【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及质控品，具体涉及一种精子dna碎片化检测用质控品及其制备方法。
技术介绍
1、精子dna碎片(sperm dna fragmentation, sdf)检测是一项经受住时间考验的精子功能研究技术，在全世界的男科实验室中日益普及。各种体外和体内研究都支持精子dna完整性在受精、早期胚胎发育、植入和妊娠中的重要性。对于接受辅助生殖技术的患者，sdf已经成为一种新的风险分层生物标志物。精子染色质结构分析法(sperm chromatinstructure sssay，scsa)以其准确、快速、可重复性高、变异率低等特点已成为检测sdf的金标准。
2、与常规精液指标一样，sdf检测结果可能在不同时间存在个体内差异，还受到检测程序和采用仪器的影响，因此严格的质量控制非常重要。
3、由于缺乏相应的质控品及其标准化制备流程、赋值耗时、成本高及人类精子样本又受到不能以营利为目的进行采集与提供活动等法规及伦理的限制，所有临检实验室均无法开展室间质控；仅极个别实验室通过自制人类精子样本来源的质控品进行sdf检验室内质控，但又存在额外的质控品液氮保存的严苛条件限制，使得绝大多数实验室目前未开展sdf检验的室内质控，给sdf检测项目的准确性带来了风险，无法满足临床检测对检验结果准确、溯源的基本要求。
4、有报道使用鸡红细胞模拟精子（专利技术专利申请公布号：cn115791354a和cn113432959a），进行sdf检测质控。鸡红细胞具有细胞核，经过处理后可形成dna损伤，与未处理的鸡红细胞（dna完
技术实现思路
1、为了解决现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的是提供一种精子dna碎片化检测用质控品及其制备方法，以解决现有质控品无法在细胞形态及功能上有效模拟人类精子，兼顾流式细胞分析的前、侧散信号并能完整有效监控sdf检测试剂及质控品细胞稳定性保存，避免鸡红细胞溶血等导致的细胞损失的问题。
2、本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种精子dna碎片化检测用质控品的制备方法，包括以下步骤：
3、向哺乳动物精液中加入氧化剂处理2-24h，使哺乳动物精液中的细胞dna断裂形成dna损伤细胞，然后洗涤，离心，收集细胞，然后调整细胞浓度，形成dna损伤细胞液；
4、将dna损伤细胞液与哺乳动物精液混合，使得dna损伤靶值为0-100%，制得。
5、本专利技术的有益效果为：现有技术中采用鸡红细胞作为原材料制备精子dna碎片质控品，但鸡红细胞与人类精子在细胞形态、膜结构和功能上存在差异，scsa分析sdf时，鸡红细胞无法完全模拟人精子形态和反映精子dna碎片的性质。本专利技术中采用哺乳动物精液作为原材料，哺乳动物尤其是大型哺乳动物精子与人类精子具有相似的细胞形态、膜结构和功能，将其作为原材料模拟人类精子可以提供更准确的精子dna碎片评价。哺乳动物精子不仅可以有效检测dna碎片，还可以同时评估精子的形态，与人类精子sdf检测及其流式分析流程完全一致，因而其在形态、功能上较鸡红细胞能够更加完整有效的模拟人类精子，同时哺乳动物精子作为质控品的原材料，具有原料易于获取，成本低廉的特点。
6、本专利技术中，将取得的哺乳动物精液分成两部分，一部分用作dna完整的细胞液，另一部分用于制得dna损伤细胞，将两种细胞混合在一起，可使其dna损伤靶值为0-100%，最终制得精子dna碎片化检测用质控品。处理后dna损伤细胞与dna完整细胞混合，当dna损伤靶值为0，则为原始未处理细胞的值，即dna完整细胞的值，当混合比例为100%的处理后细胞，此时dna损伤靶值为100%。若要同时含有dna完整细胞和dna损伤细胞，那么dna损伤靶值需大于零小于100%。dna损伤靶值可以根据需要进行调配，如低值10%，低值15%，高值40%，高值50%等。
7、在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进：
8、进一步，哺乳动物精液为猪精液、牛精液、羊精液或马精液。
9、采用上述进一步技术方案的有益效果为：上述哺乳动物精液中的精子与人类精子具有相似的细胞形态、膜结构和功能，将其作为原材料模拟人类精子可以提供更准确的精子dna碎片评价。
10、进一步，还包括对哺乳动物精液进行稀释，调整哺乳动物精液中精子浓度为2×106-100×106个细胞/ml。
11、稀释过程时，可采用缓冲液或生理盐水对哺乳动物精液进行稀释，缓冲液为tne缓冲液或pbs缓冲液。
12、进一步，氧化剂为过氧化氢、次氯酸、高锰酸钾或甲酸。
