System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子与应用制造技术_技高网

驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子与应用制造技术

技术编号:41984581 阅读:12 留言:0更新日期:2024-07-12 12:14
本发明专利技术提供了一种驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子与应用,属于基因工程技术领域。所述驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。本发明专利技术利用该启动子在酵母发酵过程中不需要添加甲醇诱导剂,这种优势降低了发酵过程中补料的危险系数,同时还能使制备操作更加简便。而且利用该启动子在酵母中表达的人血清白蛋白是随着菌体的生长而进行,整个发酵周期明显缩短。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程,尤其涉及一种驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子与应用


技术介绍

1、巴斯德毕赤酵母(pichia pastoris)是近年来发展较快的外源蛋白表达宿主菌。除一般酵母所具有的特点外,毕赤酵母还具有很多优点,如外源基因的表达产物既可存在于胞内,也可分泌至胞外,能高效获取外源基因的产物;表达载体能稳定遗传;可进行高密度高产量的发酵培养,便于工业化生产等,除此之外,还可进行很多典型的高等真核生物的蛋白翻译后修饰。

2、毕赤酵母的常用启动子为paox1启动子,但该启动子依赖甲醇作为碳源,甲醇具有毒性且易燃易爆,毕赤酵母利用甲醇消耗大量氧气从而导致更多热量的产生,这些都造成大规模生产的成本上升、设备要求苛刻等其他一些困难。甲醇利用产生的副产物过氧化氢也可能会导致某些蛋白的水解。

3、人血清白蛋白是人血浆中最丰富的蛋白成分,占血浆总蛋白的60%,每升成人血液中约有40g白蛋白。人血清白蛋白在世界上有巨大的市场,其主要作用是维持血液正常渗透压,同时也是运输外源性和内源性物质必不可缺的载体。当前,白蛋白类药物制剂主要来源于血液的直接提取,但是由于血液来源的不稳定性及检测技术的不完善,极易导致使用者感染艾滋病病毒或其他可以通过血液传播的疾病。而且,从血液中提取人血清白蛋白用于医用根本无法满足市场的巨大需求,因此急需一种新型的既安全又可大量生产白蛋白的方法。

4、目前基于重组dna技术方法生产重组人血清白蛋白的方法比较成熟。人血清白蛋白基因位于4号染色体,有16961碱基对,分为15个间隔区,经rna加工拼接后形成的mrna可编码一个具有585个氨基酸的蛋白质,没有n-糖基化修饰的保守序列asn-x-thr/ser(其中的x为除脯氨酸以外的任意氨基酸残基),即不会发生n-糖基化修饰,是一个球状的非糖基化蛋白,分子量为66kda。


技术实现思路

1、鉴于此,本专利技术的目的在于提供一种驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子与应用,该启动子能够在不添加甲醇的培养基中利用酵母高效制备人血清白蛋白,安全性高,制备简便、快速。

2、为了实现上述专利技术目的,本专利技术提供了以下技术方案:

3、本专利技术提供了一种驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子,所述启动子的核苷酸序列如seq id no.11所示。

4、本专利技术还提供了一种上述启动子在制备人血清白蛋白中的应用。

5、本专利技术还提供了一种含人血清白蛋白的重组序列,所述重组序列包括上述的启动子。

6、优选的,所述重组序列的核苷酸序列如seq id no.13所示。

7、优选的,所述重组序列的氨基酸序列如seq id no.12所示。

8、本专利技术还提供了一种表达人血清白蛋白的生物材料,所述生物材料为如下任意一种:

9、(1)含有上述重组序列的表达盒;

10、(2)含有(1)所述表达盒的重组载体;

11、(3)含有上述重组序列的重组菌;

12、(4)含有(1)所述表达盒的重组菌;

13、(5)含有(2)所述重组载体的重组菌。

14、优选的,所述重组菌的出发菌包括毕赤酵母x33或糖基工程酵母35。

15、本专利技术还提供了一种上述重组序列或生物材料在制备人血清白蛋白中的应用。

16、本专利技术还提供了一种生产人血清白蛋白的方法,将上述的启动子导入能合成人血清白蛋白的生物细胞中,使上述的启动子调控生物细胞中的人血清白蛋白基因的表达,得到重组生物细胞,发酵培养所述重组生物细胞,得到人血清白蛋白。

17、优选的,所述发酵的培养基不含有甲醇。

18、相对于现有技术,本专利技术具有如下有益效果:

19、本专利技术提供了一种驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子与应用,本专利技术利用该启动子在酵母发酵过程中不需要添加甲醇诱导剂,这种优势降低了发酵过程中补料的危险系数,同时还能使制备操作更加简便。而且利用该启动子在酵母中表达的人血清白蛋白是随着菌体的生长而进行,整个发酵周期明显缩短。因此,本专利技术为安全性高的酵母组成型启动子提供了新的选择。

本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子,其特征在于,所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

2.权利要求1所述启动子在制备人血清白蛋白中的应用。

3.一种含人血清白蛋白的重组序列,其特征在于,所述重组序列包括权利要求1所述的启动子。

4.根据权利要求3所述的重组序列,其特征在于,所述重组序列的核苷酸序列如SEQ IDNO.13所示。

5.根据权利要求3所述的重组序列,其特征在于,所述重组序列的氨基酸序列如SEQ IDNO.12所示。

6.一种表达人血清白蛋白的生物材料,其特征在于,所述生物材料为如下任意一种:

7.根据权利要求6所述的生物材料,其特征在于,所述重组菌的出发菌包括毕赤酵母X33或糖基工程酵母35。

8.权利要求3~5任一所述的重组序列或权利要求6或7所述生物材料在制备人血清白蛋白中的应用。

9.一种生产人血清白蛋白的方法,其特征在于,将权利要求1所述的启动子导入能合成人血清白蛋白的生物细胞中,使权利要求1所述的启动子调控生物细胞中的人血清白蛋白基因的表达,得到重组生物细胞,发酵培养所述重组生物细胞,得到人血清白蛋白。

10.根据权利要求9所述方法,其特征在于,所述发酵的培养基不含有甲醇。

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【技术特征摘要】

1.一种驱动基因在酵母中表达人血清白蛋白的启动子,其特征在于,所述启动子的核苷酸序列如seq id no.11所示。

2.权利要求1所述启动子在制备人血清白蛋白中的应用。

3.一种含人血清白蛋白的重组序列,其特征在于,所述重组序列包括权利要求1所述的启动子。

4.根据权利要求3所述的重组序列,其特征在于,所述重组序列的核苷酸序列如seq idno.13所示。

5.根据权利要求3所述的重组序列,其特征在于,所述重组序列的氨基酸序列如seq idno.12所示。

6.一种表达人血清白蛋白的生物材料,其特征在于,所述...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘波王甜甜吴军孙鹏侯旭宸张斌巩新武建鑫李璐
申请(专利权)人:中国人民解放军军事科学院军事医学研究院
类型:发明
国别省市:

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