【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于细胞生物学，具体涉及一种用于神经元损伤检测的试剂盒。
技术介绍
1、在现代医学和生物医学研究领域，准确和迅速地检测神经元损伤对于深入理解神经系统疾病的发病机理、及时诊断及制定有效治疗方案具有决定性的意义。神经元损伤或死亡在许多神经退行性疾病（如阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化症等）和急性神经损伤（如脑震荡、脊髓损伤）中是关键的病理过程。在这一背景下，乳酸脱氢酶（lacticdehydrogenase，ldh）的测定作为一种反映细胞损伤程度的生物标志物，被广泛应用于实验和临床研究中。
2、ldh是一种在所有生物体的细胞质中广泛分布的酶，负责催化乳酸和丙酮酸之间的可逆转换，在细胞的代谢过程中起到关键作用。当细胞膜完整性受损，如在神经元损伤情况下，ldh会大量释放到细胞外，导致血液或其他生物体液中ldh水平升高。因此，ldh的测量为评估细胞死亡和组织损伤提供了一种有效的指标。
3、然而，尽管利用ldh作为细胞损伤指标的方法在理论上具有明显的优势，但在实际应用中遇到了多重挑战。特别是在神经元损伤的检测中，传统的ldh测定方法面临着诸多限制。一方面，神经组织的复杂性要求检测方法具有较高的灵敏度和特异性，然而，现有的ldh试剂盒在应对微量样本和确保快速响应方面往往不够理想。此外，神经元的ldh释放动态可能与其他类型细胞有所不同，这要求检测系统能够适应神经元特有的反应速率和代谢特征。另一方面，市场上现有的ldh试剂盒通常在长期存储过程中存在稳定性问题，这限制了其广泛应用的可行性。加之，标准操作过程中对样
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术公开了一种用于神经元损伤检测的试剂盒。具体而言，本专利技术旨在实现以下几个关键目标：
2、1. 提高检测灵敏度：通过优化试剂配方，增强试剂盒对神经元ldh释放的检测灵敏度，使其能够准确捕捉到早期和/或微量的神经元损伤信号，为神经系统疾病的早期诊断和干预提供强有力的支持。
3、2. 增加试剂稳定性：通过引入特定的稳定剂，显著提高试剂在贮存和使用过程中的稳定性，延长试剂盒的有效使用期限，从而减少因试剂不稳定带来的测定误差，确保检测结果的准确性和重复性。
4、3. 优化试剂外观：通过加入无影响的蓝色染料，改进工作液的颜色，使样品的加入过程具有更好的视觉反馈，从而提高实验操作的准确性和效率。
5、本专利技术包括以下技术方案：
6、一种用于神经元损伤检测的试剂盒，所述试剂盒含有酶检测液和底物溶液；
7、所述酶检测液中含有nad+、diaphorase、抗氧化剂、蛋白稳定剂、糖类物质和缓冲液；
8、所述底物溶液中含有乳酸、wst-1、染料指示剂和缓冲液。
9、进一步的，上述一种用于神经元损伤检测的试剂盒，所述染料指示剂为brilliantblue fcf，含量为0.1-1mg/ml。
10、进一步的，上述一种用于神经元损伤检测的试剂盒，所述抗氧化剂为0.05-0.5mm的抗坏血酸磷酸酯镁。
11、进一步的，上述一种用于神经元损伤检测的试剂盒，所述蛋白稳定剂为0.2-2mg/ml的β-环糊精。
12、进一步的，上述一种用于神经元损伤检测的试剂盒，所述糖类物质为3-10mg/ml的海藻糖。
13、进一步的，上述一种用于神经元损伤检测的试剂盒，所述缓冲液为0.2m tris-hcl。
14、进一步的，上述一种用于神经元损伤检测的试剂盒，所述nad+含量为0.6-4mg/ml、diaphorase含量为2-5u/ml。
15、进一步的，上述一种用于神经元损伤检测的试剂盒，所述乳酸含量为3-8mg/ml、wst-1含量为0.1-0.5mg/ml。
16、进一步的，本专利技术公开了上述一种用于神经元损伤检测的试剂盒的检测方法，所述检测方法不用于疾病的诊断和治疗目的，所述检测方法包括：
17、a. 准备待测神经元样本，确保样本在适宜条件下收集和保存；
18、b. 配制检测工作液：将酶检测液和底物溶液按照1:1比例混合，制成检测工作液；
19、c. 将检测工作液以待测神经元样本相同的体积加入到样本中，加样过程中观察染料指示剂提供的蓝色指示，确保检测工作液正确加入；
20、d. 在37℃下孵育10分钟，孵育期间观察颜色变化。
21、e. 待出现明显橘黄色则代表反应充分，此时添加1m乙酸终止反应，通过酶标仪在490nm处测定吸光度。
22、f. 根据吸光度值评估神经元损伤程度，高吸光度值指示较高程度的细胞损伤。
23、相比现有技术，本专利技术具有如下突出的有益效果：
24、第一，提高检测灵敏度。通过优化ldh底物溶液的成分，本试剂盒能够更敏感地检测出低浓度的ldh释放，从而在神经元损伤早期提供准确的检测结果。这对于神经科学研究和临床诊断具有重要价值，尤其是在评估神经保护剂效果或早期干预措施的有效性时。
25、第二，增加试剂稳定性。引入的稳定剂配方（包括抗氧化剂、蛋白稳定剂和糖类物质）显著提高了试剂在储存过程中的稳定性，减少了由于试剂降解导致的测定误差，确保了检测结果的准确性和重复性。
26、第三，缩短反应时间。本专利技术的试剂盒设计使得检测过程仅需10分钟孵育时间，大大缩短了传统方法中需要的反应时间。这一改进为快速诊断和实时监测提供了可能，特别适用于需要快速反馈的研究和临床场景。
27、第四，优化实际外观。加入的无毒水溶性蓝色染料作为染料指示剂，不仅美观，还提高了操作的便利性和准确性。通过视觉反馈，操作者可以更容易地确认样本是否正确加入，减少操作过程中的错误，提高实验的可靠性。
28、本专利技术提供的用于神经元损伤检测的试剂盒，在提高检测灵敏度、增加试剂稳定性和优化试剂外观方面均达到了创新性的改进，为神经元损伤的检测和研究提供了一种更加高效、准确和用户友好的工具。
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1.一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有酶检测液和底物溶液；
2.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述染料指示剂为Brilliant Blue FCF，含量为0.1-1mg/mL。
3.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述抗氧化剂为0.05-0.5mM的抗坏血酸磷酸酯镁。
4.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述蛋白稳定剂为0.2-2mg/ml的β-环糊精。
5.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述糖类物质为3-10mg/ml的海藻糖。
6.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为0.2M Tris-HCl。
7.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述NAD+含量为0.6-4mg/mL、Diaphorase含量为2-5U/mL。
8.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，
9.如权利要求1-8任一项所述的用于神经元损伤检测的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述检测方法不用于疾病的诊断和治疗目的，所述检测方法包括：
...【技术特征摘要】
1.一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有酶检测液和底物溶液；
2.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述染料指示剂为brilliant blue fcf，含量为0.1-1mg/ml。
3.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述抗氧化剂为0.05-0.5mm的抗坏血酸磷酸酯镁。
4.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述蛋白稳定剂为0.2-2mg/ml的β-环糊精。
5.根据权利要求1所述的一种用于神经元损伤检测的试剂盒，其特征在于，所述糖类物质为3-10...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜梦，李民强，阎侠，
申请(专利权)人：大连博格林生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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