本文提供了可用于结合且抑制B7‑H4的重组抗体、其抗原结合片段及其融合蛋白。还提供了编码本文公开的抗体、其抗原结合片段及其融合蛋白的核酸分子以及它们的治疗组合物。还公开了将所公开的抗体、其抗原结合片段及其融合蛋白用于治疗疾病的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开文本总体上涉及分子生物学和医学领域。更特别地，本公开文本提供了融合蛋白，所述融合蛋白包含与il-15多肽连接的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，所述il-15多肽进而与包含il-15rαsushi结构域的il-15受体α(il-15rα)多肽连接。此外，本公开文本提供了与b7-h4特异性结合的抗体及其抗原结合片段，以及包含此类抗b7-h4抗体或其b7-h4结合片段的融合蛋白。还公开了包含抗体融合物或抗体的治疗组合物用于治疗疾病。
技术介绍
1、b7-h4是仅在肿瘤细胞、抗原呈递细胞(apc)和tam(肿瘤相关巨噬细胞)上表达的b7家族的共抑制配体。b7-h4与t细胞上的未鉴定的同源受体结合。虽然pd-l1表达与免疫学上“热”肿瘤相关，但是b7-h4表达标记“冷”环境。b7-h4表达与pd-l1表达负相关。重要地，b7-h4的过表达与癌症患者中的晚期疾病阶段和不良预后相关。肿瘤和tam表达的b7-h4抑制抗肿瘤t细胞的活性，促进t细胞的耗尽的功能异常状态，促进肿瘤相关嗜中性粒细胞(髓源性抑制细胞)并且诱导调节性t细胞(tregs)、il-6和il-10产生。
2、il-15是具有114个氨基酸的12.5kda糖蛋白，属于细胞因子的四α螺旋束家族。此家族还包括il-2、il-4、il-7、il-9、粒细胞集落刺激因子(g-csf)和gm-csf。il-15由巨噬细胞、树突细胞和单核细胞分泌。il-15可以刺激中央记忆cd8细胞发挥免疫，而对其他t细胞无调节作用。此外，il-15可以激活自然杀伤(nk)细胞以及效应和记忆cd8t细胞并且可以拯救t细胞免于tregs诱导的细胞凋亡。与其他细胞因子相比，以较高剂量施用il-15也与较低的诱导全身性毒性的风险相关。人il-15可以是可溶的或膜结合的。膜结合的il-15(其是il-15的主要形式)通过il-15与细胞膜直接结合形成或通过il-15通过膜结合il-15r受体的呈现形成。il-15受体由以下三个亚基构成：il-15rα、il-15rβ和il-15rγ。在与t细胞和nk细胞上的功能性il-15rβ和γ基结合前，il-15典型地与apc上表达的il-15受体α形成复合物。il-15可以以一定亲和力(kd≈10pm)与il-15rα受体单独结合。它还可以以较低亲和力(kd≈1nm)与il-15rβγc信号传导复合物结合。il-15rα的sushi结构域(29.5kda)在il-15与il-15rα的复合物形成中起关键作用。全身性il-15治疗的局限之一是它的体内半衰期非常短。因此，需要产生具有较长的体内半衰期同时保留其调节免疫应答的能力的il-15/il-15rα的合适的免疫刺激形式。此外，需要这样的有效il-15拮抗剂，其可以选择性地靶向疾病位点以避免不想要的全身性毒性并且提供更有效的治疗益处。
3、涉及b7-h4抗体与各种细胞因子(如il-2、il-15、il-21)、肿瘤坏死因子(tnf)和粒细胞集落刺激因子(gm-csf)的组合疗法可以在治疗癌症和感染方面具有一些功效。然而，这些疗法受限于全身性毒性，所述全身性毒性与获得功效所需的高血液浓度的细胞因子相关并且与缺乏针对累及的细胞和组织而施用细胞因子的特异性相关。
4、因此，对开发将各种效应分子靶向疾病位点以在没有与非特异性免疫活性相关的副作用的情况下提供治疗益处的新策略存在显著未满足的需要。
技术实现思路
1、本文提供了融合蛋白，所述融合蛋白包含与il-15多肽连接的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，所述il-15多肽进而与包含il-15rαsushi结构域的il-15受体α(il-15rα)多肽连接。本公开文本提供了与b7-h4特异性结合的抗体及其抗原结合片段，以及包含此类抗b7-h4抗体或其b7-h4结合片段的融合蛋白。还公开了使用所公开的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段或者融合蛋白治疗有需要的受试者的方法。
2、在一方面，提供了抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区中的每一个包含cdr1、cdr2和cdr3，并且其中：
3、a.cdr1h包含seq id no:16，cdr2h包含seq id no:17，cdr3h包含seq id no:18，并且其中：
4、i.cdr1l包含seq id no:20，cdr2l包含seq id no:21并且cdr3l包含seq id no:22；
5、ii.cdr1l包含seq id no:66，cdr2l包含seq id no:67并且cdr3l包含seq id no:68；或
6、iii.cdr1l包含seq id no:70，cdr2l包含seq id no:71并且cdr3l包含seq idno:72；或
7、b.cdr1h包含seq id no:4，cdr2h包含seq id no:5，cdr3h包含seq id no:6，并且其中：
8、i.cdr1l包含seq id no:8，cdr2l包含seq id no:9并且cdr3l包含seq id no:10；
9、ii.cdr1l包含seq id no:77，cdr2l包含seq id no:78并且cdr3l包含seq id no:79；或
10、iii.cdr1l包含seq id no:81，cdr2l包含seq id no:82并且cdr3l包含seq idno:83。
11、在一个实施方案中，提供了抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中cdr1h包含seqid no:16，cdr2h包含seq id no:17，cdr3h包含seq id no:18，cdr1l包含seq id no:70，cdr2l包含seq id no:71并且cdr3l包含seq id no:72。
12、在一个实施方案中，提供了抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中：
13、a.所述重链可变区包含seq id no:15或与seq id no:15至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且其中
14、i.所述轻链可变区包含seq id no:19或与seq id no:19至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；
15、ii.所述轻链可变区包含seq id no:65或与seq id no:65至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；或
16、iii.所述轻链可变区包含seq id no:69或与seq id no:69至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；或
17、b.所述重链可变区包含seq id no:3或与seq id no:3至少本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区中的每一个包含CDR1、CDR2和CDR3，并且其中：
2.根据权利要求1所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR1H包含SEQ IDNO:16，CDR2H包含SEQ ID NO:17，CDR3H包含SEQ ID NO:18，CDR1L包含SEQ ID NO:70，CDR2L包含SEQ ID NO:71，并且CDR3L包含SEQ ID NO:72。
