【技术实现步骤摘要】
(一)本专利技术属于微生物发酵，具体涉及一株总状毛霉sj6-19及其在提取沙棘叶总黄酮中的应用。
技术介绍
0、(二)
技术介绍
1、沙棘(hippophae rhamnoides)，又名黑刺、醋柳等，是胡颓子科落叶小乔木或灌木，广泛分布于中国、蒙古、俄罗斯和北欧等地，在我国主要分布于华北、西北和西南地区，常生长于海拔800–3600米温带地区向阳的山嵴、谷地、干涸河床地或山坡，多砾石或沙质土壤或黄土上。沙棘由于能够抵抗干旱、风和沙的侵蚀，可扎根于盐碱土中生长，因此，它被广泛应用于盐碱草地和森林的恢复、沙漠绿化，具有很高的生态重要性。
2、沙棘的各个部位，包括果实、叶以及果皮中都富含维生素、多糖、多酚、黄酮、不饱和脂肪酸和微量元素等多种活性成分，具有极高的药用和营养价值，是一种药食同源性植物，它在改善肠道菌群、保护心血管系统、抗氧化、降低血糖和血脂方面有显著作用。沙棘含有的众多活性成分中，黄酮备受人们关注，其具有良好的抗氧化与延迟衰老、抗炎和抑菌、调节血糖血脂、抗心血管疾病等作用，作为一种植物来源的天然活性物质，沙棘叶黄酮可应用于食品、药品和保健品等多个领域。
3、目前有较多关于从沙棘果中提取总黄酮的研究报道，由于沙棘果可以直接药用和食用，以及开发成沙棘果干、沙棘果汁、沙棘膏等产品，所以从沙棘果中提取总黄酮成本较高，一些沙棘果加工企业，为了提高果实的利用率，会使用沙棘果渣提取总黄酮。相比之下，沙棘叶资源还没有得到开发利用。近些年来的研究发现，沙棘叶中黄酮和多酚等有效物质含量与沙棘果实相当，而目前
4、目前有不少关于从沙棘叶中提取总黄酮的研究报道，基本方法都是乙醇提取法，在此基础上，有采取超声波、微波和酶解等辅助措施提取，都能显著提高总黄酮提取得率，但提高的幅度有限。近年来，酶解法在提取植物黄酮中有较多的应用，其能够显著提高提取得率，而且条件温和，提取的黄酮活性好，缺点是增加了酶的使用成本。酶解法提取常用的纤维素酶、蛋白酶和果胶酶等都是微生物发酵产生，如果利用微生物直接发酵提取原料，微生物在生长中产生多种水解酶，就能够水解植物的细胞壁中的纤维素、半纤维素、果胶等物质，从而有利于细胞壁中结合态黄酮的释放，当然，微生物也可能产酶分解黄酮，但可以选择合适的发酵菌种，以及控制好发酵程度，达到酶解破坏细胞壁，但又尚未产酶降解黄酮，从而能够提高总黄酮提取得率，而且相比于酶解法提取，微生物发酵辅助提取法节省了酶的成本。
5、为了能够开发利用沙棘叶，克服从沙棘叶提取总黄酮得率低的问题，本专利技术对沙棘叶做微生物发酵预处理步骤，再采用乙醇超声提取，可使沙棘叶总黄酮提取得率大幅度提高。
技术实现思路
0、(三)
技术实现思路
1、本专利技术目的是提供一株用于提高沙棘叶总黄酮提取率新的微生物菌株—总状毛霉(mucor racemosus)sj6-19及其在提取沙棘叶总黄酮中的应用，沙棘叶经该菌株发酵后，再经乙醇超声提取，总黄酮提取得率显著提高。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：
3、本专利技术提供一株新的微生物菌株—总状毛霉(mucor racemosus)sj6-19，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号gdmcc no:64324，保藏日期2024年3月1日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。
4、本专利技术所述总状毛霉sj6-19是从沙棘叶的微生物富集培养物中分离，经过筛选并诱变选育获得的优良菌株。所述总状毛霉sj6-19的形态特征如下：划线接种在马铃薯葡萄糖琼脂(pda)平板培养基上，28℃培养，菌落初期为浅白色绒毛状，随着培养时间的延长，逐渐变为灰白色，菌丝细长，直立，高度约0.6–0.8cm，表面有少量黑色孢子囊；无假根和匍匐菌丝，孢子囊梗单轴状分枝，分枝不规则；孢子囊呈球形、灰褐色；孢子呈球形或短椭圆形，表明光滑，大小5–8μm×6–10μm。
5、所述的总状毛霉sj6-19的核糖体dna内转录间隔区(ribosomal dna internaltranscribed spacer，rdna-its)核苷酸序列为seq id no.1所示。
6、本专利技术还提供一种所述总状毛霉sj6-19在提取沙棘叶总黄酮中的应用，所述应用的方法包括以下步骤：(1)向沙棘叶粉中加入总状毛霉sj6-19的孢子液，搅拌均匀后于28–30℃发酵42–54h，获得沙棘叶发酵物；(2)向沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35–40℃保温1.5–2.5h，再补充无水乙醇，经超声提取后过滤，获得沙棘叶醇提液；(3)沙棘叶醇提液经减压蒸干，无水乙醇溶解和真空干燥，得沙棘叶总黄酮提取物。
7、进一步，所述步骤(1)中的沙棘叶是植物沙棘(hippophae rhamnoides)的绿色叶片，采摘后自然晾干；沙棘叶粉是沙棘叶经85℃烘干后，粉碎过40目筛的细粉。
8、进一步，所述步骤(1)中的总状毛霉sj6-19孢子液的制备方法为：低温保存的总状毛霉sj6-19孢子接种于马铃薯葡萄糖琼脂(pda)平板培养基上，于28℃培养56–72h后，加无菌蔗糖水溶液于培养物中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液；优选将孢子液用无菌蔗糖水溶液调整孢子浓度为5×106–10×106个/ml。所述的无菌蔗糖水溶液中蔗糖浓度为10–20g/l，高压蒸汽115℃灭菌15min。所述的pda平板培养基是成品马铃薯葡萄糖琼脂培养基(青岛海博生物技术有限公司)，用自来水按46g/l的浓度配制，ph自然，高压蒸汽121℃灭菌20min。
9、进一步，所述步骤(1)中的总状毛霉sj6-19孢子液体积用量以沙棘叶粉质量计为2–3ml/g。
10、进一步，所述步骤(2)中的沙棘叶醇提液的制备方法为：沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35–40℃保温1.5–2.5h，然后补充无水乙醇，转入水温40–50℃的超声波清洗机中，100–150w超声提取30–40min，超声提取结束后，布氏漏斗抽滤，收集滤液，获得沙棘叶醇提液。所述去离子水的体积加入量以原料沙棘叶粉质量计为7.5–9.0ml/g；所述的无水乙醇体积加入量以原料沙棘叶粉质量计为17.5–21.0ml/g。
