【技术实现步骤摘要】
本专利技术具体涉及遗传工程中一种落叶松启动子zcy-1及其生物材料和应用。
技术介绍
1、落叶松(larix kaempferi)具有早期速生、抗逆性强、抗病优良、生态效益好的特点，是我国北方地区极为重要的造林树种。由于落叶松的生活史长，遗传背景复杂，传统种子繁殖会导致优良性状的分离。这严重阻碍了落叶松育种的进程，随着生物技术的发展，分子育种技术的出现，给落叶松培育新品种带来了新的机遇和挑战。并已发展出农杆菌介导等方法将外源基因导入落叶松基因组用于落叶松遗传改良。但目前，落叶松转基因技术存在外源基因表达量低的问题，因此，需要挖掘适用于落叶松的强启动子，实现目标基因的高表达。
2、目前，花椰菜花叶病毒camv35s启动子是落叶松转基因技术中，应用比较广泛的组成型启动子。虽然组成型启动子通用性好，活性强，然而，有研究表明内源型启动子在驱动转基因盐藻外源基因的高效稳定表达中比外源启动子更具有优势。因此，找到一种落叶松高表达的内源的组成型启动子是本领域人员待解决的技术问题。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是提高松树中外源基因的表达量。
2、为了解决上述问题，本专利技术提供了dna分子，所述dna分子为如下任一种：
3、a1)序列2所示的dna分子；
4、a2)将a1)所述核酸分子的经过核苷酸的取代和/或缺失和/或添加得到的与a1)所示的核酸分子具有80％以上的同一性且具有相同功能的dna分子。
5、上述80％或80％
6、本文中，同一性是指氨基酸序列或核苷酸序列的同一性。可使用国际互联网上的同源性检索站点测定氨基酸序列的同一性，如ncbi主页网站的blast网页。例如，可在高级blast2.1中，通过使用blastp作为程序，将expect值设置为10，将所有filter设置为off，使用blosum62作为matrix，将gap existence cost，per residue gap cost和lambda ratio分别设置为11，1和0.85(缺省值)并进行检索以对氨基酸序列的同一性进行计算，然后即可获得同一性的值(％)。同一性：100％
7、上述的dna分子中，所述dna分子来源于落叶松属植物。
8、上文中，所述落叶松属植物可为落叶松。所述落叶松可为日本落叶松。
9、为了解决上述问题，本专利技术提供了与上述dna分子相关的生物材料，所述生物材料为下述任一种：
10、b1)含有上述dna分子的表达盒；
11、b2)含有上述dna分子的重组载体、或含有b1)所述表达盒的重组载体；
12、b3)含有上述dna分子的重组微生物、或含有b1)所述表达盒的重组微生物、或含有b2)所述重组载体的重组微生物；
13、b4)含有上述dna分子的转基因植物细胞系、或含有b1)所述表达盒的转基因植物细胞系、或含有b2)所述重组载体的转基因植物细胞系。
14、本文中，所述载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒、噬菌体(如λ噬菌体或m13丝状噬菌体等)、黏粒(即柯斯质粒)、ti质粒或病毒载体。具体可为pcambia1301载体；
15、上述生物材料中，b2)所述的表达盒是指能够在宿主细胞中表达靶基因的dna，该dna不但可包括启动基因转录的启动子，还可包括终止基因转录的终止子。还可包括报道基因。
16、具体可包括参与脱落酸反应的顺式作用元件、厌氧诱导所必需的顺式作用调控元件、涉及赤霉素反应性的顺式作用调控元件、参与黄酮类生物合成基因调控的myb结合位点、参与水杨酸反应的顺式作用元件和参与光响应的顺式作用调控元件。所述dna分子的核酸序列可为序列2。
17、上述b3)中，可用植物表达载体构建含有上述表达盒的重组表达载体。所述植物表达载体可为gateway系统载体或双元农杆菌载体等，如pgwb411、pgwb412、pgwb405、pbin438、pcambia1302、pcambia2301、pcambia1301、pcambia1300、pbi121、pcambia1391-xa或pcambia1391-xb。
18、上文中，b1)所述表达盒的启动子可为上述dna分子。
19、上文中，所述表达盒的目的或靶标基因可为gus基因。
20、为了解决上述问题，本专利技术还提供了与上述dna分子相关的生物材料，b1)所述表达盒以上述dna分子为启动子。
