【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药技术和动物模型领域，尤其是涉及一种高脂血症和动脉粥样硬化动物模型的构建方法及其应用。
技术介绍
1、如下陈述仅提供与本专利技术有关的背景信息，而不必然地构成现有技术。
2、以动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,ascvd)为主的心血管疾病是导致人类死亡主要原因。高脂血症作为ascvd发生、发展的核心机制，表现为血浆总胆固醇(tc)，甘油三酯(tg)，低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)水平的升高。血浆中的tc或ldl-c水平升高是ascvd的独立危险因素，其他含有载脂蛋白apob-100(apob)的脂蛋白，包括富含tg的脂蛋白及其残粒，也参与ascvd的病理生理过程。
3、动脉粥样硬化(atherosclerosis,as)是以进行性脂质沉积、纤维组织增生和炎性细胞浸润为特征的累及全身大、中型弹性和肌性动脉的慢性疾病，伴随人一生的风险。as斑块的存在与急性心血管事件如心肌梗死和中风的风险增加密切相关。建立理想的模仿类似于人体解剖学和病理生理学特征的动脉粥样硬化动物模型，是研究as发病机制及其相关心血管事件的重要工具，也是抗动脉粥样硬化药物研发的关键环节，由此建立反应临床特征的高血脂动脉粥样硬化模型迫在眉睫。
4、目前，通过基因工程技术陆续开发出了apoe-/-、ldlr-/-、apoe/ldlr双敲除等被广泛应用的基因修饰模型动物，但是apoe-/-缺乏近似人类的血脂谱、ldlr-/-呈现较弱脂代谢异常且与
5、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种高脂血症和动脉粥样硬化动物模型的构建方法，该构建方法可形成稳定的高脂血症和动脉硬化小鼠模型。
2、本专利技术的第二目的在于提供上述动物模型的构建方法的应用，助力降脂治疗和抗动脉粥样硬化分子靶标的筛选和药物研发。
3、为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
4、第一方面，提供了一种高脂血症和动脉粥样硬化动物模型的构建方法，包括将受试动物的pparα基因下调或缺失，并在所述受试动物中过表达pcsk9基因。
5、可选的实施方式中，使用aav载体介导受试动物过表达pcsk9基因；
6、可选的实施方式中，aav载体血清型包括aav2、aav5、aav6、aav8、aav9或嵌合型aav。
7、可选的实施方式中，携带pcsk9基因的aav载体经静脉注射导入受试动物。
8、可选的实施方式中，携带pcsk9基因的aav载体经1次静脉注射导入受试动物。
9、可选的实施方式中，所述嵌合型aav为嵌合型aav8，所述嵌合型aav8载体为aav8经衣壳蛋白修饰而得，所述衣壳蛋白修饰包括将aav8衣壳蛋白vp1上的磷脂酶a2结构域替换为aav2的磷脂酶a2结构域。
10、可选的实施方式中，pcsk9基因由cba启动子驱动表达。
11、可选的实施方式中，在所述受试动物中过表达人源pcsk9基因。
12、可选的实施方式中，所述pparα基因被下调或缺失是通过至少一种crispr/cas基因编辑系统进行了基因编辑。
13、可选的实施方式中，所述构建方法包括使用高胆固醇饲料喂养；
14、可选的实施方式中，所述受试动物包括哺乳动物；
15、可选的实施方式中，所述哺乳动物包括小鼠；
16、可选的实施方式中，携带pcsk9基因的aav载体的导入剂量为2×1011vg。
17、可选的实施方式中，所述高脂血症包括如下至少一个特征：
18、(ⅰ)血液总胆固醇水平升高；
19、(ⅱ)血液甘油三酯水平升高；
20、(ⅲ)血液低密度脂蛋白胆固醇水平升高；
21、(ⅳ)肝脏组织和血清中载脂蛋白apob-100表达量升高；
22、(ⅴ)主动脉粥样硬化斑块面积至少为30％。
23、第二方面，提供了第一方面的高脂血症和动脉粥样硬化动物模型的构建方法在如下任一项中的应用：
24、(ⅰ)筛选或制备用于预防或治疗高脂血症的药物中的应用；
25、(ⅱ)筛选或制备用于预防或治疗动脉粥样硬化的药物中的应用；
26、(ⅲ)筛选或制备药物，所述药物用于降低血液中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平中至少一种；
