【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、当前的免疫疗法进展在血液恶性肿瘤治疗方面具有革命性，fda批准靶向cd19的嵌合抗原受体t细胞(car-t细胞)用于治疗急性成淋巴细胞白血病和弥漫性大b细胞淋巴瘤就证明了这一点。然而，癌症治疗最大的尚未满足的负担是实体肿瘤。由于包括缺乏肿瘤特异性抗原、克服治疗耐药性障碍、肿瘤异质性、扩大和持久性差以及由致密的免疫抑制性肿瘤微环境(tme)引起的t细胞浸润的外源性功能障碍和物理屏障在内的诸多挑战，car-t细胞在对抗实体肿瘤方面缺乏功效。一个主要限制因素是过继转移的t细胞在体内的扩大和持久性差，必须进行淋巴细胞耗竭调理化疗(lymphodepleting conditioningchemotherapy)——这是一种限制患者入选资格的毒性方案。即使是那些确实扩大并持续存在的t细胞也会发生终末分化和功能障碍。具有干细胞样表型的t细胞可克服这些限制因素并在小鼠模型和人中表现出优异的抗肿瘤活性，但是选择或扩大干细胞样t细胞的治疗操纵限于细胞制造阶段且无法在体内进行。本领域需要克服这些障碍和挑战的新型基于细胞的疗法。本专利技术解决了这一需求。
技术实现思路
1、在一些方面中，本专利技术提供嵌合抗原受体(car)，其包括肿瘤抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包括白细胞介素-9受体α(il9ra)的胞内信号传导结构域。
2、在一些实施方式中，所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(afp)/hla-a2、axl、b7-h3、bcma、ca-1x、cd2、cd3、
3、在一些实施方式中，所述肿瘤抗原选自间皮素、gd2、her2、tnmuc1、cd70、pmsa和egfrviii。
4、在一些实施方式中，所述肿瘤抗原结合结构域选自全长抗体或其抗原结合片段、单特异性抗体、双特异性抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv、单链可变片段(scfv)、线性抗体、单结构域抗体(sdab)和抗体模拟物(如经设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、亲和体、单体(adnectin)、affilin、亲和性多聚体、affitin、α体、高亲合性多聚体、kunitz结构域肽、anticalin和syntherin)。
5、在一些实施方式中，所述肿瘤抗原结合结构域是单链可变片段(scfv)。
6、在一些实施方式中，所述肿瘤抗原结合结构域选自：
7、(a)抗间皮素scfv，其包括与选自seq id no:49和seq id no:65的序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列；
8、(b)抗gd2 scfv，其包括与seq id no:108具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列；
9、(c)抗her2 scfv，其包括与seq id no:110或seq id no:112具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列；
10、(d)抗tnmuc1 scfv，其包括与seq id no:114具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列；
11、(e)抗cd70 scfv，其包括与seq id no:116具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列；
12、(f)抗pmsa scfv，其包括与seq id no:120具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列；和
13、(g)抗egfrviii scfv，其包括与seq id no:122具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列。
14、在一些实施方式中，所述car的胞内结构域还包括选自下列的蛋白质的共刺激结构域：tnfr超家族蛋白质、cd28、4-1bb(cd137)、ox40(cd134)、pd-1、cd7、light、cd83l、dap10、dap12、cd27、cd2、cd5、icam-1、lfa-1、lck、tnfr-i、tnfr-ii、fas、cd30、cd40、icos、nkg本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.嵌合抗原受体(CAR)，其包括肿瘤抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包括白细胞介素-9受体α(IL9Ra)的胞内信号传导结构域。
2.根据权利要求1所述的CAR，其中所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(AFP)/HLA-A2、AXL、B7-H3、BCMA、CA-1X、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD44v6、CD70、CD79a、CD79b、CD80、CD86、CD117、CD123、CD133、CD147、CD171、CD276、CEA、密蛋白18.2、c-Met、DLL3、DR5、EGFR、EGFRvIII、EpCAM、EphA2、FAP、叶酸受体α(FRa)/叶酸结合蛋白(FBP)、GD-2、糖脂F77、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2(GPC2)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、HER2、HLA-A2、ICAM1、IL3Ra、IL13Ra2、LAGE-1、路易斯Y、LMP1(EBV)、MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A4、Melan A、间皮素、MG7(糖基化CE
3.根据权利要求1或权利要求2所述的CAR，其中所述肿瘤抗原选自间皮素、GD2、HER2、TnMuc1、CD70、PMSA和EGFRvIII。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的CAR，其中所述肿瘤抗原结合结构域选自全长抗体或其抗原结合片段、单特异性抗体、双特异性抗体、Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、单链可变片段(scFv)、线性抗体、单结构域抗体(sdAb)和抗体模拟物(如经设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)、亲和体、单体(adnectin)、affilin、亲和性多聚体、affitin、α体、高亲合性多聚体、Kunitz结构域肽、anticalin和syntherin)。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的CAR，其中所述肿瘤抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的CAR，其中所述肿瘤抗原结合结构域选自：
