【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及体外凝血检测，具体涉及血栓弹力图凝血激活检测试剂及其应用。
技术介绍
1、正常的凝血功能是人体生命活动的重要保障。机体出、凝血的评估是临床治疗和疾病预防的重要指标。传统的凝血检测项目是血凝块形成的静态反映，仅反映凝血级联反应的一部分，不能完全反映患者真实的凝血状况，是导致治疗延误和不当的重要原因。血栓弹力图（thrombelastogram，teg）是一种以细胞学为基础的新型凝血检测模式，以体外全血为检测对象，用物理的方法将血液凝固过程中粘弹性的变化转化为数字信号，从而描记为凝血曲线图，反映凝血全貌。
2、血栓弹力图仪现已成为当今围术期监测凝血功能的最重要的指标。常规teg主要激活内源凝血途径，检测过程耗时长，对于有急诊手术需求的患者适用性低。快速teg（r-teg）是在常规teg的基础上加入组织因子，同时激活内外源凝血途径，缩短凝血激活时间，快速完成体外全血的凝血检测。快速teg在评估凝血全貌，对创伤患者的手术治疗，早期诊断纤溶亢进，预测大输血、血栓风险，指导大输血等方面有着重要的应用价值。快速teg广泛应用于创伤外科、肝移植科、心脏外科手术中，对围术期凝血功能的监测、指导临床输血策略、科学管理血制品等方面具有非常重要的应用价值。
3、目前国内外市场上的凝血激活检测试剂盒种类较少，价格昂贵，检测成本高，稳定性时间较短且需与自制仪器配套使用，特异性强。研制出稳定性较高的血栓弹力图仪快速检测试剂盒成为我们亟待解决的工作。
技术实现思路
1、有鉴于
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供的凝血激活检测试剂，包括缓冲液、内源性凝血激活剂、组织因子、稳定剂和防腐剂；
4、所述稳定剂包括组分1、组分2和组分3 ；
5、所述组分1为硅胶、琼脂、壳聚糖、纤维素、羧甲基纤维素、海藻酸中的一种或几种的混合物；
6、所述组分2为戊二醛；
7、所述组分3为乙二醇、甘油、茶多酚、山梨醇和苹果多酚中的一种或几种的混合物；
8、所述内源性激活剂包括高岭土、鞣花酸和硅藻土中的一种或几种。
9、本专利技术提供的所述凝血激活检测试剂均匀性好、稳定性优、不易沉淀，所述凝血激活检测试剂与血栓弹力图仪配合使用，进行相关指标的检测。
10、一些实施方案中，所述缓冲液包括tris缓冲液、hepes缓冲液、pbs缓冲液；一些具体实施例中，所述缓冲液为tris缓冲液。本专利技术中，所述缓冲液由水和具有缓冲作用的组分配制得到。其中，具有缓冲作用的组分包括tris、hepes、pbs的至少一种。
11、一些实施方案中，所述防腐剂包括叠氮钠、硫柳汞、卡松、硫酸庆大霉素、proclin300中的一种或几种。一些具体实施例中，所述防腐剂为硫酸庆大霉素。本专利技术所采用硫酸庆大霉素是一种氨基糖苷类药物，对铜绿假单胞菌、变形杆菌属、大肠杆菌、克雷白菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、奈瑟菌、金黄色葡萄球菌有较强的抗菌活性。
12、一些实施方案中，本专利技术所述的凝血激活检测试剂包括tris、高岭土、组织因子、稳定剂、防腐剂和水。其中，稳定剂包括羧甲基纤维素、戊二醛和苹果多酚的混合物。具体的，本专利技术首先借助双功能试剂戊二醛在组织因子的蛋白质之间形成共价键。原理为戊二醛有两个醛基，都可以与蛋白质或酶的游离氨基发生反应，形成schiff碱。其次，通过改变条件（温度、ph）使羧甲基纤维素形成凝胶状物质，可通过疏水作用、氢键等实现。第三，凝胶状纤维素对活性物质具有良好的包载能力，进一步通过扩散作用将组织因子复合物扩散至载体中。另外，选取苹果多酚作为稳定剂成分之一，苹果多酚它是植物多酚的一种。植物多酚分子中的活性酚羟基具有抗氧化性，能够释放氢离子，从而破坏终止氧化链式反应。同样，苹果多酚对单线态氧、过氧化氢、羟基自由基的清除能力远大于维生素c。它能够使试剂在较高的温度下仍然可以保持原有的活性。实验表明，三种稳定剂组合使用能够显著提高检测试剂的稳定性。
13、进一步的，本专利技术对凝血激活检测试剂的组分和浓度进行了优化、筛选，结果表明，tris、高岭土、组织因子、稳定剂和防腐剂的浓度为0.1%~0.6% (w/v) tris、0.001%~0.01%(w/v)高岭土、0.1%~1%(v/v)组织因子、0.01%~0.2%(w/v)羧甲基纤维素、0.01%~0.5%(v/v)戊二醛、0.5%~2.0%(v/v)苹果多酚和0.002~0.01%(w/v)防腐剂时，稳定性和重复性较高，检测效果良好。一些优选实施方案中，所述凝血激活检测试剂由水和如下浓度的组分组成：0.36% (w/v)tris、0.005%(w/v)高岭土、0.25%(v/v)组织因子、0.01%~0.25%(v/v)戊二醛、0.01%~0.05%(w/v)羧甲基纤维素、0.5%~2%(w/v)苹果多酚和0.005%(w/v)防腐剂。其中，各组分浓度为0.36% (w/v)tris、0.005%(w/v)高岭土、0.25%(v/v)组织因子、0.05%(w/v)羧甲基纤维素、0.25%(v/v)戊二醛、0.9%(v/v)苹果多酚和0.005%(w/v)防腐剂时，检测效果最佳。
