本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及EMC复合体作为间质性肺疾病治疗靶点的应用。公开了EMC复合体抑制剂在制备治疗间质性肺疾病药物中的应用。通过药物诱导在新生小鼠肺部AT2细胞中敲除EMC复合体亚基EMC3，破坏EMC复合体的稳定与功能，能有效改善幼年小鼠肺部肺泡简化的病理表现，拯救AT2细胞相关功能障碍，且正常小鼠体内未观察到明显的不良影响，证明EMC复合体在儿童间质性肺病中是有效的干预靶点。在成年小鼠模型和临床患者来源细胞模型中也证实了破坏EMC复合体功能可有效修复肺泡简化表型与AT2细胞的线粒体功能障碍，确定了EMC复合体/亚基作为治疗间质性肺病的药物靶点及其在筛选治疗药物中的应用潜力。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，尤其涉及emc复合体作为间质性肺疾病治疗靶点的应用。
技术介绍
1、间质性肺疾病（interstitial lung disease，简称ild）是一类异质性的呼吸系统疾病，包括有特发性肺纤维化、过敏性肺炎以及结缔组织病相关间质性肺疾病等。间质性肺疾病在儿童和成人中均有发生，多为慢性，发病率和死亡率较高，相关病变会影响肺泡周围的组织和空间。间质性肺疾病中有许多疾病具有很高的致残率和死亡率。比如，特发性肺纤维化患者的中位生存期不足 3 年，急性间质性肺炎还可能使患者很快死亡。
2、间质性肺病的病变会侵入到肺泡区域，导致肺泡区域病变。肺表面活性物质是由ii型肺泡上皮细胞（at2细胞）合成的脂质与相关蛋白的复合物，其中肺表面活性物质相关蛋白c（sp-c）由sftpc基因编码，而sftpc突变与间质性肺病发生密切相关，其中sp-c(i73t)突变蛋白约占与肺部疾病相关的sp-c突变的30%，是迄今为止最常见的sp-c突变体。相关研究表明sp-c(i73t)蛋白的异常转运和加工对at2细胞具有生物毒性，导致细胞内蛋白质稳态失衡等。而蛋白质稳态的失衡可能导致异常蛋白质的聚集和沉降，进而损害细胞结构和功能，引发如阿尔茨海默病、帕金森病和肝纤维化等，近年研究发现间质性肺病也与此相关。但是，目前对与蛋白质稳态的失衡相关的间质性肺疾病的临床干预仍缺乏预防与治疗的靶向药物，尤其对于进行性加重的慢性终末期患者来说，尚无除肺移植以外的其他有效治疗策略，而移植供体来源、术后并发症等诸多因素严重限制了肺脏移植治疗的开展。</p>3、对于蛋白质稳态失衡相关的疾病研究也具有很大局限性，目前临床治疗手段缺乏特异的靶向性，（1）药物治疗：可能存在副作用，并且对于某些疾病，目前尚无有效的药物。（2）蛋白质降解增强剂：有些相关药物正在研发中，其作用是通过增强细胞内蛋白质降解，进而清除异常沉积的蛋白。但是这些药物的疗效和安全性目前仍不清楚，有待进一步研究。（3）对症治疗：间质性肺病目前具有致病原因复杂、对患者活动能力影响具有个体差异等特点。
4、因此，针对性治疗方案的推出，以及更有效和安全的治疗方法及靶向药物的研发，符合患者健康与临床缺口的需求。
技术实现思路
1、
sftpc
i73t突变产生的sp-c(i73t)蛋白错误加工转运和异常积累造成细胞内蛋白质稳态失衡，导致at2细胞损伤而引发了间质性肺病的发生。内质网是参与蛋白质折叠和分泌的主要细胞器，emc复合体是内质网中蛋白折叠所需要的10亚基跨膜蛋白复合物，在真核生物中具有非常高的保守性，哺乳动物中主要表达10种emc（emc1-emc10），核心亚基emc3与各emc成员形成复合体执行生物学功能。蛋白质稳态失衡相关的生理或病理条件可触发内质网应激（er stress），例如蛋白质合成升高（例如由于病毒感染）、导致错误折叠的基因突变和氧化应激等。
2、此前小鼠和细胞模型中多采用诱导过量表达sp-c(i73t)蛋白，反映的是临床急性损伤的病理状况。近年来，干细胞技术尤其是人诱导多能干细胞（ihpsc）技术的发展为现代精准医学提供了有效的体外平台。本专利技术研发过程中应用了已建立的
sftpc
i73t突变基因的敲入小鼠模型，来模拟自然生理条件下
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i73t突变相关疾病，以及携带
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i73t突变的ild患者来源的ipsc诱导分化出的肺泡at2（iat2）细胞作为模拟临床的研究模型，证明了emc复合体在调节突变蛋白的细胞内运输中的关键作用，发现破坏emc复合体功能能够显著改善与
sftpc
i73t相关的肺泡简化表型，确定了emc复合体作为治疗
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i73t相关间质性肺病的靶向药物靶点的应用潜力。
3、基于此发现，本专利技术的第一个方面是提供了emc复合体作为间质性肺疾病治疗靶点的应用。
4、本专利技术的第二个方面是提供了emc复合体抑制剂在制备治疗间质性肺疾病的药物中的用途；进一步地，所述间质性肺疾病为
sftpc突变导致的间质性肺病。
5、优选地，所述抑制剂为破坏emc复合体稳定与功能的物质或手段，包括抑制emc复合体蛋白活性的物质、抑制emc复合体亚基或emc复合体蛋白表达的基因工具。