7.根据权利要求1-6中任一项所述的CAR，其中所述CAR的胞内结构域还包括选自下列的蛋白质的共刺激结构域：TNFR超家族蛋白质、CD28、4-1BB(CD137)、OX40(CD134)、PD-1、CD7、LIGHT、CD83L、DAP10、DAP12、CD27、CD2、CD5、ICAM-1、LFA-1、Lck、TNFR-I、TNFR-II、Fas、CD30、CD40、ICOS、NKG2C和B7-H3(CD276)，或其变体，或源自杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)的胞内结构域。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的CAR，其中所述CAR的胞内结构域还包括选自下列的蛋白质的胞内信号传导结构域：CD3ζ链(CD3ζ)、FcγRIII、FcsRI、Fc受体的胞质尾、携带基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)的胞质受体、TCRζ、Fcγ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d，或其变体。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的CAR，其中所述CAR的胞内结构域还包括CD28的共刺激结构域、4-1BB的共刺激结构域、CD3ζ的胞内信号传导结构域或其任意组合。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的CAR，其还包括铰链结构域。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的CAR，其中所述CAR包括：
12.根据权利要求1-11中任一项所述的CAR，其中所述CAR包括与选自SEQ ID NO:81、83、85和87的序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的CAR，其中所述CAR由包括与选自SEQ ID NO:82、84、86和88的序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.嵌合抗原受体(car)，其包括肿瘤抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包括白细胞介素-9受体α(il9ra)的胞内信号传导结构域。
2.根据权利要求1所述的car，其中所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(afp)/hla-a2、axl、b7-h3、bcma、ca-1x、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd38、cd44v6、cd70、cd79a、cd79b、cd80、cd86、cd117、cd123、cd133、cd147、cd171、cd276、cea、密蛋白18.2、c-met、dll3、dr5、egfr、egfrviii、epcam、epha2、fap、叶酸受体α(fra)/叶酸结合蛋白(fbp)、gd-2、糖脂f77、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2(gpc2)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、her2、hla-a2、icam1、il3ra、il13ra2、lage-1、路易斯y、lmp1(ebv)、mage-a1、mage-a3、mage-a4、melan a、间皮素、mg7(糖基化cea)、mmp、muc1、柄蛋白4/fap、nkg2d-配体(mic-a、mic-b和ulbp 1至6)、ny-eso-1、p16、pd-l1、psca、psma、ror1、ror2、tim-3、tm4sf1、tnmuc1、vegfr2及其任意组合。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的car，其中所述肿瘤抗原选自间皮素、gd2、her2、tnmuc1、cd70、pmsa和egfrviii。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的car，其中所述肿瘤抗原结合结构域选自全长抗体或其抗原结合片段、单特异性抗体、双特异性抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv、单链可变片段(scfv)、线性抗体、单结构域抗体(sdab)和抗体模拟物(如经设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、亲和体、单体(adnectin)、affilin、亲和性多聚体、affitin、α体、高亲合性多聚体、kunitz结构域肽、anticalin和syntherin)。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的car，其中所述肿瘤抗原结合结构域是单链可变片段(scfv)。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的car，其中所述肿瘤抗原结合结构域选自：
7.根据权利要求1-6中任一项所述的car，其中所述car的胞内结构域还包括选自下列的蛋白质的共刺激结构域：tnfr超家族蛋白质、cd28、4-1bb(cd137)、ox40(cd134)、pd-1、cd7、light、cd83l、dap10、dap12、cd27、cd2、cd5、icam-1、lfa-1、lck、tnfr-i、tnfr-ii、fas、cd30、cd40、icos、nkg2c和b7-h3(cd276)，或其变体，或源自杀伤免疫球蛋白样受体(kir)的胞内结构域。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的car，其中所述car的胞内结构域还包括选自下列的蛋白质的胞内信号传导结构域：cd3ζ链(cd3ζ)、fcγriii、fcsri、fc受体的胞质尾、携带基于免疫受体酪氨酸的活化基序(itam)的胞质受体、tcrζ、fcγ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b和cd66d，或其变体。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的car，其中所述car的胞内结构域还包括cd28的共刺激结构域、4-1bb的共刺激结构域、cd3ζ的胞内信号传导结构域或其任意组合。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的car，其还包括铰链结构域。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的car，其中所述car包括：
