【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物领域，具体涉及到一种高产纳豆激酶和乙偶姻的枯草芽孢杆菌及其应用。
技术介绍
1、纳豆激酶(nattokinase，nk)也被称为枯草杆菌蛋白酶nat(subtilisin nat)，是枯草芽孢杆菌在发酵过程中产生的一种丝氨酸蛋白酶，自从1980年被发现以来，nk便因其独特的溶血栓功能被广泛研究和应用。与传统溶栓药物相比，nk不仅可以将血栓水解成氨基酸和小分子肽，还可以通过间接溶栓机制抑制血栓的形成，同时nk具有安全性高、有多种药理作用如改善血液循环、降低血压、预防动脉粥样硬化等特点。总之，nk是一种具有巨大应用潜力的新型溶栓剂，基于其安全有效、可口服、可大规模生产等优点，在功能性食品、保健品和普通食品中已得到普遍应用。
2、乙偶姻是一种广泛使用的风味化合物，也是一种可由多种微生物生成的代谢物质。由于具有特有奶油香味，乙偶姻在食品、香料及化妆品等行业都有很重要的用途，同时乙偶姻可以作为药物合成的中间体，在药物合成中有着重要的应用。
3、目前nk的产量和酶活还难以满足生产需求，筛选高产nk的微生物菌株是生产纳豆激酶企业的重要研究方向。同时，芽孢杆菌属(bacillus)具有产乙偶姻的能力，但是乙偶姻通常作为发酵副产物，产量较低。
技术实现思路
1、本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这
2、鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本专利技术。
3、因此，本专利技术的目的是，克服现有技术中的不足，提供枯草芽孢杆菌(bacilussubtilis)jnc002.001，于2023年9月4日保藏于中国典藏微生物保藏中心，保藏编号为cctcc no：m20231585，保藏地址为中国·武汉·武汉大学。
4、本专利技术的再一个目的是，克服现有技术中的不足，提供所述的枯草芽孢杆菌jnc002.001在制备乙偶姻中的应用。
5、作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：包括，将枯草芽孢杆菌jnc002.001接种到一级种子液中培养，得到一级种子液培养物；
6、将一级种子液培养物转接到二级种子液种扩大培养，得到二级种子液培养物；
7、将二级种子液培养物接种到高糖培养基中发酵，离心得到含有乙偶姻的上清液。
8、作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述将枯草芽孢杆菌jnc002.001接种到一级种子液中培养，其中，一级种子液为lb培养基，培养参数为：37℃、200rpm摇床培养8～10h；所述将一级种子液培养物转接到二级种子液种扩大培养，其中，二级种子液为lb培养基，培养参数为：37℃、200rpm摇床培养2.5～3.5h，接种量为2wt％。
9、作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述高糖培养基，按重量百分比计，配方为：葡萄糖10％，大豆蛋白胨2％，磷酸氢二钠0.2％，磷酸二氢钠0.1％，氯化镁0.05％，氯化钙0.02％，其余为去离子水，ph 7～7.5。
10、作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述将二级种子液培养物接种到高糖培养基中发酵，其中，所述发酵条件为200～250rpm、37℃，培养时间为36h，二级种子液培养物的接种量为2～4wt％。
11、本专利技术的再一个目的是，克服现有技术中的不足，提供枯草芽孢杆菌在生产纳豆激酶中的应用，包括，
12、将枯草芽孢杆菌jnc002.001接种到一级种子液中培养，得到一级种子液培养物；
13、将一级种子液培养物转接到二级种子液种扩大培养，得到二级种子液培养物；
14、将二级种子液培养物接种到发酵培养基中发酵，离心取上清液得到纳豆激酶液。
15、作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述将枯草芽孢杆菌jnc002.001接种到一级种子液中培养，其中，一级种子液，为4ml的lb培养基，培养参数为：37℃、200rpm摇床培养8～10h。
16、作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述将一级种子液培养物转接到二级种子液种扩大培养，其中，二级种子液，为50ml的lb培养基，培养参数为：37℃、200rpm摇床培养2.5-3.5h，接种量为2wt％。
17、作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述发酵培养基，按重量百分比计，配方为：豆粕粉2.5％，葡萄糖2％，磷酸氢二钠0.2％，磷酸二氢钠0.1％，氯化镁0.05％，氯化钙0.02％，其余为去离子水，ph 7-7.5。
18、作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述将二级种子液培养物接种到发酵培养基中发酵，其中，所述发酵条件为200～250rpm、37℃，培养时间为36～60h。
19、作为本专利技术所述应用的一种优选方案，其中：所述将二级种子液培养物的接种量为2～4wt％。
20、本专利技术的再一个目的是，克服现有技术中的不足，提供所述的枯草芽孢杆菌jnc002.001在制备纳豆中的应用，包括，
21、种子液制备：取枯草芽孢杆菌jnc002.001菌苔接种到液体种子培养基中，于37℃、200rpm的条件下培养8h作为种子液；
