【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物制药，涉及一种分子表征及免疫活性与天然变应原相当的重组艾蒿花粉iii型变应原及其制备方法和应用。
技术介绍
1、花粉是季节性过敏的主要诱因之一，不同于食物过敏，花粉过敏通过空气传播，常常难以避免，可诱发鼻炎、皮炎和哮喘等一系列过敏反应，严重影响患者生活质量。在美国约7％的成人和9％的儿童受花粉过敏的困扰(niaid，national institute of allergyand infectious diseases)，欧洲的患病率估计高达40％(g.d’amato，2007)。近年来随着我国退耕还林和绿地面积不断增加，花粉过敏发病率逐年上升，高发病区可达5％。
2、蒿属(genus artemisia)植物花粉是引起我国夏秋季花粉症的重要变应原(又称过敏原)之一。国内一项2008-2010年215210次变应原特异性ige检测结果显示，在吸入性变应原中，阳性率最高的为蒿花粉。杨琼梁等2015年研究结果表明中国北方地区最主要的致敏花粉为蒿属花粉。
3、蒿属(artemisia l.)是菊科植物中物种数量最多的大属之一，全球有300种以上的蒿属植物，广泛分布于北半球温带、温寒带及亚热带地区。黄花蒿和艾蒿是常见的花粉致敏植物，其中黄花蒿(学名artemisia annua)可用于提取抗疟疾特效药青蒿素，是我国最常见的蒿属植物之一，也是我国研究最早的蒿属过敏植物。艾蒿(学名artemisia vulgaris)又名北艾，广泛分布于中国、蒙古、俄罗斯、欧洲、美国、加拿大等地，是研究最深入的致敏
4、针对过敏性疾病，who提出“四位一体”疗法：避免接触变应原，对症药物治疗，特异性免疫治疗，医生及患者教育。其中，避免接触变应原是指在确定变应原的基础上，做好环境防控，尽量避免接触变应原。在过敏性疾病的治疗过程中很好地避免接触变应原不仅可以降低患者发生过敏的几率，还可提高药物疗效，帮助患者较快脱敏。特异性免疫治疗，即脱敏治疗，是唯一可能影响过敏性疾病自然进程，改变免疫应答机制的“对因”疗法，其通过对患者使用逐渐增加剂量的变应原，提高患者对该变应原的耐受性，减轻由暴露于该变应原而引发的症状，最终达到耐受乃至免疫耐受的目的。
5、2021年浙江我武用于治疗黄花蒿/艾蒿花粉过敏引起的变应性鼻炎的脱敏药物黄花蒿花粉变应原舌下滴剂获批上市，主要成分为黄花蒿(artemisia annua)花粉变应原蛋白提取物，其专利cn101905022a指出“以蒿属花粉为原料，将花粉脱脂、浸提、浓缩，制得蒿属花粉变应原浸提液”。然而，天然变应原提取物由于原料来源及生产方法的限制不可避免存在质量方面的问题，比如存在未定义的非过敏性物质、污染物以及变应原含量和生物活性的高度变异性(valenta r，et al.allergen extracts for in vivo diagnosis andtreatment of allergy：is there afuture[j].journal of allergy&clinicalimmunology in practice，2018.)。欧洲过敏与临床免疫学会2018年发布的过敏性鼻炎变应原免疫治疗指南(eaaci guidelines on allergen immunotherapy：allergicrhinoconjunctivitis(2018))也指出：混合变应原存在许多潜在缺点，包括稀释效应、由于某些变应原的酶活性导致的潜在变应原降解以及充分证明变应原组合的功效的困难。经ema、hma、fda审批上市的标准化脱敏药物基本都限定了主要致敏蛋白，如治疗尘螨过敏的odactra含有der p 1、der p 2、der f 1、der f 2四种主要致敏蛋白，治疗梯牧草过敏的grazax含有主要致敏蛋白phl p 5，治疗豚草过敏的ragwizax含有主要致敏蛋白amb a1。另一方面，采用天然提取物进行变应原诊断存在灵敏度及特异度不高的问题，且无法明确患者对变应原组分的反应程度，易导致误诊。
6、目前尚没有重组表达的蒿属花粉变应原蛋白药物上市或开展临床试验。
技术实现思路
1、申请人希望提供一种主要致敏蛋白明确的重组艾蒿花粉变应原，以提升产品质量可控性，保证蒿属花粉过敏性疾病的脱敏免疫治疗药物的精准性和变应原诊断的准确性，为重组艾蒿花粉变应原的成药性奠定基础。