14、本专利技术提供的凝血激活检测试剂，其ph值为7.0~8.0。具体的，在一些实施例中，所述凝血激活检测试剂的ph值为7.0、7.4或8.0 。
15、具体的，本专利技术具体实施例中采用外源性凝血激活剂是人重组组织因子脂化物。本专利技术采用人重组组织因子酯化物，与羧甲基纤维素、戊二醛和苹果多酚搭配，极大地增强了组织因子的稳定性。
16、本专利技术具体实施例中，所述高岭土为纳米级粉末高岭土，所述防腐剂为硫酸庆大霉素。
17、本专利技术采用纳米级粉末高岭土与人重组组织因子脂化物，能够同时激活人体的内源性和外源性凝血途径，加快凝血过程，使血液快速凝固。
18、一些具体实施例中，本专利技术提供的凝血激活检测试剂，由水和如下浓度的组分组成：0.005%高岭土、0.25%人重组组织因子酯化物、0.01% 戊二醛、0.01%羧甲基纤维素、0.5%苹果多酚、0.36%tris、0.005%硫酸庆大霉素和余量的水，ph=7.4；
19、或由水和0.005%高岭土、0.25%人重组组织因子酯化物、0.25% 戊二醛、0.05%羧甲基纤维素、2%苹果多酚、0.36%tris、0.005%硫酸庆大霉素和余量的水组成，ph=7.4；
20、或由水和0.005%高岭土、0.25%人重组组织因子酯化物、0.25% 戊二醛、0.05%羧甲基纤维素、0.9%苹果多酚、0.36%tris、0.005%硫酸庆大霉素和余量的水组成，ph=7.4。
21、本发本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.凝血激活检测试剂，其特征在于，包括缓冲液、内源性凝血激活剂、组织因子、稳定剂和防腐剂；
2.根据权利要求1所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，所述凝血激活检测试剂包括Tris、高岭土、组织因子、羧甲基纤维素、戊二醛、苹果多酚、防腐剂和水。
4.根据权利要求1~3任一项所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，所述凝血激活检测试剂包括水和如下浓度的组分：
5.根据权利要求4所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，所述凝血激活检测试剂包括水和如下浓度的组分：
6.根据权利要求1所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，其pH为7.0~8.0。
7.根据权利要求1~6任一项所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，所述凝血激活检测试剂由水和如下浓度的组分组成：0.005%高岭土、0.25%人重组组织因子酯化物、0.01% 戊二醛、0.01%羧甲基纤维素、0.5%苹果多酚、0.36% Tris、0.005%硫酸庆大霉素和余量的水，pH=7.4；
8.权利要求1~7任一
9.凝血激活检测试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1~7任一项所述的凝血激活检测试剂和氯化钙。
10.根据权利要求8所述的凝血激活检测试剂盒，其特征在于，所述氯化钙的浓度为0.2~0.8mol/L。
...【技术特征摘要】
1.凝血激活检测试剂，其特征在于，包括缓冲液、内源性凝血激活剂、组织因子、稳定剂和防腐剂；
2.根据权利要求1所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，所述凝血激活检测试剂包括tris、高岭土、组织因子、羧甲基纤维素、戊二醛、苹果多酚、防腐剂和水。
4.根据权利要求1~3任一项所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，所述凝血激活检测试剂包括水和如下浓度的组分：
5.根据权利要求4所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，所述凝血激活检测试剂包括水和如下浓度的组分：
6.根据权利要求1所述的凝血激活检测试剂，其特征在于，其ph为7.0~8...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢永华，
申请(专利权)人：上海太阳生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。