【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及单克隆抗体制备及免疫学检测，具体涉及一种特异性结合叶酸及其结合蛋白复合物的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
1、叶酸（folate）是一种水溶性维生素，被人体摄入后，在二氢叶酸还原酶的两次还原作用下，先后还原为二氢叶酸（dihydrofolate，dhf）和四氢叶酸（tetrahydrofolate，thf）。5-甲基四氢叶酸（5-methyltetrahydrofolate，5methf）为thf主要代谢物，在人体内含量占比约是82%~93%。叶酸（folate）参与体内一碳单位代谢，缺乏叶酸（folate）容易引起神经管缺陷、巨幼细胞性贫血、心血管疾病和肿瘤疾病等。
2、目前，叶酸的检测方法主要有微生物检测法（microbiological assay，ma）、叶酸结合蛋白（folate-binding protein，fbp）检测法、高效液相色谱（highperformanceliquid chromatography，hplc）法和id-lc-ms/ms法。这些方法均可对血清/血浆和红细胞中叶酸进行检测。临床上主要通过fbp法检测叶酸（folate），该方法检测成本低，但特异性较差，不同检测系统间存在较大差异，很容易造成结果的误判。
3、鉴于现有技术中存在上述问题，目前急需开发针对叶酸及其结合蛋白复合物的高特异性、高亲和力的单克隆抗体以满足免疫学检测的需求，以此突破传统竞争法的局限，实现夹心法检测叶酸（folate）。
技术实现思路
1、
2、为了实现上述目的，本专利技术经过大量的筛选获得了高特异性、高亲和力针对叶酸及其结合蛋白复合物的单克隆抗体或其抗原结合片段，其相关核酸及细胞产品，其制备方法和应用，以及基于其的免疫检测试剂，从而为叶酸（folate）的高特异性、高灵敏度免疫检测提供了基础。
3、具体地，本专利技术提供了如下技术方案：
4、第一方面，本专利技术提供了针对叶酸（folate）及其结合蛋白复合物的单克隆抗体或其抗原结合片段，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
5、（1）重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no. 1、seq id no. 2和seq idno. 3所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no.4、qms和seq id no. 5所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3；或，
6、（2）重链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq id no. 10、seq id no. 11和seqid no. 12所示的hcdr1、hcdr2和hcdr3；和轻链可变区，其具有氨基酸序列分别如seq idno. 13、aas和seq id no. 14所示的lcdr1、lcdr2和lcdr3。
7、在优选的具体实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
8、（1）重链可变区，其具有如seq id no.6所示的氨基酸序列；和轻链可变区，其具有如seq id no.7所示的氨基酸序列；或，
9、（2）重链可变区，其具有如seq id no.15所示的氨基酸序列；和轻链可变区，其具有如seq id no.16所示的氨基酸序列。进一步优选的实施方案中，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
10、（1）重链，其氨基酸序列如seq id no.8所示；轻链，其氨基酸序列如seq id no.9所示，或，
11、（2）重链，其氨基酸序列如seq id no.17所示；轻链，其氨基酸序列如seq idno.18所示。
12、在一些可行的实施方案中，所述单克隆抗体的抗原结合片段选自fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、互补决定区片段、单链抗体；所述单克隆抗体可为人抗体、嵌合抗体或双特异或多特异抗体。
13、第二方面，本专利技术提供了多核苷酸，所述多核苷酸编码如上述第一方面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。该多核苷酸不受限于其产生的方法，并且可以利用基因工程重组技术或化学合成方法获得。
14、第三方面，本专利技术提供了核酸构建体，其包含如上述第二方面所述的多核苷酸，以及，任选地，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
15、第四方面，本专利技术提供了一种重组载体，其包含如上述第二方面所述的多核苷酸，或者如上述第三方面所述的核酸构建体。
16、本专利技术的载体可以是克隆载体，也可以是表达载体，例如，可以是质粒，粘粒，噬菌体等。
17、在一些优选的实施方案中，所述重组载体为重组表达载体，优选为真核表达载体。
18、第五方面，本专利技术提供了一种转化的宿主细胞，其中转化有如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体或如上述第四方面所述的重组载体；
19、所述宿主细胞包括但不限于：原核细胞，例如大肠杆菌细胞；真核细胞，例如酵母细胞，昆虫细胞，植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞，例如小鼠细胞、人细胞等)。所述宿主细胞还可以是细胞系，例如293t细胞系。
20、优选地，所述宿主细胞为真核细胞，进一步优选为哺乳动物细胞。