21、上述dna分子的应用中，所述应用为如下任一种：
22、c1)上述dna分子在增加落叶松属植物表达载体目的基因表达量中的应用；
23、c2)上述dna分子在制备增加落叶松属植物表达载体目的基因表达量产品中的应用；
24、c3)上述dna分子在制备落叶松属植物外源表达载体中的应用；
25、c4)上述dna分子在制备转基因落叶松属植物中的应用；
26、c5)上述dna分子作为启动子的应用。
27、所述增加落叶松属植物表达载体目的基因表达量是与35s启动子相比。
28、为了解决上述问题，本专利技术还提供了上述的生物材料的应用，所述应用为如下任一种：
29、d1)上述的生物材料在增加落叶松属植物表达载体目的基因表达量中的应用；
30、d2)上述的生物材料在制备增加落叶松属植物表达载体目的基因表达量产品中的应用；
31、d3)上述的生物材料在制备落叶松属植物外源表达载体中的应用；
32、d4)上述的生物材料在制备转基因落叶松属植物中的应用；
33、d5)上述的生物材料在作为启动子的应用。
34、上文中，表达载体(expression vectors)可为在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、rbs、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。
35、为了解决上述问题，本专利技术还提供了一种落叶松属植物外源表达载体的制备方法，所述方法包括将上述dna分子作为靶基因的启动子的步骤。
36、为了解决上述问题，本专利技术还提供了一种落叶松属植物的制备方法，所述方法包括使用上述中b2)所述重组载体或以上述方法制备的落叶松属植物外源表达载体对落叶松进行转基因的操作。
37、上文中，所述重组载体或外源表达载体可包括启动子和靶基因。还可包括报道基因。靶基因可为gus基因。
38、为了解决上述问题，本专利技术还提供了一种目的基因的表达方法，其特征在于，为如下任一种：
39、e1)包括如下步骤：以上述的dna分子作为启动子来启动目的基因表达；
40、e2)包括如下步骤：将上述的d本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.DNA分子，其特征在于，所述DNA分子为如下任一种：
2.根据权利要求1所述的DNA分子，其特征在于，所述DNA分子来源于落叶松属植物。
3.与权利要求1所述DNA分子相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料为下述任一种：
4.与权利要求1所述DNA分子相关的生物材料，其特征在于，B1)所述表达盒以权利要求1所述DNA分子为启动子。
5.权利要求1所述DNA分子的应用，其特征在于，所述应用为如下任一种：
6.权利要求3所述的生物材料的应用，其特征在于，所述应用为如下任一种：
7.一种落叶松属植物外源表达载体的制备方法，其特征在于，所述方法包括将权利要求1所述DNA分子作为靶基因的启动子的步骤。
8.一种落叶松属植物的制备方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求3中B2)所述重组载体或以权利要求6所述方法制备的落叶松属植物外源表达载体对落叶松进行转基因的操作。
9.一种目的基因的表达方法，其特征在于，为如下任一种：
10.权利要求2所述的DNA分子、权利要求5所述的应用
...【技术特征摘要】
1.dna分子，其特征在于，所述dna分子为如下任一种：
2.根据权利要求1所述的dna分子，其特征在于，所述dna分子来源于落叶松属植物。
3.与权利要求1所述dna分子相关的生物材料，其特征在于，所述生物材料为下述任一种：
4.与权利要求1所述dna分子相关的生物材料，其特征在于，b1)所述表达盒以权利要求1所述dna分子为启动子。
5.权利要求1所述dna分子的应用，其特征在于，所述应用为如下任一种：
6.权利要求3所述的生物材料的应用，其特征在于，所述应用为...
【专利技术属性】
技术研发人员：李万峰，张陈谊，叶查龙，杨玲，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林业研究所，
类型：发明
国别省市：
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