【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物干细胞的应用领域，具体涉及一种人参胚性干细胞的诱导培养方法及其应用。
技术介绍
1、人参(panax ginseng c.a.mey.)是五加科人参属植物，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生精养血的功能，被冠以“百草之王”的美誉，是中药材品种之一。然而人参栽培周期长(园参生长周期约4～5年，而林下参约15～25年不等)、病害严重(如立枯病、黑斑病、锈腐病等)、存在严重连作障碍，导致毁林开荒种人参现象屡禁不止。因此，实现人参无土化生产对于节约土地资源、实现绿色农业意义重大。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是如何诱导获得人参胚性干细胞和/或如何诱导获得人参胚性愈伤组织和/或如何生产人参皂苷和/或如何制备离体再生人参。
2、为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织的诱导培养的方法，所述方法可包括如下步骤：
3、1)将人参外植体使用含有植物激素的启动培养基培养，诱导获得人参初生愈伤组织；
4、2)将所述人参初生愈伤组织在无植物激素的培养基上培养获得人参胚性干细胞或含有所述人参胚性干细胞的人参胚性愈伤组织。
5、所述植物激素可为6-苄基氨基嘌呤和萘乙酸。所述启动培养基可为添加6-苄基氨基嘌呤和萘乙酸的培养基。
6、上述方法中，所述无植物激素的培养基可为ms培养基。所述启动培养基可由所述ms培养基、6-苄基氨基嘌呤和萘乙酸组成。
7、所述ms培养基可为固
8、上述方法中，所述2)的培养的时间可为3～5个月。
9、上述方法中，所述启动培养基中6-苄基氨基嘌呤的含量可为0.1mg/l，所述萘乙酸的含量可为1.5mg/l。
10、上述方法中，所述外植体可为叶片。
11、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了使用上述方法制备的人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织。
12、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了用于诱导人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织的培养基。所述培养基可由上文所述的启动培养基和无植物激素的培养基组成。
13、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了用于制备离体再生人参的培养基。所述培养基可含有上文所述的培养基和再生培养基。所述再生培养基可含有kt和萘乙酸。
14、所述再生培养基由所述ms培养基、kt和萘乙酸组成。
15、所述再生培养基具体可为ms+0.5mg/l kt+0.1mg/l naa培养基。
16、上文所述的方法和/或上文所述的人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织和/或上文所述的培养基的下述任一种应用也属于本专利技术的保护范围：
17、a1)在制备人参皂苷中的应用；
18、a2)在制备含有人参皂苷的产品中应用；
19、a3)在制备离体再生人参中的应用。
20、为了解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种制备人参皂苷的方法。所述方法可包括使用上文所述的人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织提取人参皂苷的步骤。
21、所述人参皂苷可为人参皂苷rb1、rd、rc、rb2、ro、rf、re、rg1、rg2、rg3、rh1、f1、f2、f4和/或f5。
22、本专利技术首先用人参的叶片诱导出初始愈伤组织，然后采用多种处理方法诱导获得人参胚性干细胞并进行分离，从而获得非依赖激素的人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织并扩大培养，可以保持稳定传代能力。本专利技术筛选了多种配方，获得了从人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织快速生产人参再生苗的配方(ms+0.5mg/l kt+0.1mg/lnaa)，为离体再生人参提供关键技术。与人参普通愈伤细胞及不定根相比，本专利技术提供的方法诱导与培养的人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织具有更接近人参药材的人参皂苷种类与含量，具有高产人参皂苷的能力，为人参细胞工业化生产人参皂苷提供更好的材料，可部分实现替代人参药材的目的。
23、本专利技术提供了1种诱导和分离高产人参皂苷的人参胚性干细胞的方法。本专利技术突破了人参组织培养材料人参皂苷含量低的技术瓶颈问题，对其他珍稀濒危药用植物的体外保育与应用提供极佳参考，具有较好的应用与开发前景。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织的诱导培养的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述无植物激素的培养基为MS培养基，所述启动培养基由所述MS培养基、6-苄基氨基嘌呤和萘乙酸组成。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述2)的培养的时间为3～5个月。
4.根据权利要求1-3中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述启动培养基中6-苄基氨基嘌呤的含量为0.1mg/L，所述萘乙酸的含量为1.5mg/L。
5.根据权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述外植体为叶片。
6.使用权利要求1-5中任一权利要求所述的方法制备的人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织。
7.用于诱导人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织的培养基，所述培养基由权利要求1中的启动培养基和无植物激素的培养基组成。
8.用于制备离体再生人参的培养基，所述培养基含有权利要求7所述的培养基和再生培养基，所述再生培养基含有KT和萘乙酸。
9.权利要求1-5中任一权利
10.一种制备人参皂苷的方法，其特征在于：所述方法包括使用权利要求6所述的人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织提取人参皂苷的步骤。
...【技术特征摘要】
1.人参胚性干细胞或人参胚性愈伤组织的诱导培养的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述无植物激素的培养基为ms培养基，所述启动培养基由所述ms培养基、6-苄基氨基嘌呤和萘乙酸组成。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述2)的培养的时间为3～5个月。
4.根据权利要求1-3中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述启动培养基中6-苄基氨基嘌呤的含量为0.1mg/l，所述萘乙酸的含量为1.5mg/l。
5.根据权利要求1-4中任一权利要求所述的方法，其特征在于：所述外植体为叶片。
6.使用权利要求1-...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘娟，黄璐琦，李琛，陈同，蒋超，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：
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