【技术实现步骤摘要】
本申请属于体细胞治疗相关的细胞培养，涉及一种基于抗体和/或激动剂处理的树突状细胞制备方法。
技术介绍
1、免疫治疗是当今医学研究的热点领域，体细胞治疗作为一种新兴的治疗手段，在这一领域中扮演着重要角色。体细胞治疗的基本原理是从患者体内获取特定类型的细胞，在体外进行培养和处理，使其获得特殊的生物学功能，最终将这些改造后的活性细胞回输至患者体内，发挥预期的治疗效果。在多种免疫细胞治疗中，树突状细胞(dendriticcells，dc)由于出色的抗原呈递能力，被广泛应用于肿瘤免疫治疗、传染病防治以及自身免疫性疾病的治疗。
2、树突状细胞是由加拿大学者steinman于1973年发现的一种抗原提呈细胞(antigen presenting cells,apc)，因其成熟时突出许多树突样或伪足样突起而得名。树突状细胞是迄今为止已知的人体内功能最强的专职抗原递呈细胞，它能高效地摄取、加工处理和递呈抗原，未成熟树突状细胞具有较强的迁移和吞噬能力，能够高效捕获游离抗原；成熟树突状细胞能高效处理和提呈抗原，并通过表面的抗原-主要组织相容性复合体与t细胞相互作用，从而激活人体内的t细胞免疫应答。树突状细胞处于免疫系统的启动、调控，以及维持免疫应答的中心环节，在人体免疫系统中扮演着重要角色。
3、树突状细胞在人体内分布广泛，但数量较少，外周组织中大部分处于非成熟状态，表达低水平的共刺激因子和粘附因子，体外激发同种混合淋巴细胞增殖反应的能力较低。从人体内直接分离dc细胞耗时且产量很低，因此体外诱导培养大量的dc细胞具有重要研究和
4、最新研究发现，树突状细胞表面会表达很高的pd-l1。这些pd-l1分子与树突状细胞自身的b7.1分子结合，导致树突状细胞功能缺陷，抑制其活化t细胞的能力。
5、另外也有研究发现，cd40是一种分布于抗原呈递细胞(apc)的协同刺激因子和蛋白受体。当cd40与辅助型t细胞上的cd154(也称为cd40l)结合后，抗原呈递细胞会被激活，并产生一系列下游反应。cd40在单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞以及b细胞上的表达在发挥免疫细胞功能以及抗肿瘤免疫中发挥重要作用。
6、因此，如何开发一种新的dc细胞培养方法，以得到更强活性、更强t细胞激活能力和抗原呈递功能的树突状细胞制剂，是当前的研究重点。
技术实现思路
1、鉴于上述所要解决的技术问题，申请人提供了一种基于抗体和/或激动剂处理的树突状细胞制备方法，以得到功能增强的树突状细胞制剂，增强了树突状细胞的成熟度和抗原递呈能力以及活化和扩增t细胞的能力。具体来说：
2、本申请的技术方案提供一种树突状细胞的制备方法，其中包括：以处理剂对树突状细胞进行封闭和/或激活处理，所述处理剂包括pd-l1抗体和/或cd40激动剂。
3、进一步的，所述封闭处理包括使用pd-l1抗体对树突状细胞进行封闭处理，所述激活处理包括使用cd40激动剂对树突状细胞进行激活处理。
4、进一步的，所述pd-l1抗体选自pd-l1单抗或包含pd-l1的多特异性抗体。
5、进一步优选的，所述pd-l1抗体选自单抗atezolizumab、adebrelimab、durvalumab或avelumab。
6、进一步的，所述cd40激动剂选自cd40激动型抗体或cd40l配体，所述cd40激动型抗体包括cd40单抗和包含cd40的多特异性抗体，所述cd40l配体包括cd40l重组蛋白和融合蛋白。
7、进一步优选的，所述cd40激动剂选自cd40激动型抗体。
8、进一步优选的，所述cd40激动剂型抗体选自单抗mitazalimab、cifurtilimab、sotigalimab或双抗tecaginlimab。
9、进一步的，所述pd-l1抗体的工作浓度为1-50μg/ml，和/或所述cd40激动剂的工作浓度为0.1-10μg/ml。
10、进一步优选的，所述pd-l1抗体的工作浓度为10-20μg/ml，和/或所述cd40激动剂的工作浓度为1-5μg/ml。
11、进一步的，所述封闭和/或激活处理包括向树突状细胞中加入所述处理剂并进行共孵育的步骤，优选的，所述共孵育条件为：温度35-38℃，5％二氧化碳。
12、进一步的，所述制备方法还包括对树突状细胞的促成熟培养步骤。
13、进一步的，在所述促成熟培养过程中或培养完成后对树突状细胞进行所述封闭和/或激活处理，优选的，在所述培养完成前1～6小时进行封闭和/或激活处理。
14、进一步的，所述制备方法还包括对树突状细胞负载肿瘤新生抗原或肿瘤相关抗原的步骤。
15、进一步的，在所述封闭和/或激活处理前对所述树突状细胞负载肿瘤新生抗原或肿瘤相关抗原。
16、进一步的，经所述封闭和/或激活处理的树突状细胞为pd-l1阴性和/或细胞表面结合了cd40激动剂的树突状细胞。
17、进一步的，以本申请所述的制备方法制备得到的树突状细胞制剂，其中pd-l1阴性的细胞占制剂总细胞的比例≥80％，和/或细胞表面结合了cd40激动剂的细胞占制剂总细胞的比例≥80％。
18、进一步的，本申请还涉及所述树突状细胞制剂在癌症疾病的预防、治疗及术后防复发中的用途。
19、进一步的，所述癌症疾病包括实体瘤癌症或血液癌症，优选的，所述实体瘤癌症包括乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、肝癌、鼻咽癌、胃癌、结直肠癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、肉瘤、食管癌、宫颈癌、胆囊癌、胶质母细胞瘤或黑色素瘤，所述血液癌症包括白血病、淋巴瘤及多发性骨髓瘤。
20、本申请还提供了一种树突状细胞制剂，其中包含pd-l1阴性的树突状细胞和/或细胞表面结合了cd40激动剂的树突状细胞。
21、进一步的，所述制剂中pd-l1阴性的细胞占制剂总细胞的比例≥80％，和/或细胞表面结合了cd40激动剂的细胞占制剂总细胞的比例≥80％。
22、进一步的，所述制剂中具有成熟细胞表型的树突状细胞占所述制剂总细胞的比例≥50％。
23、进一步优选的，所述制剂中具有成熟细胞表型的树突状细胞占所述制剂总细胞的比例≥80％。
