【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物活性肽领域，特别涉及一种具有α-葡萄糖苷酶抑制活性和改善胰岛素抵抗的鲟鱼活性肽及其应用。
技术介绍
1、ⅱ型糖尿病(t2dm)是一种以高血糖为特征的代谢性疾病，包含胰岛素抵抗等一系列代谢缺陷，可导致常见的疾病并发症，如心血管疾病、肾衰竭、视网膜病变等。
2、胰岛素抵抗是t2dm进展过程中的早期代谢异常状态。胰岛素受体(ir)不敏感导致的胰岛素抵抗、慢性高血糖、低度炎症、血脂异常是t2dm的特征。当胰岛素对骨骼肌中的葡萄糖转或对肝脏中抑制内源性葡萄糖运效率低于预期时，就会导致胰岛素抵抗。α-葡萄糖苷酶抑制肽作为一种生物活性大分子，研究表明其可以恢复细胞对胰岛素的敏感性，从而达到预防和治疗t2dm的目的。
3、t2dm最有效的治疗策略是维持正常的血糖水平。抑制餐后高血糖的有效方法之一是通过抑制α-葡萄糖苷酶来控制葡萄糖的释放。α-葡萄糖苷酶抑制剂可降低糖的消化率，阿卡波糖和米格列醇两种α-葡萄糖苷酶抑制剂在临床上用于控制餐后高血糖，但这些药物通常有许多副作用，如腹胀、胀气、腹泻、眩晕和呕吐等，因此，有必要寻找成本低且相对安全的植物性食品或补充剂作为α-葡萄糖苷酶抑制剂的替代品。大量研究已证实，一些食品源生物活性成分(肽、酚类、萜类等)具备优异的α-葡萄糖苷酶抑制潜能，其中由食源蛋白制备的α-葡萄糖苷酶抑制肽具有营养属性，因其生物利用度高、t2dm治疗效果明显、与传统α-葡萄糖苷酶抑制剂相比副作用低等特点受到研究界的广泛关注。例如：中国专利(专利号：201810844107.2，名称：一种具有
技术实现思路
1、本专利技术的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种鲟鱼活性肽。
2、本专利技术的另一目的在于提供所述的鲟鱼活性肽在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性的产品中的应用。
3、本专利技术的另一目的在于提供所述的鲟鱼活性肽在制备改善或治疗胰岛素抵抗的产品中的应用。
4、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
5、一种鲟鱼活性肽，为如下至少一种：
6、(1)酶解产物：以鲟鱼肉为原料，经碱提酸沉法提取、复合蛋白酶酶解后获得的粗产物；
7、(2)鲟鱼活性肽，氨基酸序列如下所示：vllqknndt(seq id no.1)；
8、(3)鲟鱼活性肽，氨基酸序列如下所示：lsmqraqee(seq id no.2)。
9、所述的酶解产物优选为通过如下方法制备得到：
10、(a)碱提酸沉：以鲟鱼肉为原料，搅打成肉糜后加水混合均质，然后调节体系ph至7.0～11.0，于40±2℃条件下进行提取，提取后离心取上清，调节体系ph至3.0～6.0沉淀蛋白质，再离心、取沉淀，冷冻干燥，得到鲟鱼蛋白(asp)；
11、(b)酶解：将鲟鱼蛋白加入到水中，得到鲟鱼蛋白溶液；然后将复合蛋白酶加入到鲟鱼蛋白溶液中，调节ph值至7.0～8.0，于40～45℃条件下进行酶解，得到酶解产物，即所述鲟鱼活性肽的粗产物。
12、步骤(a)中所述的鲟鱼肉和水的料液比1g：9～10ml；优选为1g：9ml。
13、步骤(a)中所述的均质的条件为：5000rpm均质2～3分钟；优选为：5000rpm均质2分钟。
14、步骤(a)和(b)中所述的调节ph值为采用hcl或naoh溶液进行调节；优选为采用1mol/l的hcl或naoh溶液进行调节。
15、步骤(a)中所述的碱提的ph值优选为10.0～11.0；更优选为10.0。
16、步骤(a)中所述的碱提的时间为30～40min；优选为30min。
17、步骤(a)中所述的酸沉的ph值优选为5.0～5.5；更优选为5.0。
18、步骤(b)中所述的水优选为蒸馏水。
19、步骤(b)中所述的鲟鱼蛋白溶液的浓度优选为10mg/ml。
20、步骤(b)中所述的复合蛋白酶优选为上海源叶生物科技有限公司生产的复合蛋白酶，货号为s10155(产品规格：120u/mg)。
21、步骤(b)中所述的复合蛋白酶的用量为按每克鲟鱼蛋白配比10000～12000u的复合蛋白酶计算；优选为按每克鲟鱼蛋白配比10000u的复合蛋白酶计算。
