【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药及临床诊断领，具体是一种对axl蛋白具有结合亲和力的多肽及其应用。
技术介绍
1、axl受体（也称ufo/ark/tyro7/jtk11），是受体酪氨酸激酶（rtk）tam家族中的一员，广泛表达于体内各种细胞及组织。其与tyro3(也称为sky/rse)及mertk(也称eyk/nyk/tyro12)共同组成了tam受体家族，在胞葬、免疫平衡、炎症反应等方面发挥重要作用。axl基因位于人19号染色体q13.2，该基因最初从2名慢性粒细胞性白血病（cml）患者中分离出来，并被证明能引起nih3t3细胞的肿瘤转化。
2、axl蛋白共有894个氨基酸组成，其中胞外结构域主要包含两个免疫球蛋白样（igl）结构以及两个纤连蛋白iii（fniii）结构，负责与其配体生长停滞特异性蛋白6（gas6）及维生素k依赖家族的pros1蛋白结合，参与axl 的配体激活途径。gas6/axl配体结合途径也是axl激活最常见的途径，在此过程中，gas6蛋白先与axl受体结合形成gas6/axl二聚体，后与另一个gas6/axl二聚体形成2:2的同二聚体复合物，从而启动下游信号通路转导。此外，axl受体还可以与同细胞或邻近细胞其他axl受体结合形成自二聚体、tam家族其他受体、rtk其他类型受体结合并导致其活化。由于axl受体的特殊功能及其多种激活方式和多细胞表达特性，也使其成为肿瘤免疫、抗病毒治疗等多种领域研究的热点。
3、目前，与axl表达上调有关的癌症有肺癌、乳腺癌、鼻咽癌、胃癌、结肠癌、肝癌等，因此其与
4、对于axl的抑制剂开发用于癌症靶向治疗目前多趋向于单克隆抗体、小分子抑制剂等，但其多少存在一些难以克服的缺点限制其临床疗效。例如：由于分子结构的相近和相似性，研发的axl小分子抑制剂多数也抑制其他rtk激酶，且对axl作用效果相对较弱，用于治疗时常常还需联合其他抑制剂一起使用。单克隆抗体虽然靶向性较强，但其制备工艺复杂，实体瘤渗透性差，研发成本高，增加患者临床应用的经济负担。因此，除小分子抑制剂及单克隆抗体之外的axl靶向抑制剂用于癌症靶向治疗极有必要。
5、基于上述说明，本领域仍然亟待研究靶向性治疗以axl受体为靶点及其相关肿瘤的新药物或新方法，以改善目前临床现状。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种对axl蛋白具有结合亲和力的多肽及其应用，本专利技术所采取的技术方案如下：
2、本专利技术的第一方面，提供一种对axl蛋白具有结合亲和力的多肽，该多肽是以葡萄球菌a 蛋白（spa）z 段（z结构域）的氨基酸序列作为骨架，进行12-20 个（较佳地为13-16个，如14 个、15 个）氨基酸变异后获得的多肽。
3、相对于葡萄球菌a 蛋白z 段的氨基酸序列（seq id no:1)，所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽在第9-11，13-14，17-18，24-25，27-28，32，35，43 位上发生氨基酸突变。
4、所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽的序列如seq id no:3所示：
5、第9位氨基酸突变为c；
6、第10位氨基酸突变为h；
7、第11位氨基酸突变为m；
8、第13位氨基酸突变为v；
9、第14位氨基酸突变为w；
10、第17位氨基酸突变为t；
11、第18位氨基酸突变为l；
12、第24位氨基酸突变为h；
13、第25位氨基酸突变为q；
14、第27位氨基酸突变为g；
15、第28位氨基酸突变为p；
16、第32位氨基酸突变为p；
17、第35位氨基酸突变为r；
18、第43位氨基酸突变为e。
19、所述的seq id no:3与axl蛋白相互作用的kd 值为3.19×10-6m。
20、在本专利技术的另一方面，提供一种靶向axl蛋白的靶向性分子，所述的靶向性分子包括前面所述的多肽（seq id no:3)，以及与该多肽相连接（或偶联）的偶联物，所述的偶联物包括（但不限于）：半胱氨酸残基，多肽标签，或可检测标记物（如荧光标记，酶，生物素或放射性同位素）。
21、在一个优选例中，所述的偶联物是肽，所述的偶联物与所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽构成融合多肽。
22、在另一优选例中，所述的多肽标签包括但不限于：his 标签（如6×his），myc 标签，gst 标签，flag 标签。
