本发明专利技术公开了一种适用于孕早期和孕中期产前筛查的β－人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒（时间分辨荧光免疫法）及其制备方法。该试剂盒主要成分包括：１）实验缓冲液；２）浓缩洗液；３）增强液；４）反应板；５）滤纸干血片标准品、质控品；以及６）铕标记物。根据本发明专利技术制备该试剂盒的方法包括以下步骤：１）制备实验缓冲液、浓缩洗液、增强液；２）包被反应板；３）制备标准品、质控品；４）制备铕标记物；５）分装；６）贴标签；以及７）组装为成品。本发明专利技术具有检测结果准确性、灵敏度高，稳定性好，检测方法经济、简便、安全、无创伤性等特点。滤纸干纸片技术应用于产前筛查工作，有利于血样采集、贮存、运输，保障实验可靠性。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术是涉及孕早期和孕中期产前筛查的试剂盒，特别涉及一种孕早期和孕中期 产前筛查β-人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒(时间分辨荧光免疫分析法)的制备方法， 结合了单克隆抗体制备技术、固相抗体包被技术、镧系元素离子标记技术、滤纸干血片制备 技术和时间分辨免疫荧光技术。
技术介绍
产前筛查(Prenatal Screening)是指通过经济、简便和较少创伤的检测方法，从 孕妇群体中筛选出怀有某些先天缺陷胎儿的高危孕妇并进行诊断，从而最大限度地减少缺 陷儿的出生。产前筛查可在妊娠早期(7 13周)和妊娠中期(14 21周)进行，其筛查 最主要的疾病是唐氏综合征(Down’ s Sydrome, DS)。产前筛查系统由体外诊断试剂、检测 仪器和筛查分析软件组成。人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)是目前常用于产前筛查的血 清学标志物之一。绒毛膜促性腺激素(hCG)是胎盘的合体滋养层分泌的一种糖蛋白，为胎盘中最重 要的激素，由α和β亚基组成，两个亚基可彼此结合，也可游离于血液中。孕妇血清中的 hCG主要以完整的形式存在，游离β -hCG占总hCG的1 8%。妊娠期母血清中β -HCG水 平呈双峰曲线，第1峰于妊娠12周前后，15周后出现生理性下降，20 32周维持低而平稳 水平，26周达最低。第2峰于妊娠37周，明显低于第1峰，至妊娠足月时稍有下降。在妊 娠11周内，血清β -HCG的含量与孕龄密切相关，随妊娠进展呈直线上升，孕龄每增加1天， β-HCG平均增加1.53IU/ml，分娩后急剧下降，产后4天降至lIU/ml，产后9天基本消失。唐氏综合征又称为先天愚型或21三体综合征，是胎儿先天缺陷中最常见的一种， 主要临床表现严重智力低下、愚型面容，约50%伴有先天性心脏病、小头畸形等发育异 常。其出生率约占活产新生儿的1/700 1/800，我国每年大约有26600个先天愚型痴呆儿 出生，平均每20分钟就出生一例。目前对DS尚未有治疗方法，因此通过产前筛查找出高危 孕妇，对其进行产前诊断，是减少患儿出生的重要手段。1987年Bargot发现怀有DS胎儿的孕妇血清中的hCG的水平是正常孕妇的2倍。 以孕妇年龄再结合血清中hCG检测，DS的筛查率可达到63%。1988年，伦敦Bartholomews 医院Wald提出AFP、β -HCG、uE3三联的筛查方法，得到广泛应用，一直用到至今。胎儿患DS时，胎盘重量低于正常水平，组织器官发育不全，肝脏、胎盘的功能不 良，因此孕妇血清中hCG浓度下降要比怀正常胎儿的孕妇晚3周左右，致使孕中期(约20 周左右)母血清中的hCG浓度呈高水平状态，怀DS儿孕妇血清中β-hCG浓度比正常孕妇 至少高2倍(一般> 2. 5M0M)。目前临床上主要采用羊水穿刺或绒毛膜取样等方法来进行产前诊断，不仅是创伤 性的，而且有 2%的流产率。因此，对孕妇血清标志物的筛查是今后产前筛查的主要 手段。时间分辨荧光免疫分析技术(Time-resolved fIuoroimmunoassay, TrFIA) 又称角军离 _ ±曾强 H 系；^光免疫分析(dissociation-enhancement Ianthanide fluoroimmunoassay, DELFIA)，是用三价稀土离子及其螯合物作为示踪物，当反应体系发生 后，用时间分辨荧光免疫分析仪，测定反应物中的荧光强度，定量分析待测物质的含量。其 灵敏度高，可达IO-17Hiol/孔，技术上具有独特优势，应用范围广泛。铕(Eu)标记时间分辨 荧光免疫技术是一种非放射标记超微量免疫检测技术，利用光谱分辨、时间分辨、解离-增 强原理，具有荧光寿命极长、Stokes位移大、荧光特异性强、Eu3+离子的发光范围宽的特点。 