22、步骤(b)中所述的酶解的条件优选为：ph值为7.5，酶解温度为45℃，酶解时间为3h。
23、所述的酶解产物，可以进一步纯化分离得到鲟鱼活性肽，具体步骤如下：
24、(c)将步骤(b)中的酶解产物经超滤、凝胶柱层析分离纯化和质谱分析鉴定，获得所述的鲟鱼活性肽；其中，鲟鱼活性肽的氨基酸序列如seq id no.1(vllqknndt)和/或seqid no.2(lsmqraqee)所示。
25、步骤(c)中所述的超滤为采用截留分子量3kd的超滤管进行超滤。
26、步骤(c)中所述的凝胶柱层析的条件为：sephadex g-25凝胶色谱，上样量为3ml，上样后静置30min，用超纯水进行洗脱，流速为0.5ml/min，于230nm进行检测并绘制分离峰，合并第2个和第3个峰下的组分。
27、所述的鲟鱼活性肽在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性的产品中的应用。
28、所述的产品包括抑制α-葡萄糖苷酶活性的药品(药物)等。
29、所述的抑制α-葡萄糖苷酶活性的药品包括α-葡萄糖苷酶抑制剂等。
30、所述的鲟鱼活性肽在制备改善或治疗胰岛素抵抗的产品中的应用。
31、所述的产品包括改善或治疗胰岛素抵抗的药品(药物)，辅助降血糖的药品、食品或保健品等。
32、所述的鲟鱼活性肽通过上调akt mrna和pi3k mrna表达量，增加了akt和pi3k的磷酸化水平，促进葡萄糖转运体4(glut4)对血糖的运输，并抑制磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(pepck)的表达来抑制糖异生，从而达到调节血糖的功能。
33、所述的鲟鱼活性肽在制备改善细胞胰岛素抵抗的产品中的应用。
34、所述的细胞包括正常人肝细胞或人肝癌细胞；优选为人肝癌细胞hepg2(可用于构建胰岛素抵抗模型，用于研究活性物质的降糖效果)。
35、本专利技术相本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鲟鱼活性肽，其特征在于，所述鲟鱼活性肽为如下至少一种：
2.根据权利要求1所述的鲟鱼活性肽，其特征在于，所述的酶解产物通过如下方法制备得到：
3.根据权利要求2所述的鲟鱼活性肽，其特征在于：
4.权利要求1～3任一项所述的鲟鱼活性肽在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性的产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的产品包括抑制α-葡萄糖苷酶活性的药品。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述的抑制α-葡萄糖苷酶活性的药品为α-葡萄糖苷酶抑制剂。
7.权利要求1～3任一项所述的鲟鱼活性肽在制备改善或治疗胰岛素抵抗的产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述的产品包括改善或治疗胰岛素抵抗的药品，辅助降血糖的药品、食品或保健品。
9.权利要求1～3任一项所述的鲟鱼活性肽在制备改善细胞胰岛素抵抗的产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述的细胞包括正常人肝细胞或人肝癌细胞。
【技术特征摘要】
1.一种鲟鱼活性肽，其特征在于，所述鲟鱼活性肽为如下至少一种：
2.根据权利要求1所述的鲟鱼活性肽，其特征在于，所述的酶解产物通过如下方法制备得到：
3.根据权利要求2所述的鲟鱼活性肽，其特征在于：
4.权利要求1～3任一项所述的鲟鱼活性肽在制备抑制α-葡萄糖苷酶活性的产品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的产品包括抑制α-葡萄糖苷酶活性的药品。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：...
【专利技术属性】
技术研发人员：娄文勇，旷晓艳，吴楚丽，宗敏华，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：
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