2、本专利技术的一个目的是提供一种用于治疗蒿属花粉过敏的蛋白，其为重组art v3蛋白。art v 3是艾蒿花粉的iii型变应原蛋白，为主要致敏蛋白，属于非特异性脂转运蛋白(non-specific lipid transfer protein，ns-ltp)家族，分子量约9kda，研究表明不同蒿属植物的iii型变应原蛋白具有较高的同源性(序列一致性一般80％以上)。所述重组art v3蛋白的氨基酸序列、二硫键及分子量与天然蛋白完全一致，具有与天然蛋白相似的生物学活性。
3、优选地，该重组art v 3蛋白的氨基酸序列如seq id no：2所示。
4、本专利技术的重组art v 3蛋白的氨基酸序列、分子量、氨基酸覆盖率和二硫键配对方式与天然art v 3蛋白完全一致，具有与天然art v 3相似的生物学活性，相比天然艾蒿花粉提取物，避免了不同来源的天然花粉主要变应原含量及活性批次间差异、工艺及质量更加稳定可控、还可避免天然花粉中其他成分相互作用对主要变应原的降解以及产生其他致敏反应等，满足现代生物制品的安全有效质量可控的要求，可用于过敏性鼻炎、哮喘等蒿属花粉过敏性疾病的治疗和诊断，提高蒿属花粉脱敏免疫治疗的精准性以及蒿属花粉变应原诊断的准确性，具有良好的药用前景。
5、本专利技术的另一个目的是提供一种编码art v 3蛋白的dna序列，其碱基序列如seqid no：1所示。该序列针对毕赤酵母表达系统进行了密码子优化，更利于art v 3在毕赤酵母中表达。
6、本专利技术的另一个目的是提供一种有利于毕赤酵母表达系统表达art v 3蛋白的分泌信号肽设计形式，其不仅提高了蛋白表达量，而且获得的重组art v 3蛋白与天然蛋白相比分子表征完全一致。所述信号肽为酸性磷酸酶信号肽pho1和art v 3天然蛋白信号肽ns1(natura本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于治疗蒿属花粉过敏的蛋白，其为重组艾蒿花粉III型变应原蛋白，所述重组艾蒿花粉III型变应原蛋白的氨基酸序列、二硫键及分子量与天然蛋白一致，在体外与过敏患者血清中特异性抗体的免疫反应活性与天然蛋白相当。
2.权利要求1所述的用于治疗蒿属花粉过敏的蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.编码权利要求2所述的用于治疗蒿属花粉过敏的蛋白的核苷酸，碱基序列如SEQ IDNO：1所示。
4.含有权利要求3所述的用于治疗蒿属花粉过敏蛋白的核苷酸的载体，所述的载体为pAO815，pPIC9，pPIC9K，pPIC3.5，pPIC3.5K，pPICZ A、B、C，pGAPZ A、B、C，pPICZαA、B、C或pGAPZαA、B、C。
5.包含权利要求4所述载体的毕赤酵母菌株，所述毕赤酵母菌株为SMD1168、GS115、KM71、X33或KM71H。
6.权利要求1或2所述治疗蒿属花粉过敏的蛋白的表达方法，所述方法包含下述步骤：
7.权利要求1或2所述治疗蒿属花粉过敏的蛋白的纯化方法，所述纯化方法如下
8.权利要求1或2的蛋白在制备治疗蒿属花粉过敏性疾病的药物中的应用。
9.权利要求1或2的蛋白在制备检测蒿属花粉过敏原的诊断试剂中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于治疗蒿属花粉过敏的蛋白，其为重组艾蒿花粉iii型变应原蛋白，所述重组艾蒿花粉iii型变应原蛋白的氨基酸序列、二硫键及分子量与天然蛋白一致，在体外与过敏患者血清中特异性抗体的免疫反应活性与天然蛋白相当。
2.权利要求1所述的用于治疗蒿属花粉过敏的蛋白，氨基酸序列如seq id no：2所示。
3.编码权利要求2所述的用于治疗蒿属花粉过敏的蛋白的核苷酸，碱基序列如seq idno：1所示。
4.含有权利要求3所述的用于治疗蒿属花粉过敏蛋白的核苷酸的载体，所述的载体为pao815，ppic9，ppic9k，ppic3.5，ppic3...
【专利技术属性】
技术研发人员：马永，赵百学，高慧，
申请(专利权)人：江苏众红生物工程创药研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。