6、进一步优选地，所述基因工具包括特异性抑制emc复合体亚基基因表达的rna干扰、shrna、基因编辑或基因敲除。
7、基于前期研究发现，所述emc复合体亚基如emc1、emc3和emc4等，均具有影响emc复合体稳定性的作用，但是通过前期测试靶向不同复合体亚基的体外实验，发现靶向emc3亚基的处理对破坏emc复合体稳定性的效果最优，因此，后期病理模型实验选择emc3进行作为干预靶点。
8、在一个优选实施例中，本专利技术选择的emc复合体亚基为核心亚基emc3；所述基因工具为emc3基因特异性shrna（其质粒已商品化可市购得到）。
9、本专利技术发现emc复合体中关键亚基基因emc3的拷贝数在多种疾病中都有增加和减少的趋势。在目前的研究中，对
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i73t患者来源的iat2细胞样本进行了荧光染色分析，prosp-c用于检测sp-c蛋白或sp-c(i73t)突变蛋白前体的细胞定位。同时对正常小鼠和携带
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i73t突变的小鼠的肺组织样本进行了蛋白印迹分析，发现sp-c(i73t)突变蛋白导致了临床样本与小鼠模型中emc复合体相关亚基尤其是emc3和emc4蛋白的表达量升高。
10、本专利技术通过药物诱导在新生小鼠肺部at2细胞中敲除emc复合体核心亚基基因emc3，破坏emc复合体的稳定与功能，发现能够有效改善幼年小鼠肺部肺泡简化的病理表现，拯救了at2细胞的相关功能障碍。而在正常的小鼠体内诱导敲除emc并没有影响小鼠肺部正常的结构与功能，也未观察到其它的不良影响，证明了emc复合体/亚基在儿童间质性肺病中是安全有效的干预靶点。在成年小鼠模型中同样证实了破坏emc复合体功能可以有效修复肺泡简化表型与at2细胞的线粒体功能障碍，证明了emc复合体/亚基也能够作为成年间质性肺病的有效治疗靶点。在临床患者来源细胞模型中同样证明了emc复合体能够作为有效治疗靶点的作用。
11、本专利技术的第三个方面提供了一种治疗与
sftpc突变相关间质性肺病的药物，所述药物本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.EMC复合体抑制剂在制备治疗间质性肺疾病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述间质性肺疾病为SFTPC突变相关的间质性肺病。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制剂包括抑制EMC复合体蛋白活性的物质、抑制EMC复合体亚基或EMC复合体蛋白表达的基因工具。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因工具包括特异性抑制EMC复合体亚基表达的RNA干扰、shRNA、基因编辑或基因敲除。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述EMC复合体亚基包括EMC1、EMC3、EMC4。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物包括活性成分EMC复合体抑制剂和药学上可接受的辅料。
7.EMC复合体蛋白或EMC亚基作为靶点在筛选用于治疗间质性肺疾病的药物中的应用，其特征在于，所述药物具有如下作用中的一种或多种：（1）抑制EMC复合体蛋白活性，（2）抑制或沉默EMC亚基和/或EMC复合体蛋白的表达。
8.一种试剂盒在筛选治疗间质性肺疾病的药物中的用途，其特征在于，所述试剂盒含有检测EMC复合体蛋白或EMC亚基表达量的试剂。
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【技术特征摘要】
1.emc复合体抑制剂在制备治疗间质性肺疾病药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述间质性肺疾病为sftpc突变相关的间质性肺病。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制剂包括抑制emc复合体蛋白活性的物质、抑制emc复合体亚基或emc复合体蛋白表达的基因工具。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因工具包括特异性抑制emc复合体亚基表达的rna干扰、shrna、基因编辑或基因敲除。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述em...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐晓芳，林鑫华，魏伟，孙雨晴，
申请(专利权)人：粤港澳大湾区精准医学研究院广州，
类型：发明
国别省市：
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