【技术实现步骤摘要】
本申请属于异种移植领域，主要涉及一种红细胞膜纳米颗粒及其制备方法与应用。
技术介绍
1、异种移植，顾名思义是指将一个物种的细胞、组织和器官移植到另一个物种体内。近年来，随着免疫生物学、基因工程学的研究深入发展，异种器官移植获得了一定的进步，有望成为解决移植器官短缺的有效手段。
2、异种移植的最大难题是免疫排斥，首先面临的是超急性排斥反应。超急性排斥存在于异种移植间，能在24h内将移植器官、组织或细胞杀死，其原因是激活了人体存在于血液中的天然抗体。血液中的天然抗体与异种移植物表面抗原结合激活补体系统。人体补体系统是由无数补体蛋白构成的复杂系统，包括3条途径：经典补体通路、替代补体通路和凝集素补体通路。最终激活的补体通路会借助膜攻击复合物导致移植失败。其次是急性排斥反应，与人体同种移植类似，一般发生在移植后数日至6个月内，人体特异性和非特异性免疫细胞如b细胞、t细胞、巨噬细胞和细胞杀伤因子均参与到急性排斥过程中。最后是慢性排斥反应，虽然这方面的研究还不多，但是至少异种移植物被认为可能会经历同种异体相类似的慢性免疫排斥。所以，异种移植后患者需要接受综合免疫抑制治疗，以有效抑制复杂的免疫排斥反应。
3、目前，广泛应用于心脏移植的脱细胞牛心包的戊二醛交联是异种移植抑制免疫排斥的传统手段，但是戊二醛的免疫原性及细胞毒性，导致移植物钙化倾向和慢性排斥反应的负面影响。近年来兴起的美国fda批准的甲氧基聚乙二醇 （mpeg）聚合物的修饰，而最近的证据表明，聚乙二醇特异性igm抗体和介导的补体激活，有导致超敏反应的风险。p>
4、传统技术中异种移植存在免疫原性高、毒性强，存在明显的免疫排斥的问题。
技术实现思路
1、基于此，本申请一实施例提供一种低免疫原性，无毒，能够抑制异种移植免疫排斥的红细胞膜纳米颗粒的制备方法。
2、本申请一方面提供一种红细胞膜纳米颗粒的制备方法，包括：
3、红细胞经溶血后用第一低渗溶液提取红细胞膜；用等渗溶液悬浮红细胞膜，超声，使细胞膜自组装，制备红细胞膜纳米颗粒；
4、超声的振幅为65mm/s~75mm/s，时间为4min~6min。
5、在其中一个实施例中，溶血的步骤包括用第二低渗溶液孵育所述红细胞；所述红细胞与所述第二低渗溶液的体积比为1：(28~32)。
6、在其中一个实施例中，溶血的条件包括于3.5℃~4.5℃的温度下，孵育1h~2h。
7、在其中一个实施例中，提取红细胞膜包括于3.5℃~4.5℃，8500g~9500g的条件下，离心14min~16min。
8、在其中一个实施例中，所述第一低渗溶液与第二低渗溶液各自独立地包括tris-hcl缓冲液和pbs中的一种或两种。
9、在其中一个实施例中，所述tris-hcl缓冲液的浓度为8mmol/l~12mmol/l，ph为7.3~7.5。
10、在其中一个实施例中，溶血前包括洗涤的步骤；
11、可选地，洗涤包括使用等渗溶液离心洗涤红细胞2次~4次。
12、在其中一个实施例中，所述等渗溶液包括ph为7.3~7.5的pbs缓冲液；
13、可选地，离心洗涤参数为3.5℃~4.5℃，750g~850g，离心4min~6min。
14、本申请另一方面提供上述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法制备得到的红细胞膜纳米颗粒。
15、本申请另一方面还提供上述的红细胞膜纳米颗粒在异种移植中的应用。
16、本申请使用低渗超声的处理方法，从受体血液中提取出红细胞膜纳米颗粒，制备得到的红细胞膜纳米颗粒直径主要分布于70nm~200nm，粒径较小。另外，本申请的选用的红细胞易于获取，成熟红细胞因缺乏细胞核核细胞器易于提取和纯化。由于红细胞膜上广泛存在cd47、c8bp、hrp、daf、cd99，可与单核巨噬细胞系统中的cd172α，也是sirpα，逃避免疫系统的监视，具有免疫伪装特性。采用受体来源的红细胞膜是天然成分，在体内崩解时不会释放有害物质，具有良好的生物相容性。所以说受体红细胞膜纳米颗粒免疫伪装方法在异种移植中，可使得受体免疫系统将移植物识别为“自我”，抑制免疫排斥反应，有望成为抑制异种移植中宿主免疫排斥反应的新方法。
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1.一种红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，溶血的步骤包括用第二低渗溶液孵育所述红细胞；所述红细胞与所述第二低渗溶液的体积比为1：(28~32)。
3.根据权利要求1所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，溶血的条件包括于3.5℃~4.5℃的温度下，孵育1h~2h。
4.根据权利要求1所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，提取红细胞膜包括于3.5℃~4.5℃，8500g~9500g的条件下，离心14min~16min。
5.根据权利要求2~4任一项所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述第一低渗溶液与第二低渗溶液各自独立地包括Tris-HCl缓冲液和PBS中的一种或两种。
6.根据权利要求5所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，
7.根据权利要求6所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，溶血前包括洗涤的步骤；
8.根据权利要求7所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，所述等渗溶液
9.权利要求1~8任一项所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法制备得到的红细胞膜纳米颗粒。
10.权利要求9所述的红细胞膜纳米颗粒在异种移植中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，溶血的步骤包括用第二低渗溶液孵育所述红细胞；所述红细胞与所述第二低渗溶液的体积比为1：(28~32)。
3.根据权利要求1所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，溶血的条件包括于3.5℃~4.5℃的温度下，孵育1h~2h。
4.根据权利要求1所述的红细胞膜纳米颗粒的制备方法，其特征在于，提取红细胞膜包括于3.5℃~4.5℃，8500g~9500g的条件下，离心14min~16min。
5.根据权利要求2~4任一项所述的红细胞...
【专利技术属性】
技术研发人员：何云帆，陈凯琪，鲁峰，
申请(专利权)人：南方医科大学南方医院，
类型：发明
国别省市：
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