12.根据权利要求1-11中任一项所述的car，其中所述car包括与选自seq id no:81、83、85和87的序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的car，其中所述car由包括与选自seq id no:82、84、86和88的序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的核苷酸序列的核酸编码。
14.分离的核酸，其包括编码嵌合抗原受体(car)的核苷酸序列，其中所述car包括肿瘤抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包括白细胞介素-9受体α(il9ra)的胞内信号传导结构域。
15.根据权利要求14所述的分离的核酸，其中所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(afp)/hla-a2、axl、b7-h3、bcma、ca-1x、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd38、cd44v6、cd70、cd79a、cd79b、cd80、cd86、cd117、cd123、cd133、cd147、cd171、cd276、cea、密蛋白18.2、c-met、dll3、dr5、egfr、egfrviii、epcam、epha2、fap、叶酸受体α(fra)/叶酸结合蛋白(fbp)、gd-2、糖脂f77、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2(gpc2)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(gpc3)、her2、hla-a2、icam1、il3ra、il13ra2、lage-1、路易斯y、lmp1(ebv)、mage-a1、mage-a3、mage-a4、melan a、间皮素、mg7(糖基化cea)、mmp、muc1、柄蛋白4/fap、nkg2d-配体(mic-a、mic-b和ulbp 1至6)、ny-eso-1、p16、pd-l1、psca、psma、ror1、ror2、tim-3、tm4sf1、tnmuc1、vegfr2及其任意组合。
16.根据权利要求14或权利要求15所述的分离的核酸，其中所述肿瘤抗原选自间皮素、gd2、her2、tnmuc1、cd70、pmsa和egfrviii。
17.根据权利要求14-16中任一项所述的分离的核酸，其中所述肿瘤抗原结合结构域选自全长抗体或其抗原结合片段、单特异性抗体、双特异性抗体、fab、fab'、f(ab')2、fv、单链可变片段(scfv)、线性抗体、单结构域抗体(sdab)和抗体模拟物(如经设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、亲和体、单体(adnectin)、affilin、亲和性多聚体、affitin、α体、高亲合性多聚体、kunitz结构域肽、anticalin和syntherin)。
18.根据权利要求14-17中任一项所述的分离的核酸，其中所述肿瘤抗原结合结构域是单链可变片段(scfv)。
19.根据权利要求14-18中任一项所述的分离的核酸，其中所述肿瘤抗原结合结构域选自：
20.根据权利要求14-19中任一项所述的分离的核酸，其中所述car的胞内结构域还包括选自下列的蛋白质的共刺激结构域：tnfr超家族蛋白质、cd28、4-1bb(cd137)、ox40(cd134)、pd-1、cd7、light、cd83l、dap10、dap12、cd27、cd2、cd5、icam-1、lfa-1、lck、tnfr-i、tnfr-ii、fas、cd30、cd40、icos、nkg2c和b7-h3(cd276)，或其变体，或源自杀伤免疫球蛋白样受体(kir)的胞内结构域。
21.根据权利要求14-20中任一项所述的分离的核酸，其中所述car的胞内结构域还包括选自下列的蛋白质的胞内信号传导结构域：cd3ζ链(cd3ζ)、fcγriii、fcsri、fc受体的胞质尾、携带基于免疫受体酪氨酸的活化基序(itam)的胞质受体、tcrζ、fcγ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b和cd66d，或其变体。
22.根据权利要求14-21中任一项所述的分离的核酸，其中所述car的胞内结构域还包括cd28的共刺激结构域、4-1bb的共刺激结构域、cd3ζ的胞内信号传导结构域或其任意组合。
23.根据权利要求14-22中任一项所述的分离的核酸，其还包括铰链结构域。
24.根据权利要求14-23中任一项所述的分离的核酸，其中所述car包括：
25.根据权利要求14-24中任一项所述的分离的核酸，其中所述car包括与选自seq idno:81、83、85和87的序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的氨基酸序列。
26.根据权利要求14-25中任一项所述的分离的核酸，其中所述car由包括与选自seqid no:82、84、86和88的序列具有至少80％、至少81％、至少82％、至少83％、至少84％、至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少100％序列同一性的核苷酸序列的核酸编码。
27.载体，其包括根据权利要求14-26中任一项所述的分离的核酸。
28.根据权利要求27所述的载体，其中所述载体是逆转录病毒载体或慢病毒载体。
29.修饰细胞，其中所述细胞是免疫细胞或其前体细胞，并且其中所述细胞经工程改造以表达嵌合抗原受体(car)，所述car包括肿瘤抗原结合结构域、跨膜结构域和胞内结构域，所述胞内结构域包括白细胞介素-9受体α(il9ra)的胞内信号传导结构域。
30.根据权利要求29所述的修饰细胞，其中所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(afp)/hla-a2、axl、b7-h3、bcma、ca-1x、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd38、cd44v6、cd70、cd79a、cd79b、cd80、cd86...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·西乌拉，C·H·琼，K·C·加西亚，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：
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