【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药生物，具体的，涉及一组嵌合体多肽及其应用。
技术介绍
1、脓毒症是一种复杂的疾病，随着宿主对感染的反应失调而发展，并与急性器官功能障碍和高死亡风险相关[1]。凝血和炎症的激活是败血症期间宿主防御的必要反应[2]。模式识别受体识别结合微生物病原体相关的分子模式，这些受体位于先天免疫系统细胞上，可引起促炎和抗炎介质的释放。释放的细胞因子，比如肿瘤坏死因子(tnf)α，白细胞介素(il)1,2,6,8等，可引起中性粒细胞-内皮细胞粘附，激活补体和凝血级联，并可导致微血栓的产生[3]。有证据表明，败血症中的凝血主要是由tf驱动的。tf和因子viia通过外源性途径激活凝血，tf-viia复合物激活凝血酶，凝血酶将纤维蛋白原裂解为纤维蛋白，同时引起血小板聚集。凝血功能障碍是与脓毒症患者死亡率相关的主要因素，凝血功能障碍有很多临床表现，从轻微的血小板减少到致命性疾病，如弥散性血管内凝血[4]。磷脂酰丝氨酸残基是接触途径的启动剂，在细胞膜上表达，可启动止血和凝块形成[5]。为了平衡这种凝血作用，循环血浆蛋白包括抗凝血酶和蛋白c/s在抗凝中起到了重要作用[6]。血管内皮的抗血栓作用在脓毒症中也很重要，但在生理条件下，它可以防止血栓形成，维持血管完整性，调节血管张力。血管内皮细胞释放一氧化氮和前列环素，从而促进生理性抗血栓作用，而在败血症条件下，它通过表达组织因子和释放血管性血友病因子来促进凝血作用[7]。内皮功能障碍和抗凝功能紊乱是败血症引起的凝血病的标志。血管内皮表面由膜结合蛋白聚糖和糖胺聚糖侧链排列，通过与抗凝血酶结合提供关
2、补体是先天免疫防御病原体的关键组成部分，但不受控制的补体激活可能导致败血症的病理。脓毒症的早期阶段与三种补体途径(经典、替代和凝集素)的强烈激活有关，产生多种强促炎肽，特别是过敏毒素c3a和c5a。c3a最初是通过其与其受体(c3ar)反应的能力而被发现的，这种反应导致多种组织中血管通透性增加和平滑肌收缩[10-12]。另一种过敏毒素c5a被认为是中性粒细胞和巨噬细胞的一种非常强大的激活剂。在与c5a受体(c5ar1和c5ar2)快速结合后，c5a·c5ar1相互作用导致中性粒细胞和巨噬细胞的激活，其结果是释放促炎细胞因子和趋化因子，趋化性，产生强大而有害的氧自由基，以及释放多种酶和脂质介质，这些酶和脂质介质可积极或消极地调节炎症反应[13-15]。
3、补体和凝血途径在脓毒症中的作用密切相关。作为血液凝固的中心触发器，tf在维持凝血和补体的激活中起着关键作用。在感染、受伤或炎症期间，各种危险信号可以激活toll样受体，刺激细胞因子和趋化因子的释放，增加粘附分子的表达，激活tf[16]。在这种情况下，补体也不可避免地被一种或多种途径激活，并释放过敏毒素，进一步促进tf的表达[17]。补体途径的末端组分在细胞膜表面的组装，通过刺激蛋白二硫异构酶的氧化，部分地上调tf活性[18,19]。一旦开始，这一连串的事件就会自我刺激，并随着进一步的炎症和凝血而升级。几种凝血系统酶，包括凝血酶、因子ixa、因子xa、因子xia和激肽释放酶等，以不依赖于c3的方式直接激活c5[20-24]。激肽释放酶还可以激活c3和因子b，并产生因子xiia，而因子xiia本身又能激活c1r，从而触发补体激活的经典途径[25]。纤溶酶在补体活化中的作用是复杂的[26]。在动脉和静脉血栓动物模型中，纤溶酶具有c5转化酶活性，释放c5a并诱导mac组装[27]。通过这种方式，纤溶酶可能有助于白细胞募集到血栓的形成和溶解。此外，c5b-9可以诱导血小板表面的磷脂酰丝氨酸，为凝血酶原组装提供催化表面[28]。严重的败血症导致凝血和补体级联反应的大量激活，可能导致多器官衰竭和死亡。补体系统和凝血系统相互作用加快了严重脓毒症的进展，所以，抗凝和抗补体是脓毒症的一种潜在的治疗策略。
