【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物学和医学领域；更具体而言，本专利技术涉及一种特异性结合fap的抗体、抗原结合片段及其用途。
技术介绍
1、成纤维细胞活化蛋白（fibroblast activation protein, fap）是一种丝氨酸水解酶，属于ii型丝氨酸蛋白酶家族成员。fap表达于90%以上的上皮性肿瘤的肿瘤相关成纤维细胞（tumor-associated fibroblast, taf）表面，包括结肠癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌等，也可表达于胃癌间质、一部分骨和软组织肉瘤细胞，是肿瘤微环境中重要的间质细胞类型。除肿瘤外，fap也表达于特发性肺纤维化的损伤间质、慢性丙型肝炎病人的肝实质细胞及心肌纤维化的心肌间质细胞表面。本专利技术专利通过噬菌体展示小鼠免疫抗体库技术，筛选得到29条具有全新可变区序列的鼠源fap单克隆抗体并验证了其结合活性。
技术实现思路
1、本专利技术第一方面提供一种靶向fap的抗体或其抗原结合片段，或与所述抗体或其抗原结合片段具有至少85%序列相同性并保留其fap结合活性的变体。
2、在一个或多个实施方案中，所述抗体包含：seq id no:1-58中任一单数整数序列所示的重链可变区的3个hcdr，和/或seq id no:1-58中任一双数整数序列所示的轻链可变区的3个lcdr。
3、在一个或多个实施方案中，所述抗体的hcdr1包含选自以下的任一种：seq id no:59-87，或与其具有至少85％序列相同性的序列。
4、
5、在一个或多个实施方案中，所述抗体的hcdr3包含选自以下的任一种：seq id no:117-145，或与其具有至少85％序列相同性的序列。
6、在一个或多个实施方案中，所述抗体的lcdr1包含选自以下的任一种：seq id no:146-174，或与其具有至少85％序列相同性的序列。
7、在一个或多个实施方案中，所述抗体的lcdr2包含选自以下的任一种：seq id no:175-203，或与其具有至少85％序列相同性的序列。
8、在一个或多个实施方案中，所述抗体的lcdr3包含选自以下的任一种：seq id no:204-232，或与其具有至少85％序列相同性的序列。
9、在一个或多个实施方案中，所述抗体含有表12任一行所示抗体的hcdr1、hcdr2、hcdr3或与其具有至少85％序列同一性的序列。
10、在一个或多个实施方案中，所述抗体含有表12任一行所示抗体的lcdr1、lcdr2和lcdr3，或与其具有至少85％序列同一性的序列。
11、在一个或多个实施方案中，所述抗体含有表12任一行所示抗体的hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3，或与其具有至少85％序列同一性的序列。
12、在一个或多个实施方案中，所述抗体的轻链可变区包含鼠源或人源轻链fr区。在一个或多个实施方案中，所述抗体的重链可变区包含鼠源或人源重链fr区。
13、在一个或多个实施方案中，所述抗体的重链可变区的fr1、fr2、fr3和fr4各自分别独立选自seq id no:1-58中任一单数整数所示的重链可变区的fr1、fr2、fr3和fr4，和/或，所述抗体的轻链可变区的fr1、fr2、fr3和fr4各自分别独立选自seq id no:1-58中任一双数整数所示的轻链可变区的fr1、fr2、fr3和fr4。
14、在一个或多个实施方案中，所述抗体含有表11任一抗体所示的vh、vl或vh和vl，或与其具有至少85%序列相同性的序列。
15、在一个或多个实施方案中，所述抗体的vh具有seq id no:1-58任一单数整数所示的序列或与其具有至少85%序列相同性的序列。或者或此外，所述抗体的vl具有seq id no:1-58中任一双数整数所示的序列或与其具有至少85%序列相同性的序列。
16、在一个或多个实施方案中，所述抗体还包含重链恒定区和/或轻链恒定区。
17、在一个或多个实施方案中，所述抗体的重链包含人源igg1、igg2、igg3或igg4的重链恒定区或与其具有至少85%序列相同性的序列。或者或此外，所述抗体的轻链包含人源κ链、λ链的轻链恒定区或与其具有至少85%序列相同性的序列。
18、在一个或多个实施方案中，所述抗体的重链包含人源igg1的重链恒定区或与其具有至少85%序列相同性的序列，轻链包含人源κ链的轻链恒定区或与其具有至少85%序列相同性的序列。
19、在一个或多个实施方案中，所述抗体是多特异性抗体，优选双特异性抗体。
20、在一个或多个实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。
21、在一个或多个实施方案中，所述抗体是嵌合抗体或鼠源抗体。
22、本专利技术还提供一种融合蛋白或抗体偶联物，其包含本文所述抗体或其抗原结合片段。优选地，所述抗体偶联物是抗体药物偶联物（adc）。
23、本专利技术还提供多核苷酸，选自：
24、（1）本文任一实施方案所述抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、或抗体偶联物的编码序列；
25、（2）（1）的互补序列。
26、本专利技术还提供一种核酸构建物，其包含本文任一实施方案所述的多核苷酸。
27、在一个或多个实施方案中，所述核酸构建物是载体，例如整合载体、克隆载体或表达载体。
28、本专利技术还提供含本文任一实施方案所述抗体或其抗原结合片段的噬菌体或包含该噬菌体的文库。
29、在一个或多个实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段展示于所述噬菌体表面。
30、本专利技术还提供一种宿主细胞，其：
31、（1）表达和/或分泌本文任一实施方案所述抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、或抗体偶联物；
32、（2）包含本文所述的多核苷酸；和/或
