一种胡杨愈伤组织诱导培养基及再生体系构建方法技术

技术编号：42143769 阅读：16 留言：0更新日期：2024-07-27 00:00

本发明专利技术公开了一种胡杨愈伤组织诱导培养基及再生体系构建方法，属于植物组织培养技术领域，所述胡杨愈伤组织诱导培养基，包括以下原料制备而成：1/2MS培养基1L、0.1～1mg 6‑BA、0.5～2mg NAA。利用愈伤组织诱导培养基的再生体系构建方法，包括以下步骤：胡杨种子消毒进行种子萌发培养，得无菌苗取子叶，于愈伤组织诱导培养基中，诱导培养30d，得愈伤组织在愈伤组织分化培养基中分化培养，得不定芽在生根培养基中，生根诱导培养得再生无菌苗；切取带腋芽的茎段，生根扩繁培养得胡杨小苗。本发明专利技术以胡杨种子萌发的子叶为外植体，为对胡杨优良种质资源进行保存，挖掘抗逆基因，对胡杨遗传转化体系建立提供前期基础。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养，尤其涉及一种胡杨愈伤组织诱导培养基及再生体系构建方法。

技术介绍

1、胡杨(populus euphratica oliv.)隶属于杨柳科杨树胡杨组，是荒漠地区特有的珍贵森林资源，具有耐旱、耐寒和耐盐碱等特性，是抗逆基因的资源库。

2、然而，胡杨生根困难、种子寿命短、插条存活率低，所以无性繁殖是比较好的选择。目前已经有多个林木类物种完成了无性繁殖体系的构建，例如杨柳科树种滇杨利用取材方便快捷的嫩茎建立了完整的植株离体培养体系；北美红杉多用扦插技术进行繁殖，组织培养研究也是颇多，正积极建立更为完善的无性繁殖体系；毛白杨利用植物组培技术进行快繁，其试管快繁技术已在造林育苗的生产实践中推广应用；84k杨经过试验研究，建立了组织培养和快繁技术的新体系。目前，一种方式为，以84k杨和毛白杨为材料，从外植体类型，培养基的选取，激素的选择等多方面构建了再生体系，产生大量完整植株，已可大规模常年化生产苗木。另一种方式为，主要利用茎尖，茎段等外植体进行再生体系的建立。根据植物细胞具有全能性，理论上，任何器官和组织都可以作为外植体。但在实际应用中，不同品种、器官以及生理状态的外植体，分化能力差别极大，为使离体培养提高成功率，选材时要从品种优劣、取材部位及大小、生理状态以及发育程度和有无病菌感染等多方面考虑。

3、一般来说，关于胡杨组织培养的报道中，外植体材料选取多为胡杨茎尖、叶片、腋芽、休眠冬芽、茎段、花序轴和花药等进行组织培养的研究。然而目前鲜见有以胡杨子叶为外植体的再生技术体系的报道。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本专利技术提出了一种胡杨愈伤组织诱导培养基及再生体系构建方法，以胡杨种子萌发得到的子叶为外植体，通过对植物激素进行配比，筛选合适培养基，实现了以胡杨子叶为外植体构建再生体系的目标。为对胡杨优良种质资源进行保存，挖掘抗逆基因，对胡杨遗传转化体系建立提供前期基础。

2、为实现上述目的，本专利技术提供了一种胡杨愈伤组织诱导培养基，包括以下原料制备而成：1/2ms培养基1l、0.1～1mg 6-ba、0.5～2mg naa。

3、优选的，所述愈伤组织诱导培养基用于胡杨子叶作为外植体进行诱导培养。

4、优选的，所述1/2ms培养基包括以下浓度组分：ms2.2g/l、mes 0.5g/l、蔗糖10g/l和植物凝胶4g/l，以水为溶剂；所述1/2ms培养基的ph值为5.7。

5、本专利技术还提供了一种利用所述愈伤组织诱导培养基的再生体系构建方法，包括以下步骤：

6、(1)胡杨种子消毒处理，无菌水冲洗3～5次，采用所述1/2ms培养基进行种子萌发培养6～8d，得无菌苗；

7、(2)取步骤(1)所得无菌苗的子叶作为外植体，接种于所述愈伤组织诱导培养基中，第一次暗培养6～8d，然后愈伤组织诱导培养30d，得愈伤组织；

8、(3)步骤(2)所得愈伤组织在愈伤组织分化培养基中分化培养30～50d，得不定芽；

9、(4)步骤(3)所得不定芽在生根培养基中，第二次暗培养4～6d，然后生根诱导培养20～30d，得再生无菌苗；

10、(5)取步骤(4)所得再生无菌苗，切取带腋芽的茎段在生根培养基中，第三次暗培养4～6d，然后生根扩繁培养10～20d，得胡杨小苗。

11、优选的，步骤(1)中所述消毒处理采用质量浓度为1％的naclo水溶液，浸泡处理80～100s；步骤(1)中所述1/2ms培养基包括以下浓度组分：ms2.2g/l、mes 0.5g/l、蔗糖10g/l和植物凝胶4g/l，以水为溶剂，所述1/2ms培养基的ph值为5.7；步骤(1)中所述萌发培养的温度为25～30℃，所述萌发培养的光照强度为1000lx，所述萌发培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h。

12、优选的，步骤(2)中所述第一次暗培养的温度为24～26℃；步骤(2)中所述愈伤组织诱导培养的温度为25～30℃，所述愈伤组织诱导培养的光照强度为1000lx，所述愈伤组织诱导培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h。

13、优选的，步骤(3)中所述愈伤组织为嫩绿色；步骤(3)中所述分化培养的温度为25～30℃，所述分化培养的光照强度为1000lx，所述分化培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h；步骤(3)中所述愈伤组织分化培养基的配方为：1/2ms培养基1l、0.5mg 6-ba、0.02mgnaa。