4、蛋白酶广泛存在于从细菌到哺乳动物等几乎所有生物体中，在生物体的正常生命活动中扮演重要的角色[29]。截至目前，已鉴定出超3000种丝氨酸蛋白酶抑制剂，是已知蛋白酶抑制剂家族中成员最多、功能最广泛的一类。根据序列同源性、高级结构特征和作用机制，丝氨酸蛋白酶抑制剂可以分为kunitz、kazal、serpin和mucus家族[30]。unitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂通常含有一个或多个串联的kunitz结构域，在机体的血凝平衡、炎症发生和免疫调节等过程中发挥重要作用[31]。kunitz结构域是一类包含50-60个氨基酸残基的多肽，含有4-6个半胱氨酸残基，形成2-3对二硫键来保持其高级结构的稳定性，这些半胱氨酸残基之间的空间是保守的，因此4个半胱氨酸残基同样能赋予它们典型的二硫键模式。前两对二硫键对于保存天然构象至关重要，而第三对二硫键则负责维持结合位点的稳定性[32]。二级结构主要包括1-2个α-螺旋和一对反向平行的β-片层[33]。对蛋白酶起抑制作用的部分氨基酸残基序列称为蛋白酶结合环(loop)，该分子表面有2个能够与蛋白酶活性中心结合的loop从而实现其蛋白酶抑制活性[32]。该基序首次在牛胰蛋白酶抑制剂(bpti)样蛋白酶抑制剂中发现，bpti样蛋白酶抑制剂是丝氨酸蛋白酶如胰蛋白酶和凝乳胰蛋白酶的强抑制剂，bpti由58个氨基酸残基组成，该分子具有两个loop，分别为残基11tgpckariir20和残基34vyggc38[34]，bpti主要依靠这两个loop与胰蛋白酶进行广泛的相互作用[35]。
5、在功能方面，kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂参与凝血和纤维蛋白溶解、肿瘤免疫、炎症调节以及抵抗细菌、真菌感染等过程。例如，fasxiator是从带状金环蛇的毒液中分离并测序得到的kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂，其重组表达形式rfasxiator与天然fasxiator具有相似的二级结构以及对fxia和糜蛋白酶的抑制作用，是fxia缓慢有效的抑制剂[36]。egki-1是细粒棘球绦虫中的kunitz型蛋白酶抑制剂，是一种有效的胰凝乳蛋白酶和中性粒细胞弹性酶抑制剂，在局部炎症模型中结合钙并减少中性粒细胞浸润[37]，egki-1还可以通过破坏细胞周期进程直接抑制肿瘤生长，从而增加癌细胞凋亡，从而诱导抗癌作用[38]。kunitz型丝氨酸蛋白酶抑制剂分子量小，不易被各种酶降解，作为疾病治疗药物具有很大的潜力[31]。
6、本课题组前期从寄生绦虫中发现了抗凝和抗补体双功能的kunitz多肽tsm1，并以tsm1为模板，在ncbi数据库中通过blast比对搜索出了4个来自绦虫的tsm1同源物，分别为hyta11、hydi12、hydi21和rona13，这为本工作开展进一步的嵌合体设计改造提供了多肽分子模板。
7、基于此，提出本专利技术。
8、[参考文献]
9、[1]cecconi m,evan本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一组嵌合多肽，所述嵌合多肽为，以TSM1多肽为骨架，使用Rona13多肽的部分氨基酸，替换骨架部分对应的序列后获得的多肽；
2.根据权利要求1所述的嵌合多肽，其特征在于，所述的替换指，
3.根据权利要求1或2所述的嵌合多肽，其特征在于，所述的嵌合多肽为
4.编码权利要求1-3任一所述的嵌合多肽的编码核酸。
5.包含权利要求1-3任一所述嵌合多肽或权利要求4所述的编码核酸的药物组合物，所述的药物组合物包括，治疗有效量的所述嵌合多肽或编码核酸，以及必要的药用辅料。
6.权利要求1-3任一所述嵌合多肽或其编码核酸的如下用途：
【技术特征摘要】
1.一组嵌合多肽，所述嵌合多肽为，以tsm1多肽为骨架，使用rona13多肽的部分氨基酸，替换骨架部分对应的序列后获得的多肽；
2.根据权利要求1所述的嵌合多肽，其特征在于，所述的替换指，
3.根据权利要求1或2所述的嵌合多肽，其特征在于，所述的嵌合多肽为
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