【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及癌症治疗和诊断领域。具体地，本专利技术涉及新的靶单元和包含其的嵌合抗原受体(car)、编码靶单元的核酸、编码car的核酸、表达car的免疫细胞及其用于治疗癌症的用途。
技术介绍
1、许多her2+乳腺癌表达具有截短的羧基末端片段(ctf)的her2同种型，统称为p95her2。
2、一些与p95her2结合的抗原结合单元是已知的，但并不是所有的这些抗原结合单元都适合应用于car。2019年10月17日公开的研究公开(research disclosure)rd667070中描述的失败说明了这一点。
3、为了获得治疗性car-t细胞(car-t)，细胞需要在细胞膜中表达足够量的car，并且抗原结合单元还得对靶抗原具有足够的亲和力和特异性。可以预期只有一小部分具有体外活性的car-t细胞会成功迁移到体内的肿瘤转移处和/或浸润实体瘤的恶性肿瘤微环境中，这是可以预期的。此外，为了在体内提供治疗效果，car-t细胞可能需要在一段时间内维持其活性。因此，获得能够在免疫细胞的细胞膜中表达时为实体瘤提供体内治疗效果的新型car并非易事，而非常值得追求。
技术实现思路
1、本专利技术提供了包含新型抗原结合单元的结合分子。所述抗原结合单元和包含其的结合分子能够在生理条件下特异性结合表达高活性611-ctf(p95her2的同种型)的细胞。由于p95her2是截短的跨膜受体，因此获得此类抗原结合单元并非易事。本专利技术的抗原结合单元在生理条件下表现出对全长her2很
2、如本文所证明的，抗原结合单元适合应用到car中，并且它们以这种形式保留对p95her2的足够的亲和力和特异性。car在t细胞中良好表达，其功能通过体外实验得到证实，且其治疗效果在体内模型中得到证实。
3、在第一方面，我们提供了一种特异性结合包含如seq id no:17所示的氨基酸序列的p95her2的结合分子，所述结合分子包含共同形成抗原结合单元的vl和vh；
4、-其中所述vl包含三个互补决定区(cdr)：分别包含如seq id no:1、2和3所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3；和
5、-其中所述vh包含三个cdr：分别包含如seq id no:4、5和6所示的氨基酸序列的cdr1、cdr2和cdr3。
6、所述结合分子可包含含有如seq id no:7所示的氨基酸序列或与其具有至少90％同一性的序列的vh，以及含有如seq id no:8所示的氨基酸序列或与其具有至少90％同一性的序列的vl。所述抗原结合单元可以是scfv。
7、在第二方面，我们提供了一种包含根据第一方面所述的抗原结合单元的嵌合抗原受体(car)。所述car可以包含人cd8α铰链。
8、从n末端到c末端，所述car可以包含人cd8α铰链、人cd8α跨膜结构域、人4-1bb共刺激结构域和人cd3ζ信号传导结构域。
9、在第三方面，我们提供了一种编码根据第一方面所述的结合分子或根据第二方面所述的car的核酸。
10、在第四方面，我们提供了一种包含根据第三方面所述的核酸的载体。
11、在第五方面，我们提供了一种细胞毒性免疫细胞，所述细胞毒性免疫细胞的细胞膜中表达根据第二方面所述的car。
12、在第六方面，我们提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含根据第一方面所述的结合分子、根据第三方面所述的核酸、根据第四方面所述的载体或根据第五方面所述的细胞毒性免疫细胞。
13、在第七方面，我们提供了一种治疗人类患者癌症的方法，所述方法包含施用根据第五方面所述的细胞毒性免疫细胞或根据第六方面所述的药物组合物的步骤。
14、在第八方面，我们提供了一种治疗人类患者癌症的方法，所述方法包含以下步骤：
15、(a)从患者中获得包含癌细胞的样本；
16、(b)通过将细胞与进一步包含适合检测的部分的根据第一方面所述的结合分子在体外接触来分析癌细胞是否表达p95her2；和
17、(c)如果癌细胞为p95her2阳性，则对患者施用经批准的化疗。
18、在第九方面，我们提供了一种诊断癌症的方法，所述方法包含以下步骤：
19、(a)从人类患者中获得包含细胞的样本；
20、(b)通过将细胞与根据第一方面所述的结合分子在体外接触来分析所述细胞是否表达p95her2，其中所述结合分子包含适合检测的部分；和
21、(c)如果细胞表达p95her2，则诊断患者患有癌症。
22、在第十方面，我们提供了根据第一方面所述的结合分子、根据第二方面所述的car、根据第五方面所述的细胞毒性免疫细胞或根据第六方面的所述药物组合物用于治疗。
23、在第十一方面，我们提供了根据第一方面所述的结合分子、根据第二方面所述的car、根据第五方面所述的细胞毒性免疫细胞或根据第六方面所述的药物组合物用于治疗癌症，其中所述癌症表达p95her2。
24、在第十二方面，我们提供了一种诊断受试者中癌症的方法，所述方法包含：
25、(a)将来自受试者的细胞样本与权利要求1至4中任一项所述的结合分子接触，其中所述结合分子还包括检测部分；
26、(b)测定细胞是否表达p95her2；和
