代谢物的检测方法主要包括酶联免疫分析法、化学免疫发光法、液相色谱法(hplc)和液相色谱串联质谱法(lc-ms/ms)等。但是免疫法由于抗体间的交叉反应，导致检测结果的灵敏度较低，特异性较差；液相色谱法由于较低的检出限，一般针对一种组分或多种含量较高的组分同时检测；液相色谱串联质谱法往往针对tmao相关代谢物及b族维生素进行逐个单一检测，导致检测成本高，所需样本量大，耗费大量的时间等问题。目前还没有一种能够同时检测血液中tmao相关代谢物及多种b族维生素的有效方法。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种液相色谱串联质谱
2、为实现上述目的，本专利技术第一个方面公开了一种液相色谱串联质谱法同时检测两类代谢物的方法，液相色谱串联质谱的检测方法至少包含以下步骤：
3、s1、配制内标蛋白沉淀剂，用于样品处理和标曲工作液的配制；
4、s2、制备得到标准曲线方程：配制标曲工作液，使用液相色谱质谱联用仪对标曲工作液进行检测，获得用于计算血液中tmao相关代谢物和b族维生素含量的标准曲线方程；
5、s3、待测样本前处理：取内标蛋白沉淀剂加入到待测样本中，混匀后离心，取上清液作为进样样本；
6、s4、检测上述进样样本：使用高效液相色谱质谱联用仪对待测样本进行检测，并将检测结果代入上述标准曲线方程，得到血液样本中tmao相关代谢物和b族维生素含量。
7、其中液相色谱串联质谱中的色谱柱为acquityuplc beh c18，1.7um，2.1*100mm。
8、色谱流动相包括a相：含5mm甲酸铵的水；b相：含0.1％fa的乙腈。色谱流速为0.8ml/min；柱温为40℃；自动进样器温度为8℃。
9、本专利技术第二个方面公开了一种内标蛋白沉淀剂，由如下组分组成：
10、
11、优选地，tmao-d9、betaine-d11、choline-d13、l-caritine-d3、γ-butyrobetaine-d9选h2o作为溶解液；vb6-d3、vb9-d2用meoh作为溶解液；vb2-13c4,15n2用5％氨水作为溶解液。
12、其中溶解液放置在-80℃下储存。蛋白沉淀剂为乙腈-甲醇溶液。待测样本或标准品工作液与内标蛋白沉淀剂的体积比为1：4。
13、优选地，上述内标蛋白沉淀剂在液相色谱串联质谱中的应用。具有提升检测方法灵敏度的优势。
14、与现有技术相比，本专利技术有如下有益效果：
15、本专利技术通过优化所测代谢物的离子对、去簇电压和碰撞电压，提高了各代谢物的信号强度，灵敏度高，有利于低浓度代谢物的测定；并优化出通用的流动相和梯度条件，从而可以同时检测血液中tmao相关代谢物及多种b族维生素，大大节省了检测时间，降低了分析成本；前处理方法应用了蛋白沉淀法，操作简单。
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1.一种液相色谱串联质谱法同时检测两类代谢物的方法，其特征在于，液相色谱串联质谱的检测方法至少包含以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱串联质谱中的色谱柱为ACQUITYUPLC BEH C18，1.7um，2.1*100mm。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，色谱流动相包括A相：含5mM甲酸铵的水；B相：含0.1％FA的乙腈。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，色谱流速为0.8mL/min；柱温为40℃；自动进样器温度为8℃。
5.一种内标蛋白沉淀剂，其特征在于，由如下组分组成：
6.如权利要求5所述的一种内标蛋白沉淀剂，其特征在于，TMAO-D9、Betaine-D11、Choline-D13、L-Caritine-D3、选H2O作为溶解液；VB6-D3、VB9-D2用MeOH作为溶解液；VB2-13C4,15N2用5％氨水作为溶解液。
7.如权利要求5所述的一种内标蛋白沉淀剂，其特征在于，溶解液放置在-80℃下储存。
8.如权利要求5所述的一种内标蛋白沉淀
9.如权利要求5所述的一种内标蛋白沉淀剂，其特征在于，待测样本或标准品工作液与内标蛋白沉淀剂的体积比为1：4。
10.如权利要求5-9任一项所述的内标蛋白沉淀剂在液相色谱串联质谱中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种液相色谱串联质谱法同时检测两类代谢物的方法，其特征在于，液相色谱串联质谱的检测方法至少包含以下步骤：
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱串联质谱中的色谱柱为acquityuplc beh c18，1.7um，2.1*100mm。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，色谱流动相包括a相：含5mm甲酸铵的水；b相：含0.1％fa的乙腈。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，色谱流速为0.8ml/min；柱温为40℃；自动进样器温度为8℃。
5.一种内标蛋白沉淀剂，其特征在于，由如下组分组成：
6.如权利要求5所述的一种内标蛋白沉淀剂，...
【专利技术属性】
技术研发人员：李荣，仇周敏，
申请(专利权)人：上海赢沐生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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