【技术实现步骤摘要】
本专利技术具体涉及一种制备抗人t细胞兔免疫球蛋白的层析用缓冲液。
技术介绍
1、抗人t细胞免疫球蛋白(anti-human t-lymphocyte globulin，简称atg)是一种强效的免疫抑制剂，其通过抑制经抗原识别后的淋巴细胞激活过程，特异性地破坏淋巴细胞。这种药物破坏淋巴细胞的途径主要是直接的淋巴细胞毒性以及在补体协助下对淋巴细胞产生细胞溶解作用，因此对骨髓没有毒性作用，被广泛应用于免疫系统疾病的治疗和器官移植中的免疫排斥预防。
2、不同来源的抗人t细胞免疫球蛋白(如兔源和猪源)具有不同的应用特点和优势。抗人t细胞兔免疫球蛋白用于器官移植的诱导治疗已有30多年的历史，特别是在肾移植和肝移植中被广泛应用，与硫唑嘌呤、泼尼松合用可提高脏器移植的成功率。
3、目前，国内关于抗人t细胞免疫球蛋白的研究主要集中在抗人t细胞猪免疫球蛋白上，而关于抗人t细胞兔免疫球蛋白的研究则甚少，市面上的抗人t细胞兔免疫球蛋白主要依靠进口、价格极高。专利cn 117069836 a公开了一种抗人t细胞兔免疫球蛋白的制备方法，其能获得质量好的抗人t细胞兔免疫球蛋白，但制备过程需要采用三步层析，使用两种不同体系的流动相，这导致生产中因工序增加操作失误，产品产率下降风险增加。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本专利技术提供了一种制备抗人t细胞兔免疫球蛋白的层析用缓冲液，所述缓冲液是含枸橼酸钠的水溶液；
2、所述水溶液中枸橼酸钠的浓度为10～50mm，水溶液的ph值为
3、进一步地，所述水溶液中枸橼酸钠的浓度为10～30mm，水溶液的ph值为3.5±0.2。
4、进一步地，所述水溶液的电导率为1～16ms/cm2。
5、更进一步地，所述水溶液在亲和层析时的电导率为3.5±1ms/cm2，在离子交换层析时的电导率为14±1ms/cm2。
6、更进一步地，离子交换层析使用的水溶液中还含有氯化钠；所述氯化钠的浓度为0.05～0.3m，优选0.1m。
7、本专利技术还提供了一种前述层析用缓冲液在制备抗人t细胞兔免疫球蛋白中的用途。
8、本专利技术最后提供了一种制备抗人t细胞兔免疫球蛋白的方法，包括如下步骤：
9、1)取经人外周血t淋巴细胞免疫的兔血清，置于不高于37℃的条件下，融浆，得料液a；
10、2)向料液a中加入醛化人红细胞，保持反应温度在0～8℃，反应6～12h后，分离红细胞，收集上清液b；向上清液b中加入醛化人胎盘渣，保持反应温度在0～8℃，反应6～12h后，分离胎盘渣，收集上清液c；
11、3)向上清液c中加入辛酸钠溶液，于室温下搅拌均匀，使用柠檬酸溶液将ph值调节至4.70±0.1，于室温下搅拌1～3h，搅拌结束后，将悬浊液在室温下静置0.5～1.5h，静置结束后，将悬浊液在10000g下离心10～30min，收集上清，使用滤器进行过滤，收集上清d。
12、4)调整上清液d的ph值至7.0±0.2，使用前述层析用缓冲液进行亲和层析，收集洗脱液e；
13、5)将洗脱液e经深层过滤，使用前述层析用缓冲液进行离子交换层析，收集流穿液f，即得包含抗人t细胞兔免疫球蛋白的产物。
14、进一步地，步骤2)所述醛化人红细胞加入量为血清体积20％～40％；所述醛化人胎盘渣加入量为料液b体积30～50％。
15、进一步地。步骤3)所述辛酸钠溶液加至上清液c中辛酸钠终浓度为50mm～60mm。
16、进一步地，所述步骤还包括：
17、采用10mm磷酸氢二钠溶液对流穿液f进行超滤置换，调整ph值至3.70±0.1，经低ph孵育21天后，随后对除病毒料液进行除菌；将半成品分装，即得。
18、更进一步地，步骤5)中深层过滤时所用的滤膜的孔径为0.45μm。
19、本专利技术在制备抗人t细胞兔免疫球蛋白的过程中，通过使用特定的单一体系的层析用缓冲液，共采用两步层析，即第一步亲和层析和第二步离子交换层析，就能获得抗体纯度与活性有保证的抗人t细胞兔免疫球蛋白。相对现有技术中公开的制备方法，本专利技术减少了操作步骤，避免了工序多易失误的问题，降低了成本，同时保证了抗人t细胞兔免疫球蛋白的质量，具备实际推广应用价值。
20、显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
21、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
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1.一种制备抗人T细胞兔免疫球蛋白的层析用缓冲液，其特征在于：所述缓冲液是含枸橼酸钠的水溶液；
2.根据权利要求1所述的层析用缓冲液，其特征在于：所述水溶液中枸橼酸钠的浓度为10～30mM，水溶液的pH值为3.5±0.2。
3.根据权利要求1或2所述的层析用缓冲液，其特征在于：所述水溶液的电导率为1～16ms/cm2。
4.根据权利要求3所述的层析用缓冲液，其特征在于：所述水溶液在亲和层析时的电导率为3.5±1ms/cm2，在离子交换层析时的电导率为14±1ms/cm2。
5.根据权利要求4所述的层析用缓冲液，其特征在于：离子交换层析使用的水溶液中还含有氯化钠；所述氯化钠的浓度为0.05～0.3M。
6.根据权利要求4所述的层析用缓冲液，其特征在于：所述氯化钠的浓度为0.1M。
7.权利要求1～6任一项所述层析用缓冲液在制备抗人T细胞兔免疫球蛋白中的用途。
8.一种制备抗人T细胞兔免疫球蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述步骤还包括：<...
【技术特征摘要】
1.一种制备抗人t细胞兔免疫球蛋白的层析用缓冲液，其特征在于：所述缓冲液是含枸橼酸钠的水溶液；
2.根据权利要求1所述的层析用缓冲液，其特征在于：所述水溶液中枸橼酸钠的浓度为10～30mm，水溶液的ph值为3.5±0.2。
3.根据权利要求1或2所述的层析用缓冲液，其特征在于：所述水溶液的电导率为1～16ms/cm2。
4.根据权利要求3所述的层析用缓冲液，其特征在于：所述水溶液在亲和层析时的电导率为3.5±1ms/cm2，在离子交换层析时的电导率为14±1ms/cm2。
5.根据权利要求4所述的层...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘兰军，杨盛理，容新宗，武志强，田嘉瑶，
申请(专利权)人：成都生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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