【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物培养，涉及一种具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌及其应用，具体涉及一种铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-7菌株、包含其的培养物、包含其的菌剂、及其在制备含表面活性物质产品中的应用。
技术介绍
1、近年来，石油加工、开采、运输、储存过程中的石油泄漏污染问题频发，微生物采油技术作为油田开发的新型技术，相比化学驱油技术，开发的产品具有绿色环保、无毒性污染，可促进能源生产、发展环保产业、推动能源的清洁安全高效利用。生物表面活性剂，尤其是糖脂类生物表面活性剂可以通过驱油减少碳排放，应用于水驱或化学驱后的油藏，其在石油开发和污染修复中具有较大应用潜力。
2、提升微生物表面活性物质产量可以选择筛选优良菌株、优化发酵培养基及发酵培养条件等策略，但是这些策略下产量的提升具有一定的局限性。近年来，也有一些研究从分子水平提升表面活性物质的产量，生物表面活性物质属于微生物的次生代谢产物，整个基因表达和代谢途径复杂而冗长，现有技术主要针对单个基因进行改造，获得基因工程菌的效率较低、操作流程复杂且构建周期较长，产量和功能的提升也具有一定的局限性。常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma)简称为artp，指能够在大气压下产生温度在25-40℃之间的、具有高活性粒子(包括处于激发态的氦原子、氧原子、oh自由基等)浓度的等离子体射流。artp诱变技术可以在已知基因表达和代谢途径之外，高效挖掘微生物的潜在高产基因。
3、因此，提供更
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌及其应用，具体提供一株铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-7菌株、包含其的培养物、包含其的菌剂、及其在制备含表面活性物质产品中的应用。
2、为达到此专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌，所述具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌命名为铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosawl-7菌株，保藏编号为cgmcc no.25492，保藏日期为2022年08月03日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
4、本专利技术以铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa菌株为出发菌株，使用等离子体诱变育种仪诱变获得一株铜绿假单胞菌，将其命名为铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa wl-7菌株，该菌株可以合成表面活性物质，降低油/水界面张力，促进原油乳化，提高原油采收率，特别地，所述表面活性物质为糖脂类表面活性物质。微生物合成的表面活性剂广泛应用于水驱或化学驱后的油藏，因此，铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa wl-7菌株在石油开发、石油微生物污染修复应用前景良好。
5、本文所述的铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa菌株的保藏编号为cgmccno.1.2620，2020年4月30日购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
6、本专利技术所涉及的铜绿假单胞菌的筛选步骤如下：
7、(1)以铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa菌株为出发菌株，使用等离子体诱变育种仪诱变育种后，涂布在lb固体培养基上，在30℃培养18h后，挑取单菌落接种至lb液体培养基30℃培养24h，随后将菌液点样至哥伦比亚血琼脂筛选平板上初筛，选出溶血圈直径较出发菌株增加10％以上的菌株。
8、(2)将步骤(1)初筛菌株发酵培养96h，提取表面活性物质进行复筛，选择表面活性物质产量高的菌株，并在30℃下使用液体培养基扩大培养，再使用质量终浓度为15％的甘油进行保藏，随后进行鉴定，该菌株鉴定为铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-7菌株。
9、第二方面，本专利技术提供一种具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌的培养物，所述培养物采用如下制备方法进行制备，所述制备方法包括：
10、将第一方面中所述的铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-7菌株接种于培养基中在25-35℃(例如25℃、27℃、29℃、31℃、33℃、35℃等)的条件下培养1-4天(例如1天、2天、3天或4天)即得。
11、上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
12、优选地，所述培养基包括lb培养基、营养肉汤培养基、sob培养基、soc培养基或tb培养基中的任意一种。
13、本专利技术优选上述培养条件，铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-7菌株在上述培养条件中能够达到生长稳定期，并且具有更加优异的碳源利用能力。
14、第三方面，本专利技术提供一种用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂，所述用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂中的菌株包括如第一方面中所述的铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa wl-7菌株。
15、本专利技术所涉及的铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-7菌株可以被单独地应用于相关产品中，也可以与其他化合物或菌株联合应用于相关产品中。
16、优选地，在所述用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂中，所述铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-7菌株的活菌数不低于5×108cfu/ml或6×108cfu/g。
17、所述不低于5×108cfu/ml的具体数值可以选择5×108cfu/ml、7×108cfu/ml、1×109cfu/ml、3×109cfu/ml、5×109cfu/ml或7×109cfu/ml等。
18、所述不低于6×108cfu/g的具体数值可以选择6×108cfu/g、8×108cfu/g、1×109cfu/g、3×109cfu/g、5×109cfu/g或7×109cfu/g等。
19、上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
20、优选地，所述菌剂的剂型包括液体菌剂、粉状菌剂、片状菌剂或颗粒状菌剂。
21、本专利技术所述用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂的剂型可以选择本领域技术人员使用的任意剂型，当选择液体剂型，pseudomonas aeruginosa wl-7菌株的活菌数不低于5×108cfu/ml，选择固体剂型pseudomonas aeruginosa wl-7菌株的活菌数不低于6×108cfu/g时，所述菌剂中菌株活菌数高，合成表面活性物质的能力强。
22、优选地，所述菌剂还包括保本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌，其特征在于，所述具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌命名为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa WL-7菌株，保藏编号为CGMCC No.25492，保藏日期为2022年08月03日。
2.一种具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌的培养物，其特征在于，所述培养物采用如下制备方法进行制备，所述制备方法包括：
3.如权利要求2所述的具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌的培养物，其特征在于，所述培养基包括LB培养基、营养肉汤培养基、SOB培养基、SOC培养基或TB培养基中的任意一种。
4.一种用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂，其特征在于，所述用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂中的菌株包括如权利要求1中所述的铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa WL-7菌株。
5.如权利要求4所述的用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂，其特征在于，在所述用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂中，所述铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa WL-7菌株的活菌数不
6.如权利要求4或5所述的用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂，其特征在于，所述菌剂的剂型包括液体菌剂、粉状菌剂、片状菌剂或颗粒状菌剂。
7.如权利要求4-6中任一项所述的用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂，其特征在于，所述菌剂还包括保护剂。
8.如权利要求7所述的用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂，其特征在于，所述保护剂包括脱脂奶粉、甘露醇、蔗糖或乳糖中的任意一种或至少两种的组合。
9.如权利要求7或8所述的用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂，其特征在于，所述铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa WL-7菌株与保护剂的质量比为(5-15):1。
10.如权利要求1中所述的铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa WL-7菌株、如权利要求2或3所述的培养物或如权利要求4-9中任一项所述的用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂在制备含表面活性物质产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌，其特征在于，所述具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌命名为铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa wl-7菌株，保藏编号为cgmcc no.25492，保藏日期为2022年08月03日。
2.一种具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌的培养物，其特征在于，所述培养物采用如下制备方法进行制备，所述制备方法包括：
3.如权利要求2所述的具有合成表面活性物质功能的铜绿假单胞菌的培养物，其特征在于，所述培养基包括lb培养基、营养肉汤培养基、sob培养基、soc培养基或tb培养基中的任意一种。
4.一种用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂，其特征在于，所述用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂中的菌株包括如权利要求1中所述的铜绿假单胞菌pseudomonasaeruginosa wl-7菌株。
5.如权利要求4所述的用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂，其特征在于，在所述用于生产糖脂类表面活性物质的菌剂中，所述铜绿假单胞菌pseudomonas...
【专利技术属性】
技术研发人员：王璐，宋文枫，田茂章，周新宇，韩旭，
申请(专利权)人：中国石油天然气集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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