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【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物代谢物收集,具体地说,涉及斑马鱼尿液代谢物收集方法。
技术介绍
1、代谢组学是描述生物内源性物质整体因内部、外部因素变化引起的应答规律的科学。其最重要的部分是经过高通量的不同组别试验和整体方法的统计学分析,从方法生物学的角度出发,综合比较差异性代谢物变化,从而深入探究发病机理和治疗药物的作用机制。
2、斑马鱼尿液代谢物收集方法主要用于以斑马鱼动物模型为基础的代谢组学研究。
3、斑马鱼是一种原产于南亚地区的小型热带淡水鱼,由于其具有易饲养、繁殖力强,发育快,受精卵透明易观察等特点,现已成为在全世界范围内被广泛应用的脊椎实验动物。斑马鱼作为低等脊椎动物的代表,与人类基因同源性达87%,现在越来越广泛地应用于疾病模型创制、基因功能评估、药物筛选、毒性检测、以及环境健康风险评价等不同领域中。同时,中药、天然药物、保健食品以及功能食品的研发当中也不乏斑马鱼实验的贡献。斑马鱼应用范围十分广泛,主要集中在生物学、中药学、环境科学与资源利用以及基础医学、肿瘤学等方面。越来越多的单位开始筹建斑马鱼药物研发实验室,特别是在中药和天然药物研发领域。
4、设计斑马鱼尿液代谢物收集方法,主要目的是为填补对于斑马鱼尿液代谢组学研究的空白而设计的一整套有效的收集装置,配合合理的实验方法,可对斑马鱼尿液进行分析。
5、有鉴于此特提出本专利技术。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题,本专利技术采用技术方案的基本构思是:
2、对实验动物进
3、步骤s1:将鱼缸内水温恒定设置为18℃,用于保证斑马鱼正常活动的同时尽量降低温度,减少水中内源性代谢物在常温下的分解;
4、步骤s2:开启恒流注射泵设置流速为1ml/h,用于给予缸内补水并为斑马鱼增氧;
5、步骤s3:以v=1ml/h收集斑马鱼尿液代谢物24h,并置于冰水浴中;
6、步骤s4:浓缩尿样,将收集到的24ml斑马鱼尿液代谢物,通过在冰水浴中减压旋蒸浓缩至1ml;
7、步骤s5:尿样进行离心,设置转速为3500r/min,4min;用于去除样品中杂质;
8、步骤s6:将所用样品放置于-80℃冰箱进行保存,待用。
9、作为本专利技术的一种优选实施方式,斑马鱼分组实验设计是基于代谢组学研究方法,建立不同组别实验动物。其中要求组内斑马鱼实验环境一致,然后通过数据统计学分析(正交偏最小二乘法-判别分析(oplc-da)和主成分分析(pca)方法),考察组间斑马鱼尿液中代谢物差异,从而深入探究发病机理和治疗药物的作用机制。
10、作为本专利技术的一种优选实施方式,所述步骤s3中的收集时间为24h。
11、作为本专利技术的一种优选实施方式,所述步骤s3的实验过程中,保证代谢物在0℃条件下收集,用于减少水中内源性物质在常温下的分解。
12、本专利技术与现有技术相比具有以下有益效果:
13、1.使用此斑马鱼尿液收集方法可最大程度确保收集到尿液中的代谢物不因外界温度改变而被分解,保证实验的可重复性和一致性。
14、2.实验方案切实可行,该收集方法配合试验方案可同时复制多组斑马鱼尿液的采集,确保同一组别的一致性,保证实验数据具有统计学意义。
15、3.该斑马鱼尿液收集方法操作方便、成本低,可实现多组别同时收集。
16、面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细的描述。
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1.斑马鱼尿液代谢物收集方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述,斑马鱼尿液代谢物收集方法,其特征在于,所述斑马鱼分组实验设计,是基于代谢组学研究方法,以数量≥6条斑马鱼为一组,建立不同组别;要求同一组别中斑马鱼生存在共同的鱼缸中即确保温度、饮食、水质等实验环境相同;然后建立不同的斑马鱼组别,为下一步数据统计学分析奠定基础,考察组间鱼尿中代谢物差异,从而深入探究发病机理和治疗药物的作用机制。
3.根据权利要求1所述,斑马鱼尿液代谢物收集方法,其特征在于,所述步骤S3中的收集时间为24h。
4.根据权利要求1所述,斑马鱼尿液代谢物收集方法,其特征在于,所述步骤S3的实验过程中,保证代谢物在0℃条件下收集,目的减少水中内源性物质在常温下的分解。
【技术特征摘要】
1.斑马鱼尿液代谢物收集方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述,斑马鱼尿液代谢物收集方法,其特征在于,所述斑马鱼分组实验设计,是基于代谢组学研究方法,以数量≥6条斑马鱼为一组,建立不同组别;要求同一组别中斑马鱼生存在共同的鱼缸中即确保温度、饮食、水质等实验环境相同;然后建立不同的斑马鱼组别,为下一步数据统计学分析奠定基...
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