【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然产物领域，具体涉及一类角环素化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。
技术介绍
1、随着人口老龄化和工业化、城镇化进程不断加快，加之饮食习惯、慢性感染以及空气污染等因素不断积累，癌症已成为威胁人民群众生命健康的“头号杀手”。中国是人口大国，癌症新发人数和死亡人数远超世界其他国家，已经成为了名副其实的“癌症大国”。我国每年因恶性肿瘤所致的医疗花费超过2200亿，巨额费用支出给国家财政和患者家庭带来了沉重负担。药物治疗目前是癌症患者生活质量提升和疾病治愈的重要手段，但目前应用于临床的抗肿瘤药物存在选择性差、副作用大、耐药性强、无法根治癌症等多种问题。因此，亟待科研工作者们推陈出新，发现新型抗肿瘤药物，以扩大药物的适用范围，提高药物的有效性，进而满足日益严峻的临床用药需求。
2、微生物天然产物是新药开发的重要来源，角环素类(angucyclines)天然产物是指主要由放线菌产生的一类多环芳香族聚酮类化合物，该类分子由于其独特的结构骨架和良好的抗肿瘤活性一直都是药物开发研究的重点之一，但因毒性较大或溶解度太低等问题未开发成为临床药物。因此，开发和优化新的角环素类药物先导化合物显得尤为重要。
技术实现思路
1、本专利技术的第一个目的是提供一类角环素化合物或其药用盐，其结构如式(ⅰ)中的1、2、3、4、5、6、7或8所示，
2、
3、本专利技术的第二个目的是提供海洋放线菌streptomycespratensis scsio lcy0
4、所述的海洋共生放线菌streptomycespratensis scsio lcy05δa是通过以下方法制备：
5、a.streptomycespratensis scsio lcy05是海鞘共附生放线菌，前期本课题组已完成菌种鉴定。
6、b.采用pcr-targeting技术对菌株streptomyces pratensis scsio lcy05中编码anthracimycin基因簇的骨架基因orf4255的甲基转移酶结构域mt进行基因敲除，以获得代谢背景较为干净的工程菌株streptomycespratensis scsio lcy05δa。通过λ-red同源重组将筛选得到的阳性cosmid黏粒上的目标基因的部分序列用阿普拉抗性基因替换而失活，最后通过接合转移将突变的cosmid转到野生型链霉菌streptomycespratensis scsiolcy05中，再经同源重组使其基因组中的目标基因被阿普拉抗性基因插入失活而得到正确的敲除突变株streptomycespratensis scsio lcy05δa。
7、本专利技术的第三个目的是提供上述的海洋放线菌streptomycespratensis scsiolcy05δa在制备上述的角环素化合物中的应用。
8、本专利技术的第四个目的是提供上述的角环素化合物的制备方法，是从上述的海洋放线菌streptomycespratensis scsio lcy05δa的发酵培养物中分离得到。
9、优选，包括如下步骤：
10、a.用含质量体积比2％xad16n树脂的培养基培养上述的海洋放线菌streptomycespratensis scsio lcy05δa，制备其发酵培养物，过滤分离xad16n树脂，剩余发酵液离心后，弃上清，得到菌体沉淀；xad16n树脂用2倍体积的乙醇超声萃取，菌体用等体积的丙酮超声萃取，合并萃取所得产物进行真空浓缩，最终得到粗提物；
11、b.粗提物用chcl3与meoh体积比例为100:0、98:2、96:4、94:6、92:8、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50在硅胶柱中进行梯度洗脱，得到10个馏分fr.1-fr.10；fr.4馏分采用chcl3和meoh体积比例为100:0、98:2、96:4、94:6、92:8、90:10的混合溶液在硅胶柱中进行梯度洗脱，得到6个馏分fr.4.1-fr.4.6；fr.4.4馏分经半制备hplc纯化得到化合物7、化合物1和化合物5；fr.4.5馏分经纯化得到化合物2和化合物6；通过半制备hplc分离fr.4.6，得到化合物3、化合物8和化合物4。
12、优选，海洋放线菌streptomycespratensis scsio lcy05δa的发酵培养物是通过以下方法制备：
13、a.将菌株streptomycespratensis scsio lcy05δa接种到ms固体平板上，28℃培养5-7天，待其菌丝体生长成熟后转移到50ml改良-p3培养基，振荡培养36小时得到种子培养液；