21、第六方面，本专利技术提供了如上述第一方面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的重组载体和/或如上述第五方面所述的转化的宿主细胞在制备用于检测叶酸（folate）的检测试剂或试剂盒中的应用。
22、在可行的实施方案中，所述样品为受试者的生物学样品，优选为受试者的血清或血浆样品。
23、第七方面，本专利技术提供了选自如上述第一方面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的任意一种单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于检测叶酸（folate）的检测试剂或试剂盒中的应用。
24、优选地，所述一种单克隆抗体或其抗原结合片段选自：
25、（i）抗体1或其抗原结合片段；
26、（ii）抗体2或其抗原结合片段；
27、其中，抗体1或其抗原结合片段由上述第一方面中的任意第（1）项所定义，抗体2或其抗原结合片段由上述第一方面中的任意第（2）项所定义。
28、第八方面，本专利技术提供了一种检测叶酸（folate）的检测试剂或试剂盒，其包括如上述第一方面所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如上述第二方面所述的多核苷酸、如上述第三方面所述的核酸构建体、如上述第四方面所述的重组载体和/或如上述第五方面所述的转化的宿主细胞。
29、作为优选，所述检测试剂或试剂盒包含如上述第一本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抗叶酸及其结合蛋白复合物的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
4.根据权利要求1－3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv、dAb、互补决定区片段、单链抗体。
5.根据权利要求1－3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体为人抗体或嵌合抗体。
6.根据权利要求1－3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体为双特异或多特异抗体。
7.多核苷酸，其特征在于，其编码权利要求1－6任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
8.核酸构建体，其特征在于，其包含如权利要求7所述的多核苷酸，以及，与所述多核苷酸可操作地连
9.一种重组载体，其特征在于，其包含如权利要求7所述的多核苷酸，或者如权利要求8所述的核酸构建体。
10.一种转化的宿主细胞，其特征在于，其包含权利要求7所述的多核苷酸、如权利要求8所述的核酸构建体或如权利要求9所述的重组载体。
11.如权利要求7所述的多核苷酸、如权利要求8所述的核酸构建体、如权利要求9所述的重组载体和/或如权利要求10所述的转化的宿主细胞在制备用于检测叶酸的检测试剂或试剂盒中的应用。
12.如权利要求1－6任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于检测叶酸的检测试剂或试剂盒中的应用。
13.一种用于检测叶酸的检测试剂，其包含如权利要求1－6任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段、如权利要求7所述的多核苷酸、如权利要求8所述的核酸构建体、如权利要求9所述的重组载体和/或如权利要求10所述的转化的宿主细胞。
14.根据权利要求13所述的检测试剂，其特征在于，所述试剂为时间分辨荧光免疫层析试剂，以权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段中的任意一种单克隆抗体或其抗原结合片段和叶酸结合蛋白分别作为捕获物和检测物。
15.一种制备如权利要求1－6任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括：在适合于所述单克隆抗体或其抗原结合片段表达的条件下，使权利要求10所述的转化的宿主细胞表达所述单克隆抗体或其抗原结合片段，并从所述宿主细胞的培养物中回收所表达的单克隆抗体或其抗原结合片段。
...【技术特征摘要】
1.抗叶酸及其结合蛋白复合物的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段包含：
4.根据权利要求1－3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体或其抗原结合片段选自fab、fab'、f(ab')2、fd、fv、dab、互补决定区片段、单链抗体。
5.根据权利要求1－3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体为人抗体或嵌合抗体。
6.根据权利要求1－3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述单克隆抗体为双特异或多特异抗体。
7.多核苷酸，其特征在于，其编码权利要求1－6任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段。
8.核酸构建体，其特征在于，其包含如权利要求7所述的多核苷酸，以及，与所述多核苷酸可操作地连接的至少一个表达调控元件。
9.一种重组载体，其特征在于，其包含如权利要求7所述的多核苷酸，或者如权利要求8所述的核酸构建体。
10.一种转化的宿主...
【专利技术属性】
技术研发人员：董万春，陶言梦，高歌，江欣月，戴瞻，林飞，
申请(专利权)人：南京欧凯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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