【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及油橄榄育种，具体而言，涉及一种促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法。
技术介绍
1、油橄榄(olea europaea l.)为木犀榄属常绿乔木，是世界著名的木本油料兼果用树种。油橄榄含有丰富优质的食用植物油-橄榄油，而且餐用的油橄榄果也是人体所需维生素和微量元素的储存宝库，经乳酸菌发酵后所产生的乳酸还可以促进营养元素的吸收。油橄榄原产于小亚细亚，我国于1964年开始引种，主要种植在云南、四川和甘肃三省。油橄榄是一种喜温耐寒农作物，具有抗干旱、耐盐碱、抗瘠薄、不与粮棉争地的特点，适宜山地与丘陵地区栽培。橄榄油是采用油橄榄鲜果、冷榨即食的纯天然木本食用植物油，具有预防心血管疾病、增强人体免疫力、防癌、延缓衰老等功效，同时还可用来生产多种医疗、保健产品和化妆产品等，具有重要的经济价值，是其他任何种子植物油无法媲美的，故被誉为“植物油皇后”、“地中海的液体黄金”和“人类健康之油”。
2、然而大部分栽培区的油橄榄都存在栽培面积大而产量低的问题，且大小年现象显现，许多地方甚至存在花而不实、千花一果，植株能正常生长但不能开花挂果等问题，这严重影响了油橄榄育种及油橄榄产业的发展。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其能够改善和促进油橄榄愈伤组织的诱导形成及增殖，从而产生大量高质量、活力强的愈伤组织，并为缩短育种周期、产生大量高效优质种苗和开展分子遗传育种奠定基础。
2、本专利技术的实施例通过以下技术方案实现：
3、一种促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，包括以下步骤：
4、外植体预处理：以油橄榄克罗莱卡幼嫩茎段作为外植体，对外植体进行消毒；对外植体进行消毒处理可以降低外植体污染率和褐化率，提高愈伤组织的诱导率；
5、外植体诱导：将处理后的外植体接种到诱导培养基暗培养1～2星期，诱导培养基以1/2ms培养基为基础，还包括以下含量组分：3.0-3.5g/l琼脂、10-18g/l蔗糖、0.2-5mg/l激素、380-410mg/l钾盐、1000-1200mg/l镁盐、400-450mg/l钙盐、5-10mg/l维生素c、5-10mg/l半胱氨酸和5-8mg/l柠檬酸,ph5.8；激素能更强烈地刺激愈伤组织的形成，加快诱导速度，提高愈伤组织诱导率，额外添加的钾盐、镁盐和钙盐对愈伤组织的诱导进一步起到促进作用，能大大提高愈伤组织的诱导及形成，配合维生素c、半胱氨酸和柠檬酸，在诱导愈伤组织形成的过程中可以有效抑制外植体褐化，即抑制酚类化合物的生成和降低多酚氧化酶的活性，从而影响酶促反应的进行达到抗褐化作用，进一步提高愈伤组织诱导率；
6、愈伤组织扩增培养：将诱导培养后的组织转移到扩增培养基暗培养2～4星期，扩增培养基以1/2white培养基为基础，还包括以下含量组分：200-240mg/l水解酪蛋白、10-30mg/l酵母提取物、10-20mg/l麦芽汁、20-30g/l蔗糖、3.0-3.5g/l琼脂和0.1-0.3mg/l萘乙酸，ph5.8；水解酪蛋白中含有多种氨基酸，含氮和蛋白质含量高达80％，可以丰富培养基营养成分，刺激细胞分裂，促进愈伤组织分化，酵母提取物和麦芽汁可以为培养基提供生理活性物质和微量元素，含有氨基酸激素酶，可以进一步促进愈伤组织增殖和分化，通过蔗糖形成高糖环境，使得培养基渗透压适当升高，促进细胞增殖和胚状体形成。其中，优选琼脂强度为1400g/cm2。
7、进一步的，外植体消毒过程为：先用75％的酒精处理30～60s，用无菌水清洗3-5次，再用0.1％氯化汞溶液+吐温-80消毒5min，最后用无菌水清洗3-5次。通过酒精对外植体进行浸泡实现杀菌，在利用氯化汞和吐温-80对外植体进行消毒，吐温-80可以强化杀菌效果，让外植体污染率和褐化率较低。
8、进一步的，激素为玉米素核苷、6-卡氨基嘌呤和α-萘乙酸中的一种或多种。玉米素核苷(zr)能促进细胞分裂，诱导芽的增殖，抑制根的形成，延缓衰老过程和激活基因的表达和促进一般代谢。6-卡氨基嘌呤(6-ba)促进细胞分裂。α-萘乙酸(naa)能迅速促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。