23、在另一优选例中，所述酶包括但不限于：碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。
24、在另一优选例中，所述的偶联物与所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽以柔性肽连接，所述柔性肽包括（但不限于）：(gly4ser)3。
25、在本专利技术的另一方面，提供一种分离的多核苷酸，其编码前面所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽。
26、在本专利技术的另一方面，提供一种多核苷酸，其编码所述的靶向axl蛋白的靶向性分子，且其中所述的偶联物是肽。
27、在本专利技术的另一方面，提供一种重组载体，该载体包含所述的多核苷酸。
28、在本专利技术的另一方面，提供一种宿主细胞，该宿主细胞包含所述的重组载体，或其包含有或基因组中整合有所述的多核苷酸。
29、在本专利技术的另一方面，提供一种制备前面任一所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽的方法，所述方法包括：(1) 培养所述的细胞，从而表达所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽；(2) 分离纯化(1) 获得的多肽。
30、在本专利技术的另一方面，提供所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽或所述的靶向axl蛋白的靶向性分子的用途，用于制备治疗axl蛋白表达上调肿瘤的药物；或用于制备检测axl蛋白的检测试剂、试剂盒；或用于制备诊断axl蛋白表达上调肿瘤的诊断试剂。
31、在一个优选例中，所述的靶向axl蛋白的靶向性分子中，所述的偶联物是抗肿瘤药物(如毒素)，所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽，或所述的靶向axl蛋白的靶向性分子应用于制备治疗axl蛋白表达上调肿瘤的药物。
32、在另一优选例中，所述的靶向axl蛋白的靶向性分子中，所述的偶联物是可检测标记物(如荧光标记或酶)，所述的对axl蛋白具有结合亲和力的多肽，或所述的靶向axl蛋白的靶向性分子应用于制备本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种对AXL蛋白具有结合亲和力的多肽，其特征在于：该多肽是以葡萄球菌A蛋白Z段的氨基酸序列作为骨架，进行14个氨基酸变异后获得的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。
2.一种靶向AXL蛋白的靶向性分子，其特征在于，所述靶向性分子包括如权利要求1所述的多肽，以及与该多肽相连接的偶联物。
3.根据权利要求2所述的靶向AXL蛋白的靶向性分子，其特征在于：所述偶联物为半胱氨酸残基、多肽标签、可检测标记物、结合AXL蛋白的药物中的一种或多种。
4.一种多核苷酸，其编码如权利要求1所述的多肽。
5.一种重组载体，其特征在于：其包含如权利要求4所述的多核苷酸。
6.一种宿主细胞，其特征在于：其内包含有或基因组中整合有如权利要求4所述的多核苷酸，或包含权利要求5所述的重组载体。
7.如权利要求1所述的多肽或权利要求2所述的靶向性分子在检测AXL蛋白的应用，所述应用为非疾病诊断、治疗目的。
8.如权利要求1所述的多肽或权利要求2所述的靶向性分子在制备检测AXL蛋白的检测试剂或试剂盒中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种对axl蛋白具有结合亲和力的多肽，其特征在于：该多肽是以葡萄球菌a蛋白z段的氨基酸序列作为骨架，进行14个氨基酸变异后获得的多肽，其氨基酸序列如seq id no:3所示。
2.一种靶向axl蛋白的靶向性分子，其特征在于，所述靶向性分子包括如权利要求1所述的多肽，以及与该多肽相连接的偶联物。
3.根据权利要求2所述的靶向axl蛋白的靶向性分子，其特征在于：所述偶联物为半胱氨酸残基、多肽标签、可检测标记物、结合axl蛋白的药物中的一种或多种。
4.一种多核苷酸，其编码如权利要求1所述的多肽。
5.一种重组载体，其特征在于：其包含如权利要求4所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：张丽芳，陈俊，杜王琪，朱珊丽，薛向阳，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：
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