TrFIA具有敏感性高、特异性强、重复性好、定量范围宽、检测速度快、标记物稳定、试剂盒保 存期长等突出优点，成为继放射免疫分析之后的新的里程碑。目前国外的TrFIA系统试剂 盒已成商品化，主要用于激素类、癌抗原、蛋白质和多肽等项目的检查。我国从20世纪80年 代中期开始这方面的研究，目前国内也有部分试剂盒问世，但用于临床检测的项目并不多， 许多项目亟待研究开发，并形成产业化。我国幅员广阔，各地区发展不平衡，经济技术滞后和对于产前筛查的认识不足，缺 少进行产前筛查的设备、仪器、试剂和专业技术人员等原因，部分地区仍无法开展DS、神经 管缺陷等先天性疾病的产前筛查。现在滤纸干血片片已经常规应用于新生儿疾病筛查，通 过检测滤纸干血片中促甲状腺激素刺激激素(TSH)及苯丙氨酸的浓度进行新生儿甲状腺 功能低下症和苯丙酮尿症的筛查。滤纸干血片技术在一定程度上解决了大面积开展筛查工 作中采血问题、血样的递送保存问题，大大减少了产前筛查的人力、物力资源，保障了实验 的可靠性，有利于产前筛查在全国普及和深入开展。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题即是克服上述现有技术的缺陷，提供一种检测结果准确性、 灵敏度和稳定性更高的，检测方法更经济、简便、安全，且无创伤性的，用于孕早期和孕中期 产前筛查的β-人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒(时间分辨荧光免疫法)及其制备方法， 该试剂盒适于产业化推广应用。本专利技术要解决的另一个问题是为了使产前筛查在全国深入开展和普及，我们采用 了滤纸干血片技术，建立滤纸干血片中β-HCG的检测方法，并应用于产前筛查的研究中。 为我国开展大面积筛查工作在一定程度上解决了样本采集、贮存与运输问题，大大减少了 产前筛查的人力物力资源，保障了实验的可靠性。为产前筛查的普及奠定了良好的滤纸干 血片技术基础，对我国的产前筛查产前事业有着重要的意义。本专利技术的目的是提供一种结合了单克隆抗体制备技术、固相抗体包被技术、镧系 元素离子标记技术、滤纸干血片制备技术和时间分辨免疫荧光技术，用于孕早期和孕中期 产前筛查的人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒。本专利技术的试剂盒包括以下组分1)实验缓冲液；2)浓缩洗液；3)增强液；4) β-HCG单克隆抗体包被的微孔反应板；5) β-HCG标准品、质控品；以及6) Eu3+-N2-_ 二乙烯三胺四乙酸钠标记的β -HCG单克隆抗体标记物。本专利技术提供了一种适用于孕早期和孕中期产前筛查的时间分辨荧光免疫试法试 剂盒及其制备方法包括以下步骤1)制备实验缓冲液、浓缩液、增强液；2)以β -HCG单克隆抗体包被的微孔反应板；3)以β _人绒毛膜促性腺激素纯品配制标准品、质控品；4)以Eu3+-N2--二乙烯三胺四乙酸钠标记β-HCG单克隆抗体； 5)分装上述实验缓冲液、浓缩洗液、增强液、标准品和铕标记物；6)贴标签；7)组装为成品。根据本专利技术的方法，其中，步骤3)所述以人绒毛膜促性腺激素纯品配制标准 品、质控品采用以下步骤标准品和质控品制作的基质为人血红细胞和阴性血清；基质包括，但不限于人血 红细胞和阴性血清。其中基质的血细胞比容为45% 90%;其中血细胞比容以50% 55% 为佳。标准品为A、B、C、D、E、F 6个标准点。质控品*Qi、Q2、Q3(低、中、高)3个浓度。夕卜 包装为铝箔袋。人绒毛膜促性腺激素标准品、质控品的制作，是以人绒毛膜促性腺 激素国家标准品为参照，用50% 55%的血细胞比容的人血红细胞和阴性血清本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种适用于孕早期和孕中期产前筛查的β－人绒毛膜促性腺激素测定试剂盒（时间分辨荧光免疫法），对孕妇血清中的β－人绒毛膜促性腺激素（β－ＨＣＧ）进行定量测定。其特征包括以下组分：实验缓冲液、浓缩洗液、增强液、β－ＨＣＧ单克隆抗体包被的微孔反应板、β－ＨＣＧ标准品和质控品、Ｅｕ↑［３＋］－Ｎ↓［２］－［Ｐ－异氰酸－苄基］－二乙烯三胺四乙酸钠标记的β－ＨＣＧ单克隆抗体标记物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴道贫，汪勤，季涛，李贵情，谭玉华，何海荣，冯健明，沈健，郑元升，刘胜利，
申请(专利权)人：广州市丰华生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]
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