24、进一步的，所述制剂中cd80、cd86、hla-dr、cd83阳性的细胞比例占制剂总细胞的比例均达到50％及以上。
25、进一步优选的，所述制剂中cd80、cd86、hl本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种新型的树突状细胞的制备方法，其中包括：以处理剂对树突状细胞进行封闭和/或激活处理，所述处理剂包括PD-L1抗体和/或CD40激动剂。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述PD-L1抗体选自PD-L1单抗或包含PD-L1的多特异性抗体，优选的，所述PD-L1抗体选自单抗Atezolizumab、Adebrelimab、Durvalumab或Avelumab。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述CD40激动剂选自CD40激动型抗体或CD40L配体，所述CD40激动型抗体包括CD40单抗和包含CD40的多特异性抗体，所述CD40L配体包括CD40L重组蛋白和融合蛋白，优选的，所述CD40激动剂选自单抗Mitazalimab、Cifurtilimab、Sotigalimab或双抗Tecaginlimab。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述PD-L1抗体的工作浓度为1-50μg/mL，和/或所述CD40激动剂的工作浓度为0.1-10μg/mL。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述PD-L1抗体的
6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述封闭和/或激活处理包括向树突状细胞中加入所述处理剂并进行共孵育的步骤，优选的，所述共孵育条件为：温度35-38℃，5％二氧化碳。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其中，还包括对树突状细胞的促成熟培养步骤。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，在所述促成熟培养过程中或培养完成后对树突状细胞进行所述封闭和/或激活处理，优选的，在所述培养完成前1～6小时进行处理。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其中，还包括对树突状细胞负载肿瘤新生抗原或肿瘤相关抗原的步骤。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其中，在所述封闭和/或激活处理前对所述树突状细胞负载肿瘤新生抗原或肿瘤相关抗原。
11.根据权利要求1～10任一项所述的制备方法，其中，经所述封闭和/或激活处理的树突状细胞为PD-L1阴性和/或细胞表面结合了CD40激动剂。
12.通过权利要求11所述的制备方法制备得到的树突状细胞制剂，其中，所述制剂中PD-L1阴性的细胞占制剂总细胞的比例≥80％，和/或细胞表面结合了CD40激动剂的细胞占制剂总细胞的比例≥80％。
13.权利要求12所述的树突状细胞制剂在癌症疾病的预防、治疗及术后防复发中的用途。
14.根据权利要求13所述的用途，其中，所述癌症疾病包括实体瘤癌症或血液癌症，优选的，所述实体瘤癌症包括乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、肺癌、肝癌、鼻咽癌、胃癌、结直肠癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、肉瘤、食管癌、宫颈癌、胆囊癌、胶质母细胞瘤或黑色素瘤，所述血液癌症包括白血病、淋巴瘤及多发性骨髓瘤。
...【技术特征摘要】
1.一种新型的树突状细胞的制备方法，其中包括：以处理剂对树突状细胞进行封闭和/或激活处理，所述处理剂包括pd-l1抗体和/或cd40激动剂。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述pd-l1抗体选自pd-l1单抗或包含pd-l1的多特异性抗体，优选的，所述pd-l1抗体选自单抗atezolizumab、adebrelimab、durvalumab或avelumab。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述cd40激动剂选自cd40激动型抗体或cd40l配体，所述cd40激动型抗体包括cd40单抗和包含cd40的多特异性抗体，所述cd40l配体包括cd40l重组蛋白和融合蛋白，优选的，所述cd40激动剂选自单抗mitazalimab、cifurtilimab、sotigalimab或双抗tecaginlimab。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述pd-l1抗体的工作浓度为1-50μg/ml，和/或所述cd40激动剂的工作浓度为0.1-10μg/ml。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述pd-l1抗体的工作浓度为10-20μg/ml，和/或所述cd40激动剂的工作浓度为1-5μg/ml。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其中，所述封闭和/或激活处理包括向树突状细胞中加入所述处理剂并进行共孵育的步骤，优选的，所述共孵育条件为：温度35-38℃，5％二氧化碳。...
【专利技术属性】
技术研发人员：程旭东，李欢欢，
申请(专利权)人：中生康元生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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