14、b.将种子培养液平均接种到两个1l烧瓶中，烧瓶中装有200ml含质量体积比2％xad16n树脂的改良-p3培养基，振荡培养9天得到s.pratensis scsio lcy05δa的发酵培养物；
15、所述改良-p3培养基为：含质量百分数2％燕麦粉、2％葡萄糖、0.01％feso4·7h2o、0.01％znso4·7h2o、0.01％mncl2·4h2o、0.01％微量元素和0.2％caco3，余量为水，ph 6.8-7；所述微量元素含质量百分数0.08％zncl2、0.4％fecl3·6h2o、0.02％cucl2·6h2o、0.01％mncl2·4h2o、0.02％nab4o7·10h2o，余量为水。
16、本专利技术的第五个目的是提供上述的角环素化合物或其药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
17、优选，所述的抗肿瘤药物为抗结肠癌、乳腺癌和/或三阴乳腺癌的药物。
18、本专利技术的第六个目的是提供一类抗肿瘤药物，其包括有效量的作为活性成份的上述的角环素化合物或其药用盐。
19、优选，所述的抗肿瘤药物为抗结肠癌、乳腺癌和/或三阴乳腺癌的药物。
20、上述的角环素化合物对乳腺癌细胞株(mcf-7)、宫颈癌细胞株(hela)、三阴乳腺癌细胞株(mda-mb-231)、胃癌细胞株(hgc-27)、结直肠癌细胞株(hct-116)、人肝癌细胞株(hepg-2)、肺癌细胞株(a549)、胰腺癌细胞株(panc-1)、鼻咽癌细胞株(5-8f)、黑色素瘤细胞株(a375)、胶质母细胞瘤(u87mg)有较好抑制活性。其中该类化合物对结直肠癌细胞株(hct-116)、三阴乳腺癌细胞株(mda-mb-231)、乳腺癌细胞株(mcf-7)的活性均优于阳性药物顺铂，具有开发抗肿瘤药物先导化合物的潜力。
21、本专利技术的优点：
22、本专利专利技术者从一株海洋放线菌streptomycespratensis scsio lcy05的基因敲除突变株scsio lcy05δa中分离得到8个角环素类化合物1-8，其中化合物1-6为新化合物，抗肿瘤活性测试显示化合物1-8对多种人癌细胞系显示出较好的抗本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.角环素化合物或其药用盐，其结构如式(Ⅰ)中的1、2、3、4、5、6、7或8所示，
2.海洋放线菌Streptomycespratensis SCSIO LCY05ΔA，其保藏编号为：GDMCC No:64436。
3.权利要求2所述的海洋放线菌Streptomycespratensis SCSIO LCY05ΔA在制备权利要求1所述的角环素化合物中的应用。
4.权利要求1所述的角环素化合物的制备方法，其特征在于，从权利要求2所述的海洋放线菌Streptomycespratensis SCSIO LCY05ΔA的发酵培养物中分离得到。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，海洋放线菌StreptomycespratensisSCSIOLCY05ΔA的发酵培养物是通过以下方法制备：
7.权利要求1所述的角环素化合物或其药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗结肠癌、乳腺癌和
9.一类抗肿瘤药物，其特征在于，包括有效量的作为活性成份的权利要求1所述的角环素化合物或其药用盐。
10.根据权利要求9所述的抗肿瘤药物，其特征在于，所述的抗肿瘤药物为抗结肠癌、乳腺癌和/或三阴乳腺癌的药物。
...【技术特征摘要】
1.角环素化合物或其药用盐，其结构如式(ⅰ)中的1、2、3、4、5、6、7或8所示，
2.海洋放线菌streptomycespratensis scsio lcy05δa，其保藏编号为：gdmcc no:64436。
3.权利要求2所述的海洋放线菌streptomycespratensis scsio lcy05δa在制备权利要求1所述的角环素化合物中的应用。
4.权利要求1所述的角环素化合物的制备方法，其特征在于，从权利要求2所述的海洋放线菌streptomycespratensis scsio lcy05δa的发酵培养物中分离得到。
5.根据权利要求4所述的制备方法，...
【专利技术属性】
技术研发人员：马俊英，李艳青，鞠建华，张华，吴淑仪，王一迪，蔡鲜花，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：
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