9、进一步的，激素为0.5mg/l玉米素核苷。在该浓度下愈伤组织诱导率更高。
10、进一步的，激素为2mg/l6-卡氨基嘌呤和0.2mg/lα-萘乙酸。两者协同作用，可以提高愈伤组织诱导率，达到最佳。在其他实施方式中，激素为4.0mg/lα-萘乙酸和0.5mg/l玉米素核苷。
11、进一步的，钾盐为氯化钾，镁盐为硫酸镁，钙盐为硝酸钙、硫酸钙、氯化钙或葡萄糖酸钙。
12、进一步的，钙盐为氯化钙。
13、本专利技术实施例的技术方案至少具有如下优点和有益效果：
14、本专利技术中对外植体进行消毒处理可以降低外植体污染率和褐化率，提高愈伤组织的诱导率；在外植体诱导培养中，以1/2ms培养基为基础，加入激素促进细胞分裂，加入钾钙镁无机盐促进对愈伤组织的诱导作用，再配合维生素c、半胱氨酸和柠檬酸抑制诱导过程中外植体的褐化，几者配合大大提高愈伤组织的诱导率，促进愈伤组织形成。随后以1/2white培养基为基础进行扩增培养，利用水解酪蛋白提供有机氮以及复合氨基酸环境，刺激细胞分裂，利用酵母提取物和麦芽汁提供生理活性物质和微量元素，促进愈伤组织增殖和分化，利用蔗糖提供高糖环境，促进细胞增殖和胚状体形成，几者配合可以大大促进愈伤组织的增殖和分化，提高出愈率。通过两次培养提高对油橄榄愈伤组织诱导形成及增殖的效果,从而掌握可以大大促进油橄榄愈伤组织诱导并形成行之有效的途径，产生大量优质高效的愈伤组织，为后续的油橄榄种苗产业提供大量优质高效的油橄榄种苗，也为即将开展的油橄榄分子遗传育种奠定基础，也为培育具有中国自主知识产权的油橄榄良种和推进油橄榄产业健康持续发展提供了坚实可靠的保障。
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1.一种促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：外植体消毒过程为：先用75％的酒精处理30～60s，用无菌水清洗3-5次，再用0.1％氯化汞溶液+吐温-80消毒5min，最后用无菌水清洗3-5次。
3.根据权利要求1所述的促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：所述激素为玉米素核苷、6-卡氨基嘌呤和α-萘乙酸中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：所述激素为0.5mg/L玉米素核苷。
5.根据权利要求3所述的促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：所述激素为2mg/L6-卡氨基嘌呤和0.2mg/Lα-萘乙酸。
6.根据权利要求1所述的促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：所述钾盐为氯化钾，所述镁盐为硫酸镁，所述钙盐为硝酸钙、硫酸钙、氯化钙或葡萄糖酸钙。
7.根据权利要求6所述的促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：所
...【技术特征摘要】
1.一种促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：外植体消毒过程为：先用75％的酒精处理30～60s，用无菌水清洗3-5次，再用0.1％氯化汞溶液+吐温-80消毒5min，最后用无菌水清洗3-5次。
3.根据权利要求1所述的促进油橄榄愈伤组织高效优质出愈的方法，其特征在于：所述激素为玉米素核苷、6-卡氨基嘌呤和α-萘乙酸中的一种或多种。
4.根据权利要求3所述的促进油橄...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈勃，王薪涵，杨明娟，胡蓉，周德生，
申请(专利权)人：凉山州中泽新技术开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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