【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于免疫细胞活性改善的组合物、制备具有改善活性的免疫细胞的方法、具有改善活性的免疫细胞、及其用途。
技术介绍
1、细胞治疗剂是诱导治疗功效，如使用活细胞再生以恢复受损或患病细胞、组织和个体的药物，其中，免疫调节细胞治疗剂是用于通过使用免疫细胞(如树突细胞、自然杀伤细胞(nk细胞)、t细胞等)控制体内免疫应答来治疗疾病的药物。
2、所述免疫调节细胞治疗剂通过用各种抗体和细胞因子活化从患者分离的各种免疫细胞如外周血单核细胞(pbmc)、t细胞、和nk细胞，体外增殖这些免疫细胞，然后将增殖的免疫细胞注射回患者体内，或将其中引入了基因如t细胞受体(tcr)或嵌合抗原受体(car)的免疫细胞注射回患者体内来使用。
3、car是人工嵌合蛋白，其中识别癌细胞上的细胞表面抗原的单链抗体与诱导t细胞活化的信号转导结构域融合。通过将编码car的基因导入不具有肿瘤反应性的正常外周血t细胞(外周血t淋巴细胞)，可以制备大量表达car的car表达t细胞(以下称为“car-t细胞”)。这些car-t细胞具有肿瘤反应性，这使得可以诱导癌细胞损伤而不依赖于与主要组织相容性基因复合物(mhc)的相互作用。
4、car-t细胞治疗剂已经引起了注意，因为它在临床试验中发挥了显著的作用，特别是对于血液肿瘤。即，在使用识别cd19的抗体(其为b淋巴细胞血液肿瘤抗原)的car-t细胞治疗的情况下，在靶向对所有现有治疗都无应答的急性淋巴细胞白血病患者的早期临床试验中，90％的患者(30名中的27名)在一个月内实现完全缓解，并
5、目前，car-t细胞治疗的成功病例限于cd19阳性急性白血病，并且在实体瘤的情况下，据报道治疗效率低。例如，在淋巴结中car-t细胞暴露于大量恶性b细胞的血液肿瘤中，或在高度免疫原性肿瘤如黑素瘤的治疗期间，引起强的活化谱和强的细胞毒性作用，相反，在实体瘤的car-t治疗期间，由有限暴露于肿瘤抗原产生的弱活化t细胞引起不稳定的免疫应答、嗜睡性克隆扩张和过早的克隆收缩。
6、已经采用了各种方法来克服克隆收缩和弱t细胞活化的这些问题，并取得了中等的成功。例如，制备第二代car-t细胞，其中cd28信号传导分子被加入到car的胞内部分，以克服克隆收缩，促进快速增殖，和克服细胞因子缺陷。然而，第二代car-t细胞在治疗实体瘤中不太有效。因此，进行进一步修饰以制备具有添加的共刺激分子如41bb和/或ox40的“第三代”car。此外，患者通常用il-2治疗以保持转移的t细胞存活和功能，导致不受治疗性t细胞控制的细胞因子的产生。尽管这些方法已经能够在实体瘤的治疗中在一定程度上增强t细胞活化，但是仍然需要通过完全克服克隆收缩和促进t细胞的快速增殖和活化来进一步改善t细胞的功能。
7、sirna、shrna等抑制细胞内的基因表达的rna干扰(rnai)机制在控制与癌症和传染病相关的基因方面作为治疗剂具有很高的潜力，并且使用rnai现象的基因治疗在治疗不可治愈的癌症疾病中受到新的关注。由于rnai具有高序列特异性，因此rnai系统可特异性敲低一种类型的转录物，且不影响具有类似序列的其它mrna。这些特征使得rnai机制在基因表达抑制、基因功能研究和药物靶标验证中具有潜力和价值。此外，rnai机制可用于治疗(1)由基因的过表达或错误表达引起的疾病；和(2)相关疾病，包含由基因突变引起的疾病。
技术实现思路
1、技术问题
2、本专利技术的目的是提供一种用于免疫细胞活性改善的组合物和一种制备具有改善活性的免疫细胞的方法。
3、本专利技术的另一个目的是提供用于制备具有改善活性的免疫细胞的重组载体。
4、本专利技术的再一个目的是提供具有改善活性的免疫细胞。
5、本专利技术的再一个目的是提供一种用于治疗癌症的药物组合物，其含有具有改善活性的免疫细胞。
6、技术方案
7、为了实现上述目的，本专利技术的一个方面提供了一种用于免疫细胞活性改善的组合物，其包含tet甲基胞嘧啶双加氧酶2(tet2)抑制剂。
8、本专利技术的另一方面提供了制备具有改善活性的免疫细胞的方法，所述方法包含将tet2抑制剂注入免疫细胞。
9、本专利技术的再一方面提供了包含编码tet2抑制剂的核酸的重组载体。
10、本专利技术的再一方面提供了用重组载体转导的具有改善活性的免疫细胞。
11、本专利技术的再一方面提供了一种用于治疗癌症的药物组合物，其包含具有改善活性的免疫细胞作为活性成分。
12、有益效果
13、在本专利技术中，选择了有效敲低tet2的靶序列和shrna，其具有约6,000bp的长cdna，并用于制备tet2被敲低的免疫细胞。与tet2未被敲低或tet2被其它类型的shrna敲低的免疫细胞相比，tet2被本专利技术的shrna敲低的免疫细胞表现出改善的肿瘤治疗效率，并因此可以有效地用于癌症治疗的免疫细胞治疗。