14、优选的，步骤(4)中所述第二次暗培养的温度为24～26℃；步骤(4)中所述生根诱导培养的温度为25℃，所述生根诱导培养的光照强度为1000lx，所述生根诱导培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h。

15、优选的，步骤(5)中所述茎段上腋芽的个数为1个，所述茎段的长度为1～2cm；步骤(5)中所述第三次暗培养的温度为24～26℃；步骤(5)中所述生根扩繁培养的温度为25℃，所述生根扩繁培养的光照强度为1000lx，所述生根扩繁培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h。

16、优选的，步骤(4)和步骤(5)中所述生根培养基的配方为：1/2ms培养基1l、0.1mgiba。

17、与现有技术相比，本专利技术具有如下优点和技术效果：

18、本专利技术以胡杨种子萌发得到的子叶为外植体，通过对植物激素进行配比，筛选合适培养基，实现了以胡杨子叶为外植体构建再生体系的目标。为对胡杨优良种质资源进行保存，挖掘抗逆基因，对胡杨遗传转化体系建立提供前期基础。与以叶片或其它材料为外植体构建的再生体系相比，本专利技术所用无菌苗的子叶从源头上降低了外植体携带的微生物，同时子叶材料由于生理年龄更低、含有更低的次生代谢产物等因素具有更高的愈伤诱导率。

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【技术保护点】

1.一种胡杨愈伤组织诱导培养基，其特征在于，包括以下原料制备而成：1/2MS培养基1L、0.1～1mg 6-BA、0.5～2mgNAA。

2.根据权利要求1所述愈伤组织诱导培养基，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养基用于胡杨子叶作为外植体进行诱导培养。

3.根据权利要求1所述愈伤组织诱导培养基，其特征在于，所述1/2MS培养基包括以下浓度组分：MS2.2g/L、MES 0.5g/L、蔗糖10g/L和植物凝胶4g/L，以水为溶剂；所述1/2MS培养基的pH值为5.7。

4.一种利用权利要求1～3任一项所述愈伤组织诱导培养基的再生体系构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述再生体系构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述消毒处理采用质量浓度为1％的NaClO水溶液，浸泡处理80～100s；步骤(1)中所述1/2MS培养基包括以下浓度组分：MS2.2g/L、MES 0.5g/L、蔗糖10g/L和植物凝胶4g/L，以水为溶剂，所述1/2MS培养基的pH值为5.7；步骤(1)中所述萌发培养的温度为25～30℃，所述萌发培养的光

6.根据权利要求4所述再生体系构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述第一次暗培养的温度为24～26℃；步骤(2)中所述愈伤组织诱导培养的温度为25～30℃，所述愈伤组织诱导培养的光照强度为1000lx，所述愈伤组织诱导培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h。

7.根据权利要求4所述再生体系构建方法，其特征在于，步骤(3)中所述愈伤组织为嫩绿色；步骤(3)中所述分化培养的温度为25～30℃，所述分化培养的光照强度为1000lx，所述分化培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h；步骤(3)中所述愈伤组织分化培养基的配方为：1/2MS培养基1L、0.5mg 6-BA、0.02mgNAA。

8.根据权利要求4所述再生体系构建方法，其特征在于，步骤(4)中所述第二次暗培养的温度为24～26℃；步骤(4)中所述生根诱导培养的温度为25℃，所述生根诱导培养的光照强度为1000lx，所述生根诱导培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h。

9.根据权利要求4所述再生体系构建方法，其特征在于，步骤(5)中所述茎段上腋芽的个数为1个，所述茎段的长度为1～2cm；步骤(5)中所述第三次暗培养的温度为24～26℃；步骤(5)中所述生根扩繁培养的温度为25℃，所述生根扩繁培养的光照强度为1000lx，所述生根扩繁培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h。

10.根据权利要求4所述再生体系构建方法，其特征在于，步骤(4)和步骤(5)中所述生根培养基的配方为：1/2MS培养基1L、0.1mg IBA。

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【技术特征摘要】

1.一种胡杨愈伤组织诱导培养基，其特征在于，包括以下原料制备而成：1/2ms培养基1l、0.1～1mg 6-ba、0.5～2mgnaa。

2.根据权利要求1所述愈伤组织诱导培养基，其特征在于，所述愈伤组织诱导培养基用于胡杨子叶作为外植体进行诱导培养。

3.根据权利要求1所述愈伤组织诱导培养基，其特征在于，所述1/2ms培养基包括以下浓度组分：ms2.2g/l、mes 0.5g/l、蔗糖10g/l和植物凝胶4g/l，以水为溶剂；所述1/2ms培养基的ph值为5.7。

4.一种利用权利要求1～3任一项所述愈伤组织诱导培养基的再生体系构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述再生体系构建方法，其特征在于，步骤(1)中所述消毒处理采用质量浓度为1％的naclo水溶液，浸泡处理80～100s；步骤(1)中所述1/2ms培养基包括以下浓度组分：ms2.2g/l、mes 0.5g/l、蔗糖10g/l和植物凝胶4g/l，以水为溶剂，所述1/2ms培养基的ph值为5.7；步骤(1)中所述萌发培养的温度为25～30℃，所述萌发培养的光照强度为1000lx，所述萌发培养的光照周期为每日光照16h，黑暗8h。

6.根据权利要求4所述再生体系构建方法，其特征在于，步骤(2)中所述第一次暗培养的温度为24～26℃；步骤(2)中所述愈伤组织诱导...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志军，张山河，韩晓莉，焦培培，张肖，盖中帅，翟军团，邱晨，朱慧芳，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：

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