【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人类疱疹病毒免疫疗法。具体地，本专利技术涉及重组蛋白，其包括源自多种人巨细胞病毒(cmv)或爱泼斯坦-巴尔(epstein-barr)病毒(ebv)抗原的多个细胞毒性t细胞表位，其中当在免疫治疗中使用时能够引发细胞毒性t淋巴细胞免疫应答，而不仅限于此。
技术介绍
1、爱泼斯坦-巴尔病毒以极高的发病率存在，超过90％的成年人显示出一定的暴露迹象。ebv还作为一种终身潜伏感染持续存在以及可以是无症状的。然而，ebv可导致单核细胞增多症，也被称为腺热，其在一些个体中导致显著的发病率。ebv可与若干自身免疫疾病相关，如狼疮、类风湿关节炎和多发性硬化症。重要的是，已知ebv与许多癌症有关，如鼻咽癌(npc)、伯基特淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤。npc是常见于中国和东南亚人群的癌症(在大多数其它人群中罕见)。因为在早期阶段的症状难以识别，所以患者常呈现中级(第三期)或晚期(iv期)疾病。诊断为鼻咽癌的患者首选是放疗和化疗，很有限地选择手术。放/化疗对大多数患者有效，但是大约20％的人或者有不良应答或者复发，此组具有不良预后。呈现ⅲ和ⅳ期肿瘤的患者仅具有50至60％(低于单独ⅳ期患者)的5年总生存率。npc最常见的形式是与ebv相关联，这使得这些肿瘤易于通过靶向并杀死ebv感染的肿瘤细胞进行免疫治疗。
2、在健康个体中的原发性cmv一般无症状、建立偶有再活化并从粘膜表面脱落的潜伏状态。在某些情况下，原发性cmv感染伴随有单核细胞增多症样疾病的临床症状，类似于epstein-barr病毒所引起的症状。在两个重要的临床情况中cm
3、初次暴露至cmv导致强烈的初级免疫应答，其保持为长期记忆应答以便在再活化后用来限制病毒复制。现在有可靠证据表明体液免疫和细胞免疫应答在控制cmv感染中起到至关重要的作用。在鼠cmv模型中进行的研究提供t细胞免疫重要性上的初始证据，其中的t细胞功能丧失与增加的病毒感染再活化和传播是一致的(reddehase,weiland等人，1985；mutter,reddehase等人，1988)。此外，病毒特异性t细胞免疫重建与从急性病毒感染恢复是一致的。在不同临床环境下人类随访研究中进一步强调病毒特异性t细胞的作用。这些研究表明，抗病毒t细胞免疫不足的异源干细胞移植患者表现出患cmv相关并发症的风险增加。对细胞免疫在控制cmv疾病中作用的可信服证据来自这种研究，其中在异源干细胞移植患者中供体来源cmv特异性cd8+t细胞的过继转移不仅恢复抗原特异性细胞免疫而且也预防cmv相关的临床并发症(riddell,watanabe等人，1992；walter,greenberg等人，1995)。
4、鉴于这些研究，多种cmv疫苗已经在临床前和临床试验中进行评估。
5、这些cmv疫苗策略已经评估了糖蛋白b(gb)、pp65和ie-1作为潜在的靶，并通过多个递送平台将其递送，这些递送平台包括减毒cmvtowne株(jacobson,sinclair等人，2006)，编码全长抗原和表位的重组病毒载体(bernstein,reap等人，2009；zhong andkhanna2009)、dna(wloch,smith等人，2008)、致密体(frankenberg,pepperl-klindworth等人，2002)、和亚基(drulak,malinoski等人，2000)疫苗。然而，这些方法没有显示出令人信服的临床疗效，因而并没有进入临床实践。
6、典型地，已经提出，为了引发保护性的、cd8+细胞毒性的t细胞应答，病毒抗原必须以核酸形式(例如，使用病毒载体递送系统)而不是以外源递送蛋白形式进行递送，以使得表达蛋白质被正确处理并提呈至t细胞(koup&douek,2012)。这些疫苗递送平台中的大多数，特别是减毒活疫苗以及基于病毒载体的疫苗，已经提出了一些监管问题，如觉察到的长期理论健康风险(liu；soderberg-naucler 2006；anderson和schneider 2007)。
技术实现思路
1、本专利技术解决对使用安全递送技术的疱疹病毒免疫疗法开发的需要。本专利技术涉及降低发育中胎儿和免疫损伤个体(例如固体器官和造血干细胞移植接受者和晚期hiv疾病感染者)的cmv相关损伤的风险。本专利技术还涉及治疗如在免疫受损移植患者中、或在预防或治疗ebv相关癌症如鼻咽癌(npc)中存在的ebv感染的症状。
2、本专利技术意想不到地发现，与过去的假设相反，施用给个体的外源多表位蛋白可引发保护性、cd8+细胞毒性t细胞应答。
3、因此，本专利技术广义地涉及分离的多表位蛋白，其包括能够引发细胞毒性t细胞应答的多个人类疱疹病毒细胞毒性t细胞(ctl)表位。
4、在第一个方面，分离的蛋白包括来自两个或更多不同疱疹病毒抗原的多个ctl表位的每个各自的氨基酸序列，所述分离的蛋白还包括在至少两个所述ctl表位之间的干扰氨基酸或氨基酸序列，所述氨基酸或氨基酸序列包含蛋白酶体释放氨基酸或氨基酸序列，以及任选地，与抗原处理相关的转运子(transporter)(tap)识别基序，其中所述分离的蛋白作为外源蛋白施用给动物时能够引发细胞毒性t淋巴细胞免疫应答。
5、在一些实施方案中，提供一种分离的蛋白，其包括来自两个或更多不同疱疹病毒抗原的多个ctl表位的每个的各自氨基酸序列，还包括在至少两个所述ctl表位之间的干扰氨基酸或氨基酸序列，所述干扰氨基酸或氨基酸序列包含蛋白酶体释放氨基酸或氨基酸序列，以及任选地，与抗原处理相关的转运子(tap)识别基序，其中所述分离的蛋白作为外源蛋白施用给动物时能够引发细胞毒性t淋巴细胞免疫应答。