33、（3）包含本文所述的核酸构建物。
34、在一个或多个实施方案中，所述宿主细胞选自原核细胞或真核细胞。
35、在一个或多个实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。
36、本专利技术还提供一种产生抗体或其抗原结合片段的方法，包括：在适合产生抗体或其抗原结合片段的条件下培养本文所述的宿主细胞，和任选的从培养物中纯化所述抗体或其抗原结合片段。
37、本专利技术还提供一种检测fap的试剂盒，用于评估药物治疗效果或诊断癌症，所述的试剂盒包含本文任一实施方案所述抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、抗体偶联物、多核苷酸、核酸构建物、噬菌体或宿主细胞。
38、在一个或多个实施方案中，所述试剂盒还包括用于检测fap与抗体或其抗原结合片段、融合蛋白、或抗体偶联物的结合的试剂。例如通过酶联免疫反应法检测本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种靶向FAP的抗体或其抗原结合片段，或与所述抗体或其抗原结合片段具有至少85%序列相同性并保留其FAP结合活性的变体，其特征在于，所述抗体含有SEQ ID NO:85所示的HCDR1、SEQ ID NO:114所示的HCDR2、SEQ ID NO:143所示的HCDR3、SEQ ID NO:172所示的LCDR1、SEQ ID NO:201所示的LCDR2和SEQ ID NO:230所示的LCDR3。
2. 如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4各自分别独立选自SEQ ID NO:53所示的重链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4，和/或，所述抗体的轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4各自分别独立选自SEQ ID NO:54所示的轻链可变区的FR1、FR2、FR3和FR4。
3. 如权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体含有SEQ IDNO:53所示的VH和SEQ ID NO:54所示的VL。
4. 如权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其特征
5.一种融合蛋白，其包含权利要求1-4中任一项所述抗体或其抗原结合片段。
6.一种抗体偶联物，其包含权利要求1-4中任一项所述抗体或其抗原结合片段。
7.一种多核苷酸，选自：
8.一种核酸构建物，其包含权利要求7所述的多核苷酸。
9.如权利要求8所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物是载体。
10.如权利要求9所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物是整合载体、克隆载体或表达载体。
11.一种宿主细胞，其：
12.如权利要求11所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞选自原核细胞或真核细胞。
13.如权利要求12所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。
14.一种产生抗体或其抗原结合片段的方法，包括：在适合产生抗体或其抗原结合片段的条件下培养权利要求11-13任一项所述的宿主细胞，和任选的从培养物中纯化所述抗体或其抗原结合片段。
15.一种检测样品中FAP存在情况的非诊断性方法，所述方法包括：以权利要求1-4任一项所述抗体或其抗原结合片段、权利要求5所述的融合蛋白、或权利要求6所述的偶联物与样品孵育，和检测FAP与所述抗体或其抗原结合片段、融合蛋白或偶联物的结合，从而确定样品中FAP存在情况。
16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述检测是酶联免疫反应法检测。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向fap的抗体或其抗原结合片段，或与所述抗体或其抗原结合片段具有至少85%序列相同性并保留其fap结合活性的变体，其特征在于，所述抗体含有seq id no:85所示的hcdr1、seq id no:114所示的hcdr2、seq id no:143所示的hcdr3、seq id no:172所示的lcdr1、seq id no:201所示的lcdr2和seq id no:230所示的lcdr3。
2. 如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体的重链可变区的fr1、fr2、fr3和fr4各自分别独立选自seq id no:53所示的重链可变区的fr1、fr2、fr3和fr4，和/或，所述抗体的轻链可变区的fr1、fr2、fr3和fr4各自分别独立选自seq id no:54所示的轻链可变区的fr1、fr2、fr3和fr4。
3. 如权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述抗体含有seq idno:53所示的vh和seq id no:54所示的vl。
4. 如权利要求3所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，
5.一种融合蛋白，其包含权利要求1-4中任一项所述抗体或其抗原结合片段。
6.一种抗体偶联物，其包含权...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱圣淋，张全，杨旸，
申请(专利权)人：上海汉原生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。