13、采用上述进一步技术方案的有益效果为：过氧化氢和次氯酸可产生自由基，能够对精子dna产生氧化损伤如碱基氧化、链断裂或剪辑错配等。采用高锰酸钾对精子dna进行氧化损伤处理，其具有反应活性可控，稳定性高，ph适用范围广，操作简单，成本较低等优点。同时，其绿色安全及反应活性可控的特性也保障了处理前后细胞不会发生细胞形态的变化（fsc及ssc）。甲酸作为一种弱有机酸，其能够被细胞内甲酸脱氢酶氧化产生自由基，进而损伤dna。
14、进一步地，过氧化氢的终浓度为1wt%-30wt%，次氯酸的终浓度为0.1wt%-10wt%，高锰酸钾的终浓度为0.1mm-100mm，甲酸的终浓度为0.1wt%-10wt%。优选过氧化氢的终浓度为3wt%-10wt%，高锰酸钾的终浓度为10mm，甲酸的终浓度为0.5wt%。
15、进一步，洗涤时用缓冲液洗涤，缓冲液为tne缓冲液或pbs缓冲液。
16、进一步，收集细胞，然后调整细胞浓度为2×106-100×106个细胞/ml。
17、进一步，还包括将dna损伤细胞液与哺乳动物精液混合后，添加添加剂进行冷冻干燥，冷冻干燥后形成细胞冻干粉。
18、进一步，添本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，哺乳动物精液为猪精液、牛精液、羊精液或马精液。
3.根据权利要求1所述的精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，还包括对哺乳动物精液进行稀释，调整哺乳动物精液中精子浓度为2×106-100×106个细胞/mL。
4.根据权利要求1所述的精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，氧化剂为过氧化氢、次氯酸、高锰酸钾或甲酸。
5.根据权利要求4所述的精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，过氧化氢的终浓度为1wt%-30wt%，次氯酸的终浓度为0.1wt%-10wt%，高锰酸钾的终浓度为0.1mM-100mM，甲酸的终浓度为0.1wt%-10wt%。
6.根据权利要求5所述的精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，过氧化氢的终浓度为3wt%-10wt%，次氯酸的终浓度为0.1wt%-10wt%，高锰酸钾的终浓度为10mM，甲酸的终浓
7.根据权利要求1所述的精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，收集细胞，然后调整细胞浓度为2×106-100×106个细胞/mL。
8.根据权利要求1所述的精子DNA碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，还包括将DNA损伤细胞液与哺乳动物精液混合后，添加添加剂进行冷冻干燥。
9.一种精子DNA碎片化检测用质控品，其特征在于，采用权利要求1-8任一项所述的制备方法制得。
10.权利要求9所述的精子DNA碎片化检测用质控品在制备精子DNA碎片化检测产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种精子dna碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的精子dna碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，哺乳动物精液为猪精液、牛精液、羊精液或马精液。
3.根据权利要求1所述的精子dna碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，还包括对哺乳动物精液进行稀释，调整哺乳动物精液中精子浓度为2×106-100×106个细胞/ml。
4.根据权利要求1所述的精子dna碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，氧化剂为过氧化氢、次氯酸、高锰酸钾或甲酸。
5.根据权利要求4所述的精子dna碎片化检测用质控品的制备方法，其特征在于，过氧化氢的终浓度为1wt%-30wt%，次氯酸的终浓度为0.1wt%-10wt%，高锰酸钾的终浓度为0.1mm-100mm，甲酸的终浓度为0.1wt%-...
【专利技术属性】
技术研发人员：张国华，陈彩霞，阳惟莎，付智勇，晏波，
申请(专利权)人：成都棱镜泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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