14、本专利技术的效果不限于上述效果，并且本领域技术人员从以下描述中可以明显地理解未提及的其他效果。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种用于免疫细胞活性改善的组合物，包括四甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)抑制剂，
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述活性改善是选自由存活率改善、增殖率改善、和细胞因子表达增加组成的组中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所述TET2抑制剂包括miRNA、siRNA、shRNA、或反义寡核苷酸。
4.如权利要求3所述的组合物，其中编码所述shRNA的核酸具有SEQ ID NO:10或SEQ IDNO:18的核苷酸序列。
5.如权利要求1所述的组合物，其中所述免疫细胞是表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞。
6.如权利要求1所述的组合物，其中所述免疫细胞是T细胞或NK细胞。
7.一种制备具有改善活性的免疫细胞的方法，所述方法包括将TET2抑制剂注入免疫细胞，
8.如权利要求7所述的方法，其中所述注射通过选自由电穿孔、脂质体、质粒、病毒载体、和纳米颗粒组成的组中的一种或多种方法进行。
9.一种重组载体，其包括编码TET2抑制剂的核酸。
10.如权利要求9所述
11.如权利要求9所述的重组载体，其还包括编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸。
12.如权利要求9所述的重组载体，其中所述编码TET2抑制剂的核酸具有SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:18的核苷酸序列。
13.一种具有改善活性的免疫细胞，其中引入了如权利要求9所述的重组载体。
14.如权利要求13所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞另外含有嵌合抗原受体(CAR)。
15.如权利要求14所述的免疫细胞，其中所述嵌合抗原受体含有特异性结合至CD19的抗体或其抗原结合片段。
16.如权利要求13所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞是T细胞或NK细胞。
17.如权利要求16所述的免疫细胞，其中所述T细胞是辅助T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞、调节性T细胞、或自然杀伤T细胞。
18.如权利要求13所述的免疫细胞，其中所述活性改善是选自由存活率改善、增殖率改善、和细胞因子表达增加组成的组中的一种或多种。
19.一种用于治疗癌症的药物组合物，其包括如权利要求13至18中任一所述的免疫细胞作为活性成分。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于免疫细胞活性改善的组合物，包括四甲基胞嘧啶双加氧酶2(tet2)抑制剂，
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述活性改善是选自由存活率改善、增殖率改善、和细胞因子表达增加组成的组中的一种或多种。
3.如权利要求1所述的组合物，其中所述tet2抑制剂包括mirna、sirna、shrna、或反义寡核苷酸。
4.如权利要求3所述的组合物，其中编码所述shrna的核酸具有seq id no:10或seq idno:18的核苷酸序列。
5.如权利要求1所述的组合物，其中所述免疫细胞是表达嵌合抗原受体(car)的免疫细胞。
6.如权利要求1所述的组合物，其中所述免疫细胞是t细胞或nk细胞。
7.一种制备具有改善活性的免疫细胞的方法，所述方法包括将tet2抑制剂注入免疫细胞，
8.如权利要求7所述的方法，其中所述注射通过选自由电穿孔、脂质体、质粒、病毒载体、和纳米颗粒组成的组中的一种或多种方法进行。
9.一种重组载体，其包括编码tet2抑制剂的核酸。
10.如权利要求9所述的重组载体，其中所述重组载体是选自由逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、腺伴随病毒、...
【专利技术属性】
技术研发人员：朴永光，朴志勋，金泳潾，崔祥云，李兴璟，
申请(专利权)人：韩国化学研究院，
类型：发明
国别省市：
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