22、固体培养基发酵：取黄豆原料，去离子水冲洗，加水浸泡14～18h，沥水后加入3％的食盐和3％的蔗糖，在高压蒸汽灭菌锅中蒸煮20～40min，随即取出放入无菌操作台内进行冷却，得到固态发酵培养；
23、按2～4％的接种量接种种子液到灭菌的固态发酵培养上，在37℃条件下培养48～60h，每12h搅拌一次。
24、本专利技术有益效果：
25、(1)本专利技术的枯草芽孢杆菌bacilussubtilisjnc002.001是从市售纳豆中进行筛选并通过物理诱变得到的，其在摇瓶中发酵所产纳豆激酶酶活最高可达到294fu/ml，乙偶姻含量达41.5g/l,相比初始野生型菌株分别提高了167.3％和86.1％，产酶能力和产乙偶姻水平大大提高。
26、(2)本专利技术的枯草芽孢杆菌bacillus subtilisjnc002.001经传代稳定性验证，该菌株具有良好的传代稳定性，具有很大的应用潜力。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)JNC002.001，于2023年9月4日保藏于中国典藏微生物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M20231585，保藏地址为中国·武汉·武汉大学。
2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JNC002.001在制备乙偶姻中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：包括，将枯草芽孢杆菌JNC002.001接种到一级种子液中培养，得到一级种子液培养物；
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述将枯草芽孢杆菌JNC002.001接种到一级种子液中培养，其中，一级种子液为LB培养基，培养参数为：37℃、200rpm摇床培养8～10h；所述将一级种子液培养物转接到二级种子液种扩大培养，其中，二级种子液为LB培养基，培养参数为：37℃、200rpm摇床培养2.5～3.5h，接种量为2wt％。
5.如权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述高糖培养基，按重量百分比计，配方为：葡萄糖10％，大豆蛋白胨2％，磷酸氢二钠0.2％，磷酸二氢钠0.1％，氯化镁0.05％，氯化钙0.02％，其余为
6.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述将二级种子液培养物接种到高糖培养基中发酵，其中，所述发酵条件为200～250rpm、37℃，培养时间为36h，二级种子液培养物的接种量为2～4wt％。
7.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌在生产纳豆激酶中的应用，其特征在于：包括，
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述发酵培养基，按重量百分比计，配方为：豆粕粉2.5％，葡萄糖2％，磷酸氢二钠0.2％，磷酸二氢钠0.1％，氯化镁0.05％，氯化钙0.02％，其余为去离子水，pH 7-7.5。
9.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述将二级种子液培养物接种到发酵培养基中发酵，其中，所述发酵条件为200～250rpm、37℃，培养时间为36～60h；二级种子液培养物的接种量为2～4wt％。
10.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌JNC002.001在制备纳豆中的应用，其特征在于：包括，
...【技术特征摘要】
1.枯草芽孢杆菌(bacilussubtilis)jnc002.001，于2023年9月4日保藏于中国典藏微生物保藏中心，保藏编号为cctcc no：m20231585，保藏地址为中国·武汉·武汉大学。
2.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌jnc002.001在制备乙偶姻中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：包括，将枯草芽孢杆菌jnc002.001接种到一级种子液中培养，得到一级种子液培养物；
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述将枯草芽孢杆菌jnc002.001接种到一级种子液中培养，其中，一级种子液为lb培养基，培养参数为：37℃、200rpm摇床培养8～10h；所述将一级种子液培养物转接到二级种子液种扩大培养，其中，二级种子液为lb培养基，培养参数为：37℃、200rpm摇床培养2.5～3.5h，接种量为2wt％。
5.如权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述高糖培养基，按重量百分比计，配方为：葡萄糖10％，大豆蛋白胨2％，磷酸氢二钠0.2％，磷酸...
【专利技术属性】
技术研发人员：齐新江，刘友刚，
申请(专利权)人：吉林省农嫂食品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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