6、适当地，分离的蛋白包含选择表位以提供人类群体的广泛覆盖。这些包括hla i类特异性hla-a1、-a2、-a3、-a11、-a23、-a24、-a26、-a29、-a30、-b7、-b8、-b27、-b35、-b38、-b40、-b41、-b44、-b51、-b57和-b58。
7、在一些实施方案中，所述表位限制到hla-ⅰ类特异性hla-a1、-a2、-a3、-a11、-a23、-a24、-a26、-a29、-a30、-b7、-b8、-b27、-b35、-b38、-b40、-b41、-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种蛋白，所述蛋白包括由i)来自疱疹病毒的两个或更多个不同的抗原的多个CTL表位和ii)干扰氨基酸序列组成的氨基酸序列，其中至少两个所述CTL表位通过一个干扰氨基酸序列隔开，所述干扰氨基酸序列由a)包括AD、K和/或R的一个或两个氨基酸序列，以及任选地b)与抗原处理相关的转运子(TAP)识别基序序列组成，其中所述蛋白作为外源蛋白施用给动物时能够引发细胞毒性T淋巴细胞免疫应答。
2.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述CTL表位限制到HLA-Ⅰ类特异性HLA-A1、-A2、-A3、-A11、-A23、-A24、-A26、-A29、-A30、-B7、-B8、-B27、-B35、-B38、-B40、-B41、-B44、-B51、-B57和/或-B58。
3.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括来自巨细胞病毒(CMV)或爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)的至少一个CTL表位。
4.根据权利要求3所述的蛋白，其中所述蛋白包括以来自巨细胞病毒(CMV)的至少一个CTL表位，并且至少一个CMV CTL表位源自pp50、pp65、pp150和/或IE-1。<...
【技术特征摘要】
1.一种蛋白，所述蛋白包括由i)来自疱疹病毒的两个或更多个不同的抗原的多个ctl表位和ii)干扰氨基酸序列组成的氨基酸序列，其中至少两个所述ctl表位通过一个干扰氨基酸序列隔开，所述干扰氨基酸序列由a)包括ad、k和/或r的一个或两个氨基酸序列，以及任选地b)与抗原处理相关的转运子(tap)识别基序序列组成，其中所述蛋白作为外源蛋白施用给动物时能够引发细胞毒性t淋巴细胞免疫应答。
2.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述ctl表位限制到hla-ⅰ类特异性hla-a1、-a2、-a3、-a11、-a23、-a24、-a26、-a29、-a30、-b7、-b8、-b27、-b35、-b38、-b40、-b41、-b44、-b51、-b57和/或-b58。
3.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括来自巨细胞病毒(cmv)或爱泼斯坦-巴尔病毒(ebv)的至少一个ctl表位。
4.根据权利要求3所述的蛋白，其中所述蛋白包括以来自巨细胞病毒(cmv)的至少一个ctl表位，并且至少一个cmv ctl表位源自pp50、pp65、pp150和/或ie-1。
5.根据权利要求4所述的蛋白，其中所述至少一个ctl表位具有选自由seq id no:1-21所示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括seq id no:1-13所示的ctl表位氨基酸序列的每一个。
7.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括seq id no:11所示的ctl表位氨基酸序列。
8.根据权利要求3所述的蛋白，其中所述至少一个ctl表位包括至少一个ebv ctl表位，所述至少一个ebv ctl表位源自选自由以下组成的组的抗原：bmlf1、lmp2a、brlf1、lmp2、ebna3a、bzlf1、ebna3c、ebna1和ebna3b。
9.根据权利要求8所述的蛋白，其中所述至少一个ctl表位具有选自由seq id no:22-41所示的氨基酸序列组成的组的氨基酸序列。
10.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述蛋白包括seq id no:49所示的氨基酸序列。
11.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述tap识别基序序列具有式：(r/n:i/q:w/y)n，其中n为大于或等于1的任意整数。
12.根据权利要求1所述的蛋白，所述蛋白包括二十(20)个以下的ctl表位。
13.根据权利要求12所述的蛋白，所述蛋白包括十(10)个、十一(11)个、十二(12)个、十三(13)个、十四(14)个、十五(15)个、十六(16)个、十七(17)个、十八(18)个或十九(19)个ctl表位。
14.根据权利要求1所述的蛋白，...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·康纳，D·维贾延德拉，
申请(专利权)人：昆士兰医学研究所理事会，
类型：发明
国别省市：
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