【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于活性肽制备领域，具体涉及一种纳豆低聚肽的制备方法及其在溶栓降压中的应用。
技术介绍
1、血栓类疾病作为典型的心血管疾病严重威胁着人类的生命健康，具有高发病率、高致残率、高死亡率等特点，其发病率和死亡率居各类疾病前列，不仅给患者带来极大痛苦，也给相应的家庭带来诸多影响。同时包括血栓在内的一系列的心血管疾病很可能由持续的高血压(hypertension)引发。目前临床上已经有多种用于溶栓治疗的溶栓剂，如链激酶、尿激酶、葡激酶、单链尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂等。这些溶栓剂具有较高的溶栓特异性，但同时易引发过敏反应及大出血等。
2、大量研究表明纳豆具有防止骨质疏松、促进凝血、降低血压、改善血糖等医疗保健功效。纳豆之所以有良好的保健功效，与其在生产过程中大豆基本成分的改变有密切关系，大豆中的蛋白质、脂肪、淀粉、异黄酮等在纳豆芽孢杆菌的作用下会发生复杂的生化反应，在保留原有活性成分的同时会产生新的活性物质，如纳豆激酶(nattokinase，nk)、抗氧化肽和抗菌肽等。相关研究显示纳豆激酶具有一定的抗血小板聚集、体外溶解血栓、降血压、降血脂等作用。其溶栓机理包括纳豆激酶通过直接水解纤维蛋白和纤溶酶底物来溶解血凝块。它将内源性的激酶转化为尿激酶，还降解纤溶酶原激活物抑制剂，升高组织纤溶酶原激活物的水平，从而使血栓溶解。
3、然而对纳豆激酶以外纳豆成分，尤其是活性肽类成分的研究尚较为欠缺。yahuisong通过发酵纳豆发现了其中含有较高ace抑制作用的多肽(rbps)，对其性质进行测定发现，rbps能显著
技术实现思路
1、为了解决获取功能性低聚肽的问题，并进一步解决获取具有抗血栓作用的纳豆来源的多聚肽的问题，在第一方面，根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，包括
2、生物活性肽数据库中检索并确定与生物对象的功能性相关的肽的特性，所述特性包括分子量分布、n端氨基酸残基种类、c端氨基酸残基种类以及净电荷；
3、将生物对象制备为肽的溶液，分别统计肽的溶液中的各肽特定n端氨基酸的前位氨基酸的种类及数量；
4、将其中全部或部分特定n端氨基酸及其前位氨基酸的肽键和/或c端氨基酸羧基端肽键为酶切点，使用复合蛋白酶对酶切位点切分；
5、将切分后的肽的溶液过滤，收集分子量符合所述特性中的分子量分布的肽的溶液；
6、将所述符合所述特性中的分子量分布的肽的溶液分离纯化，收集符合所述特性中净电荷的肽的溶液，得所述低聚肽。
7、在第二方面，根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，包括
8、生物活性肽数据库中检索并确定与纳豆抗血栓功能相关肽的特性，所确定的特性的信息包括分子量低于2000da，n端氨基酸残基种类为甘氨酸g，c端氨基酸残基种类为赖氨酸k或精氨酸r，净电荷为±2；
9、制备纳豆的肽的溶液，分别统计所述肽的溶液中的各肽位于甘氨酸g前位的氨基酸残基种类和数量以及位于精氨酸r前位的氨基酸残基种类和数量；
10、根据统计数量排序，依据排序将其中的酪氨酸-甘氨酸肽键、苯丙氨酸-甘氨酸肽键、酪氨酸-精氨酸肽键、赖氨酸羧基端肽键以及精氨酸羧基端肽键作为酶切位点，使用复合蛋白酶对酶切位点切分，所述复合蛋白酶由胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶组成，其中，胰蛋白酶：胰凝乳蛋白酶＝1:(1-3)，酶解温度：37-45℃，酶解ph：7.5-8.5，酶解时间：3-6h；
11、将切分后的肽的溶液过滤，收集分子量低于2000da的肽的溶液；
12、将分子量低于2000da的肽的溶液分离纯化，收集净电荷±2的肽的溶液，得第一低聚肽。
13、根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，还包括将所述净电荷±2的肽的溶液与纳豆激酶组分的溶液混合得第二低聚肽，其中，
14、制备所述纳豆激酶组分的溶液，包括：
15、将纳豆粉溶液通过分子量29000da的超滤膜，得第一透过液；
16、将所述第一透过液通过分子量26000da的超滤膜，得第二透过液和第二截流液；
17、其中，所述第二截流液是所述纳豆激酶组分的溶液；
18、根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，所述纳豆由大豆制备。
19、根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，还包括将第一低聚肽冷冻干燥，得纳豆低聚肽粉。
20、根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，还包括将第二低聚肽冷冻干燥，得纳豆低聚肽粉。
21、根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，其中，制备所述纳豆的小肽溶液，包括向所述第一透过液，所述第二截流液中加入消化酶，得所述纳豆的小肽溶液。
22、根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，所述消化酶为胰蛋白酶。
23、根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，其中，将切分后的肽的溶液过滤的步骤，包括将切分后的肽的溶液通过分子量2000da的纳滤膜过滤，其中，所述纳滤膜的透过液是低于2000da的肽的溶液；
24、其中，将分子量低于2000da的肽的溶液分离纯化的步骤，包括将分子量低于2000da的肽的溶液通过离子交换色谱分离纯化。
25、根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，所述离子交换色谱包括强阳离子交换柱。
26、根据本申请一些实施例中的低聚肽的制备方法，所述离子交换色谱包括spsepharose high performan本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种低聚肽的制备方法，其特征在于，包括
2.一种低聚肽的制备方法，其特征在于，包括
3.根据权利要求2所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，还包括将所述净电荷±2的肽的溶液与纳豆激酶组分的溶液混合得第二低聚肽，其中，
4.根据权利要求3所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，其中，制备所述纳豆的小肽溶液，包括向所述第一透过液，所述第二截流液中加入消化酶，得所述纳豆的小肽溶液；
5.根据权利要求2所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求5所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，所述离子交换色谱包括强阳离子交换柱。
7.根据权利要求6所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，所述离子交换色谱包括SPSepharose High Performance强阳离子交换柱，上样后，以20mmol/L PB(pH 6.0)平衡强阳离子交换柱，以0-40min：0-1M NaCl浓度梯度进行洗脱，收集时间11-19min的洗脱液，得所述净电荷±2的肽的溶液。
8.根据权利要求2所述的的低聚肽的制备方法
9.一种权利要求1-8中任一项所述的方法制备的低聚肽。
10.一种权利要求9所述低聚肽在制备溶栓药物中的用途或者在制备治疗降压药物中的用途或者在制备同步溶栓和降压的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种低聚肽的制备方法，其特征在于，包括
2.一种低聚肽的制备方法，其特征在于，包括
3.根据权利要求2所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，还包括将所述净电荷±2的肽的溶液与纳豆激酶组分的溶液混合得第二低聚肽，其中，
4.根据权利要求3所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，其中，制备所述纳豆的小肽溶液，包括向所述第一透过液，所述第二截流液中加入消化酶，得所述纳豆的小肽溶液；
5.根据权利要求2所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，
6.根据权利要求5所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，所述离子交换色谱包括强阳离子交换柱。
7.根据权利要求6所述的的低聚肽的制备方法，其特征在于，所述离子交换色谱包括s...
【专利技术属性】
技术研发人员：高威，张延胜，王祖哲，包卫洋，苑艳纳，
申请(专利权)人：大连深蓝肽科技研发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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