3.根据权利要求1所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:15或与SEQ ID NO:15至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:69或与SEQ ID NO:69至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。
>5.根据权利要求3所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中：6.根据前述权利要求中任一项所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:15并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:69。
7.根据前述权利要求中任一项所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与人hB7-H4的IgV结构域结合。
8.一种抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区中的每一个包含CDR1、CDR2和CDR3，并且其中CDR1H包含SEQ ID NO:46，CDR2H包含SEQ ID NO:47，CDR3H包含SEQ ID NO:48，并且其中：
9.根据权利要求8所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR1H包含SEQ IDNO:46，CDR2H包含SEQ ID NO:47，CDR3H包含SEQ ID NO:48，CDR1L包含SEQ ID NO:108，CDR2L包含SEQ ID NO:109并且CDR3L包含SEQ ID NO:110。
10.根据权利要求8所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:45或与SEQ ID NO:45至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列，并且其中：
11.根据权利要求8-10中任一项所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:45或与SEQ ID NO:45至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:107或与SEQ ID NO:107至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。
12.根据权利要求10所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:45，并且其中：
13.根据权利要求8-12中任一项所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:45，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:107。
14.根据权利要求8-13中任一项所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与人和鼠hB7-H4的IgC结构域结合。
15.一种抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区中的每一个包含CDR1、CDR2和CDR3，其中CDR1H包含SEQ ID NO:58，CDR2H包含SEQ ID NO:59，CDR3H包含SEQ ID NO:60，并且其中：
16.根据权利要求15所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述CDR1H包含SEQID NO:58，CDR2H包含SEQ ID NO:59，CDR3H包含SEQ ID NO:60，CDR1L包含SEQ ID NO:119，CDR2L包含SEQ ID NO:120，并且CDR3L包含SEQ ID NO:121。
17.根据权利要求15所述的抗B7-H4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:57或与SEQ ID NO:57至少90％、至少95％、至少9...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区中的每一个包含cdr1、cdr2和cdr3，并且其中：
2.根据权利要求1所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述cdr1h包含seq idno:16，cdr2h包含seq id no:17，cdr3h包含seq id no:18，cdr1l包含seq id no:70，cdr2l包含seq id no:71，并且cdr3l包含seq id no:72。
3.根据权利要求1所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中：
4.根据权利要求1-3中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:15或与seq id no:15至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且所述轻链可变区包含seq id no:69或与seq id no:69至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。
5.根据权利要求3所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中：
6.根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:15并且所述轻链可变区包含seq id no:69。
7.根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与人hb7-h4的igv结构域结合。
8.一种抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区中的每一个包含cdr1、cdr2和cdr3，并且其中cdr1h包含seq id no:46，cdr2h包含seq id no:47，cdr3h包含seq id no:48，并且其中：
9.根据权利要求8所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述cdr1h包含seq idno:46，cdr2h包含seq id no:47，cdr3h包含seq id no:48，cdr1l包含seq id no:108，cdr2l包含seq id no:109并且cdr3l包含seq id no:110。
10.根据权利要求8所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:45或与seq id no:45至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列，并且其中：
11.根据权利要求8-10中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:45或与seq id no:45至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且所述轻链可变区包含seq id no:107或与seq id no:107至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。
12.根据权利要求10所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:45，并且其中：