27、(c)如果细胞表达p95her2，则诊断患者患有癌症。
28、因此，第十二方面所述的方法是在样本上进行的体外方法。
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1.一种特异性结合包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的p95HER2的结合分子，所述结合分子包含共同形成抗原结合单元的轻链可变结构域(VL)和重链可变结构域(VH)；
2.如权利要求1所述的结合分子，
3.如权利要求1或2所述的结合分子，其中分子为抗体或其片段。
4.如权利要求1或2所述的结合分子，其中所述抗原结合单元为scFv。
5.一种嵌合抗原受体(CAR)，其中所述CAR包含如权利要求1、2或4任一项所定义的抗原结合单元。
6.如权利要求5所述的CAR，其中所述CAR包含如SEQ ID NO:11所示或与其具有至少90％同一性的序列的人CD8α铰链。
7.如权利要求6所述的CAR，其中所述CAR从N末端到C末端包含人CD8α铰链、人CD8α跨膜结构域、人4-1BB共刺激结构域和人CD3ζ信号传导结构域。
8.一种核酸，其中所述核酸编码如权利要求1-4任一项所述的结合分子或如权利要求5-7任一项所述的CAR。
9.一种载体，其中所述载体包含如权利要求8所述的核酸。>
10.一种细胞毒性免疫细胞，其中所述细胞毒性免疫细胞的细胞膜中表达如权利要求5-7任一项所述的CAR。
11.如权利要求10所述的细胞毒性免疫细胞，其中细胞为细胞毒性T细胞或NK细胞。
12.一种药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求1-4任一项所述的结合分子。
13.一种药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求8所述的核酸或如权利要求9所述的载体。
14.一种药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求10或11所述的细胞毒性免疫细胞。
15.一种治疗人类患者癌症的方法，其中所述方法包含施用如权利要求1-4任一项所述的结合分子、如权利要求10或11所述的细胞毒性免疫细胞或如权利要求12-14任一项所述的药物组合物的步骤。
16.一种治疗人类患者癌症的方法，其中所述方法包含以下步骤：
17.一种诊断癌症的方法，其中所述方法包含以下步骤：
18.如权利要求1-4任一项所述的结合分子、如权利要求5-7任一项所述的CAR、如权利要求10或11所述的细胞毒性免疫细胞或如权利要求12至14任一项所述的药物组合物用于治疗。
19.如权利要求1-4任一项所述的结合分子、如权利要求5-7任一项所述的CAR、如权利要求10或11所述的细胞毒性免疫细胞或如权利要求12至14任一项所述的药物组合物用于治疗癌症，其中所述癌症表达包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的p95HER2。
20.如权利要求19所述的结合分子、CAR、细胞毒性免疫细胞或药物组合物的用途，其中所述癌症为乳腺癌。
21.一种诊断受试者中癌症的方法，其中所述方法包含：
22.一种特异性结合包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的p95HER2的结合分子，
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种特异性结合包含如seq id no:17所示的氨基酸序列的p95her2的结合分子，所述结合分子包含共同形成抗原结合单元的轻链可变结构域(vl)和重链可变结构域(vh)；
2.如权利要求1所述的结合分子，
3.如权利要求1或2所述的结合分子，其中分子为抗体或其片段。
4.如权利要求1或2所述的结合分子，其中所述抗原结合单元为scfv。
5.一种嵌合抗原受体(car)，其中所述car包含如权利要求1、2或4任一项所定义的抗原结合单元。
6.如权利要求5所述的car，其中所述car包含如seq id no:11所示或与其具有至少90％同一性的序列的人cd8α铰链。
7.如权利要求6所述的car，其中所述car从n末端到c末端包含人cd8α铰链、人cd8α跨膜结构域、人4-1bb共刺激结构域和人cd3ζ信号传导结构域。
8.一种核酸，其中所述核酸编码如权利要求1-4任一项所述的结合分子或如权利要求5-7任一项所述的car。
9.一种载体，其中所述载体包含如权利要求8所述的核酸。
10.一种细胞毒性免疫细胞，其中所述细胞毒性免疫细胞的细胞膜中表达如权利要求5-7任一项所述的car。
11.如权利要求10所述的细胞毒性免疫细胞，其中细胞为细胞毒性t细胞或nk细胞。
12.一种药物组合物，其中所述药物组合物包含如权利要求1-4任一项所述的结合分子。
【专利技术属性】
技术研发人员：J·A·凯特，S·E·多拉吉，
申请(专利权)人：奥斯陆大学医院HF，
类型：发明
国别省市：
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