27、可选的实施方式中，(ⅰ)～(ⅲ)中任一项的药物分别独立的以pparα、pcsk9、低密度脂蛋白受体和载脂蛋白apob-100中的至少一种为干预靶标；
28、可选的实施方式中，(ⅰ)～(ⅲ)中任一项的药物分别独立的用于活化pparα基因表达。
29、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
30、本专利技术发现pparα基因敲除导致肝脏和血清载脂蛋白apob-100表达显著上调，进而造成血清总tc、tg及ldl-c水平显著增高，呈现非常严重的高脂血症表型并显著加速动脉粥样硬化斑块的形成。本专利技术通过下调或缺失pparα基因，并且过表达pcsk9基因，建立了一种快速、简便、经济和通用有效的诱导高脂血症和动脉粥样硬化动物模型的新途径。
31、本专利技术的构建方法规避了pparα基因敲除动物与pcsk9转基因动物或者经典的基因修饰动脉粥样硬化模型(包括apoe-/-及ldlr-/-动物)复杂的合笼杂交工作，有助于降低繁殖成本，缩短实验周期，成为构建高脂血症和动脉粥样硬化动物模型的一种快速且通用的方法，助力以pparα和pcsk9为靶标的降脂治疗药物以及抗动脉粥样硬化药物的研发提供理想的动物模型，具有良好的应用前景。本专利技术还揭示了pparα在心血管疾病中的新功能，为临床上动脉粥样硬化的防治和相关药物研发分子靶标的选择提供理论依据和新思路。
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1.高脂血症和动脉粥样硬化动物模型的构建方法，其特征在于，包括将受试动物的PPARα基因下调或缺失，并在所述受试动物中过表达PCSK9基因。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，使用AAV载体介导受试动物过表达PCSK9基因；
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述嵌合型AAV为嵌合型AAV8，所述嵌合型AAV8载体为AAV8经衣壳蛋白修饰而得，所述衣壳蛋白修饰包括将AAV8衣壳蛋白VP1上的磷脂酶A2结构域替换为AAV2的磷脂酶A2结构域。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，PCSK9基因由CBA启动子驱动表达。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述受试动物中过表达人源PCSK9基因；
6.根据权利要求1～5任一项所述的构建方法，其特征在于，所述PPARα基因被下调或缺失是通过至少一种CRISPR/Cas基因编辑系统进行了基因编辑。
7.根据权利要求1～5任一项所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括使用高胆固醇饲料喂养。
8.根据权利要求1
9.根据权利要求1～5任一项所述的构建方法，其特征在于，所述动物模型包括如下至少一个特征：
10.权利要求1～9任一项所述的高脂血症和动脉粥样硬化动物模型的构建方法在如下任一项中的应用：
...【技术特征摘要】
1.高脂血症和动脉粥样硬化动物模型的构建方法，其特征在于，包括将受试动物的pparα基因下调或缺失，并在所述受试动物中过表达pcsk9基因。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，使用aav载体介导受试动物过表达pcsk9基因；
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述嵌合型aav为嵌合型aav8，所述嵌合型aav8载体为aav8经衣壳蛋白修饰而得，所述衣壳蛋白修饰包括将aav8衣壳蛋白vp1上的磷脂酶a2结构域替换为aav2的磷脂酶a2结构域。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，pcsk9基因由cba启动子驱动表达。
5.根据权利要求1所述的构建方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈邦党，陈小翠，崔元峰，
申请(专利权)人：新疆医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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