13.根据权利要求8-12中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:45，并且所述轻链可变区包含seq id no:107。
14.根据权利要求8-13中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与人和鼠hb7-h4的igc结构域结合。
15.一种抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区中的每一个包含cdr1、cdr2和cdr3，其中cdr1h包含seq id no:58，cdr2h包含seq id no:59，cdr3h包含seq id no:60，并且其中：
16.根据权利要求15所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述cdr1h包含seqid no:58，cdr2h包含seq id no:59，cdr3h包含seq id no:60，cdr1l包含seq id no:119，cdr2l包含seq id no:120，并且cdr3l包含seq id no:121。
17.根据权利要求15所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:57或与seq id no:57至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列，并且其中：
18.根据权利要求15-17中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:57或与seq id no:57至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列；并且所述轻链可变区包含seq id no:118或与seq idno:118至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的序列。
19.根据权利要求17所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:57，并且其中：
20.根据权利要求15-19中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含seq id no:57，并且所述轻链可变区包含seq id no:118。
21.根据权利要求15-20中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与人和鼠hb7-h4的igv结构域结合。
22.一种抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，所述抗b7-h4抗体或其抗原结合片段与根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段结合b7-h4上相同的表位。
23.根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是嵌合抗体、cdr移植抗体或人源化抗体或其抗原结合片段。
24.根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是多特异性抗体或双特异性抗体或其抗原结合片段。
25.根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段是scfv、fv、fab’、fab、f(ab’)2或双抗体。
26.根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是igg类免疫球蛋白。
27.根据权利要求26所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段具有同种型igg1。
28.根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段被去糖基化。
29.根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含第一重链恒定区和第二重链恒定区，并且其中所述抗体或其抗原结合片段包含至少一个在所述第一重链恒定区和所述第二重链恒定区的ch3结构域中引起异二聚化的修饰。
30.根据权利要求29所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述第一重链恒定区的ch3结构域中的修饰与所述第二重链恒定区的ch3结构域中的修饰不同。
31.根据权利要求29或30所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述第一重链恒定区包含选自s354c、t366w、y349c、t366s、l368a和y407v(kabat eu索引编号)的一个或多个氨基酸取代，并且其中所述第二重链恒定区包含选自s354c、t366w、y349c、t366s、l368a和y407v(kabat eu索引编号)的一个或多个氨基酸取代。
32.根据权利要求31所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中：
33.根据权利要求32所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中：
34.根据前述权利要求中任一项所述的抗b7-h4抗体或其抗原结合片段，其中所述第一重链恒定区、所述第二重链恒定区或两者均包含氨基酸取代m428l和n434s(kabat eu索引编号)。
35.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含：
36.根据权利要求35所述的融合蛋白，其中所述b7h4抗体包含重链cdr1(cdr1h)、cdr2(cdr2h)和cdr3(cdr3h)以及轻链cdr1(cdr1l)、cdr2(cdr2l)和cdr3(cdr3l)，其中cdr1h包含seq id no:16，cdr2h包含seq id no:17，cdr3h包含seq id no:18，cdr1l包含seq idno:70，cdr2l包含seq id no:71并且cdr3l包含seq id no:72。
37.根据权利要求35所述的融合蛋白，其中所述b7h4抗体包含重链cdr1(cdr1h)、cdr2(cdr2h)和cdr3(cdr3h)以及轻链cdr1(cdr1l)、cdr2(cdr2l)和cdr3(cdr3l)，其中cdr1h包含seq id no:172，cdr2h包含seq id no:173，cdr3h包含seq id no:174，cdr1l包含seq idno:175，cdr2l包含seq id no:176并且cdr3l包含seq id no:177。
38.根据权利要求35所述的融合蛋白，其中所述b7h4抗体包含重链cdr1(cdr1h)、cdr2(cdr2h)和cdr3(cdr3h)以及轻链cdr1(cdr1l)、cdr2(cdr2l)和cdr3(cdr3l)，其中cdr1h包含seq id no:178，cdr2h包含seq id no:179，cdr3h包含seq id no:180，cdr1l包含seq idno:181，cdr2l包含seq id no:182并且cdr3l包含seq id no:183。
39.根据权利要求35所述的融合蛋白，其中所述b7h4抗体包含重链cdr1(c...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆丹，J·P·帕特尔，T·章，Z·波隆斯卡娅，F·米雅拉，
申请(专利权)人：卡德门企业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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