【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，尤其涉及一种提高目的基因在异源宿主中的表达的组件及方法。
技术介绍
1、σ因子是转录调控因子的其中一种，它可以识别特定的启动子序列，与核心酶结合后形成全酶使rnap结构发生改变，与识别的启动子区域结合形成转录起始复合物，从而起始转录。σ因子可以全局性或者特异性地增强相应次级代谢产物生物合成基因簇前启动子的转录，使用同源σ因子策略在微生物次级代谢中进行调控，能有效提高次级代谢产物的生产效益，进而促进这些产物的推广和应用。
2、为了提高目的产物产量，代谢工程中常用的手段是利用强启动子过量表达合成代谢途径中关键酶的编码基因，但这些编码基因异源表达时会出现启动子不适配宿主的情况，导致表达量下降。
3、如申请公布号为cn117535327a的专利公开了一种以温控元件改变中心碳流的高产d-泛酸载体及其应用，其通过以ptrc99a为通用骨架、用烯酰acp还原酶基因fabv替换氨苄青霉素抗生素筛选标记、融合表达由四环素诱导调节元件plteto-1驱动的异源d-泛解酸途径基因alss、ilvd、panb、panc基因，使d-泛解酸途径基因的表达增强。但该温控元件只能用在宿主细胞大肠杆菌w3110、dh5α或bl21中，其应用受到了很大的限制。有研究表明，目的基因在一些宿主菌中表达量下降的原因可能是源自目的基因所连接启动子不适配宿主菌的问题。
技术实现思路
1、基因异源表达时会出现启动子不适配宿主菌的问题。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种提高目
2、本专利技术的具体技术方案为：
3、一方面，本专利技术提供了一种提高目的基因在异源宿主中的表达的组件。所述组件包括σ因子和启动子；
4、所述启动子与目的基因连接，使目的基因由所述启动子启动表达；
5、所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.22、seq id no.26、seq id no.28任一个所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.30～seq id no.38任一个所示。
6、σ因子可以识别特定的启动子序列，与核心酶结合后形成全酶使rnap结构发生改变，与识别的启动子区域结合形成转录起始复合物，从而起始转录。
7、基因异源表达时会出现启动子不适配宿主菌的问题。为了解决此问题，本专利技术通过从须糖多孢菌中筛选得到一种组件，包括σ因子和启动子，目的基因由所述启动子启动表达，该组件导入异源宿主时，可以使得目的基因的表达得以提高。其中，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.22、seq id no.26、seq id no.28任一个所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.30～seq id no.38任一个所示。
8、作为上述组件的优选，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.22所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.31所示；
9、或者，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.22所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.32所示；
10、或者，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.26所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.32所示；
11、或者，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.28所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.32所示。
12、当σ因子的核苷酸序列如seq id no.22所示、启动子的核苷酸序列如seq idno.31所示时，或者，当σ因子的核苷酸序列如seq id no.22所示、启动子的核苷酸序列如seq id no.32所示时，或者，当σ因子的核苷酸序列如seq id no.26所示、启动子的核苷酸序列如seq id no.32所示时，再或者，当σ因子的核苷酸序列如seq id no.28所示、启动子的核苷酸序列如seq id no.32所示时，目的基因的表达量均表现优异。同时，该组件导入不同的异源宿主，均能使目的基因得到较高的表达量。目的基因可以选自代谢工程中常见的代谢途径中关键酶的编码基因，如丁烯基多杀菌素基因簇，本专利技术提供的上述组件可以应用于丁烯基多杀菌素基因簇在异源宿主中的高效表达，例如丁烯基多杀菌素pks的异源宿主高效表达。
13、另一方面，本专利技术提供了一种提高目的基因在异源宿主中的表达的方法，包括以下步骤：
14、步骤s1：将目的基因与启动子连接后导入异源宿主，使得在异源宿主中目的基因由所述启动子启动表达；
15、所述启动子的核苷酸序列如seq id no.30～seq id no.38任一个所示；
16、步骤s2：将σ因子导入异源宿主进行表达；
17、所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.22、seq id no.26、seq id no.28任一个所示。
18、作为上述方法的优选，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.22所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.31所示；
19、或者，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.22所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.32所示；
20、或者，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.26所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.32所示；
21、或者，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.28所示，所述启动子的核苷酸序列如seq id no.32所示。
22、作为上述方法的优选，步骤s2中，将σ因子导入异源宿主中进行强化表达。
23、进一步优选，步骤s2中，将σ因子与强启动子连接后导入异源宿主中进行强化表达。强启动子可以是市面上常见的强启动子，如lac启动子、trp启动子、tac启动子、ipl启动子、t7噬菌体启动子等，能增强σ因子的表达即可。
24、另一种优选，步骤s2中，增加σ因子的拷贝数，并导入异源宿主中。
25、作为上述方法的优选，所述异源宿主为大肠杆菌bl21、大肠杆菌jm109和大肠杆菌bapi。
26、与现有技术相比，本专利技术具有以下技术效果：
27、基因异源表达时会出现启动子不适配宿主菌的问题。为了解决此问题，本专利技术通过从须糖多孢菌中筛选得到一种组件，包括σ因子和启动子，目的基因由所述启动子启动表达，该组件导入异源宿主时，可以使得目的基因的表达得以提高。其中，所述σ因子的核苷酸序列如seq id no.22、seq id no.26、seq id no.28任一个所示，启动子的核苷酸序列如seq id no.30～seq id no.38任一个所示。
28、进一步地，本专利技术提供了一种提高目的基因在异源宿主中的表达的组件的优选方案，所述组件包括σ因子和启动子，目的基因由所述启动子启动表达，σ因子的核苷酸序列如seq id no.22所示、启动子本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种提高目的基因在异源宿主中的表达的组件，其特征在于：包括σ因子和启动子；
2.如权利要求1所述的一种提高目的基因在异源宿主中的表达的组件，其特征在于：
3.一种提高目的基因在异源宿主中的表达的方法，其特征在于：包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤S2中，将σ因子导入异源宿主中进行强化表达。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤S2中，将σ因子与强启动子连接后导入异源宿主中进行强化表达。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤S2中，增加σ因子的拷贝数，并导入异源宿主中。
8.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述异源宿主为大肠杆菌BL21、大肠杆菌JM109和大肠杆菌BAPI。
9.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述目的基因为丁烯基多杀菌素PKS。
【技术特征摘要】
1.一种提高目的基因在异源宿主中的表达的组件，其特征在于：包括σ因子和启动子；
2.如权利要求1所述的一种提高目的基因在异源宿主中的表达的组件，其特征在于：
3.一种提高目的基因在异源宿主中的表达的方法，其特征在于：包括以下步骤：
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：
5.如权利要求3所述的方法，其特征在于：步骤s2中，将σ因子导入异源宿主中进行强化表达。
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