11、进一步，所述的步骤(3)中的沙棘叶总黄酮提取物的制备方法为：将沙棘叶醇提液于45℃、–0.1mpa条件下蒸馏至无液体流出，加入体积为原料沙棘叶质量计1–2ml/g的无水乙醇，充分振荡后于8000r/min离心5–10min，上清液于转入一洁净培养皿中，50℃、–0.1mpa条件下真空干燥至恒重，得总黄酮提取物。
12、与现有技术相比，本专利技术的有益效果主要体现在：本专利技术提供一株能够提高沙棘叶总黄酮提取率的新菌株--总状毛霉sj6-19，是针对能够水解沙棘叶细胞壁而有目的筛选和诱变选育本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.总状毛霉(Mucor racemosus)SJ6-19，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号GDMCC No:64324，保藏日期2024年3月1日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。
2.一种权利要求1所述总状毛霉SJ6-19在提取沙棘叶总黄酮中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用的方法包括以下步骤：(1)向沙棘叶粉中加入总状毛霉SJ6-19的孢子液，搅拌均匀后于28–30℃发酵42–54h，获得沙棘叶发酵物；(2)向沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35–40℃保温1.5–2.5h，再补充无水乙醇，经超声提取后过滤，获得沙棘叶醇提液；(3)沙棘叶醇提液经减压蒸干，无水乙醇溶解和真空干燥，得沙棘叶总黄酮提取物。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)中的沙棘叶是植物沙棘(Hippophaerhamnoides)的绿色叶片，采摘后自然晾干；沙棘叶粉是沙棘叶经85℃烘干后，粉碎过40目筛的细粉。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)中的总
6.如权利要求3或5所述的应用，其特征在于，将孢子液用无菌蔗糖水溶液调整孢子浓度为5×106–10×106个/mL，所述的无菌蔗糖水溶液中蔗糖浓度为10–20g/L。
7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)中的总状毛霉SJ6-19孢子液体积用量以沙棘叶粉质量计为2–3mL/g。
8.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(2)中的沙棘叶醇提液的制备方法为：沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35–40℃保温1.5–2.5h，然后补充无水乙醇，转入水温40–50℃的超声波清洗机中，100–150W超声提取30–40min，超声提取结束后，布氏漏斗抽滤，收集滤液，获得沙棘叶醇提液。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述去离子水的体积加入量以原料沙棘叶粉质量计为7.5–9.0mL/g；所述的无水乙醇体积加入量以原料沙棘叶粉质量计为17.5–21.0mL/g。
10.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(3)中的沙棘叶总黄酮提取物的制备方法为：将沙棘叶醇提液于45℃、–0.1MPa条件下蒸馏至无液体流出，加入体积为原料沙棘叶质量计1–2mL/g的无水乙醇，充分振荡后于8000r/min离心5–10min，上清液于转入一洁净培养皿中，50℃、–0.1MPa条件下真空干燥至恒重，得总黄酮提取物。
...【技术特征摘要】
1.总状毛霉(mucor racemosus)sj6-19，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号gdmcc no:64324，保藏日期2024年3月1日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。
2.一种权利要求1所述总状毛霉sj6-19在提取沙棘叶总黄酮中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用的方法包括以下步骤：(1)向沙棘叶粉中加入总状毛霉sj6-19的孢子液，搅拌均匀后于28–30℃发酵42–54h，获得沙棘叶发酵物；(2)向沙棘叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于35–40℃保温1.5–2.5h，再补充无水乙醇，经超声提取后过滤，获得沙棘叶醇提液；(3)沙棘叶醇提液经减压蒸干，无水乙醇溶解和真空干燥，得沙棘叶总黄酮提取物。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)中的沙棘叶是植物沙棘(hippophaerhamnoides)的绿色叶片，采摘后自然晾干；沙棘叶粉是沙棘叶经85℃烘干后，粉碎过40目筛的细粉。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)中的总状毛霉sj6-19孢子液的制备方法为：低温保存的总状毛霉sj6-19孢子接种于pda平板培养基上，于28℃培养56–72h后，加无菌蔗糖水溶液于培养物中，用接种环搅动使孢子悬浮，获得孢子液。
【专利技术属性】
技术研发人员：梅建凤，沈佳雯，苏贝楠，傅琳芳，王旭东，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
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