【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及基于hiv-1膜蛋白gp120的荧光标记中和抗体，通过流式细胞术或其它荧光分析仪器分析检测活的hictl中的应用(检测过程和检测后细胞不死亡)，可将hiv-1感染者体内的hictl或感染细胞模型的hictl和未感染cd4+t淋巴细胞区分开来，为获取活的hictl提供技术支持。
技术介绍
1、艾滋病全称为获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome,aids)，是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus-1,hiv-1)感染引起的一种具有严重机体免疫功能危害性的传染病。hiv-1属于逆转录病毒科慢病毒属，主要感染cd4+t淋巴细胞(简称cd4+t细胞)，并通过多种机制导致细胞死亡和功能缺失，引起感染者体内cd4+t细胞数量进行性下降及免疫功能紊乱。目前关于hiv-1对感染者cd4+t细胞病理损伤的研究主要是基于cd4整个细胞亚群，但在cd4+t细胞中，hiv-1感染的cd4+t淋巴细胞(hiv-1infected cd4 t lymphocytes，hictl)只占很小的比例(0.001％-5％)。因此，对hiv-1感染者cd4+t细胞的病理分析结果是非hictl和hictl的混合结果，无法精准地阐述hiv-1对hictl的直接病理损伤。这里，需注意的是hiv-1感染的细胞并不会立即死亡，hiv-1会在细胞内持续复制、释放新病毒，最终导致大部分被感染细胞死亡，这是一个过程，而这个过程是研究hiv-1对细胞直接破坏作用的
2、目前，检测hictl主要是以p24抗原、hiv-1rna和dna为标志物，基于流式细胞术、rna flow-fish和单细胞测序技术检测技术进行检测。但是，p24抗原、hiv-1rna和dna这些标志物都是细胞内的标志物，基于流式细胞术、rnaflow-fish的方法需要在检测时使用打孔剂在细胞膜上打孔以使荧光标记的p24抗体、hiv-1rna和dna互补探针进入细胞内，与hiv-1感染的细胞内的p24抗原、hiv-1rna和dna特异性结合；同时，还需要使用醛类分子(主要是甲醛)对细胞膜打孔之后的细胞内容物进行固定(即胞内物质被甲醛共价交联)，这样才能避免被打孔后的细胞内容物漏出或细胞裂解。细胞膜打孔和醛类物质固定(共价键反应)均会导致细胞死亡。基于单细胞测序技术检测hictl，则需要裂解细胞并提取hictl内部的mrna后进行基因测序(细胞在样本处理中已经死亡)，通过识别mrna中是否含有hiv-1核酸序列将hictl识别出来。上述两种操作均会在样本处理和检测过程中导致细胞死亡，使得虽然可以检测hictl，但无法得到活的hictl进行后续的研究。
3、hiv-1为基因高变异病毒，而hiv-1膜蛋白gp120的基因变异率在全部hiv-1基因中变异率最大，因此，检测hiv-1膜蛋白gp120时，需要使用hiv-1中和抗体。hiv-1中和抗体目前有三十多种(论文报道)，靶向hiv-1膜蛋白gp120上的基因保守区，可以检测大多数hiv-1变异病毒株。
4、因此，我们定制了荧光标记的hiv-1膜蛋白gp120中和抗体作为诊断标志物，为深入研究活的hictl的功能提供了可能。
技术实现思路
1、针对上述现有技术中存在的缺陷，本专利技术的目的在于设计提供一种识别活的hictl的gp120荧光标记中和抗体诊断标志物及其在识别和/或分离活的hictl中的应用，以及该方法在艾滋病相关检测、诊断和治疗方面的应用。本专利技术hiv-1膜蛋白gp120荧光标记中和抗体特异性地识别并结合hictl表面的gp120蛋白抗原，不需要细胞膜打孔剂和醛类固定剂处理，不会导致被检测的细胞死亡，通过流式细胞术识别hictl细胞膜表面的gp120荧光标记中和抗体所标识的特异性荧光信号，将hiv-1感染的活的细胞与未感染的活细胞区分开。
2、为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、一方面，本专利技术提供了一种用于识别活的hictl的诊断标志物，所述诊断标志物为hiv-1膜蛋白gp120的荧光标记中和抗体；
4、所述中和抗体靶向hiv-1膜蛋白gp120上的基因保守区；
5、所述荧光标记为采用荧光素标记。
6、所述的一种用于识别活的hictl的诊断标志物，所述中和抗体为gp120(0.5beta)或gp120(5i20)。
7、所述的一种用于识别活的hictl的诊断标志物，所述荧光标记为apc荧光素和/或fitc荧光素标记。
8、第二方面，本专利技术提供了所述的诊断标志物在制备检测或诊断或治疗艾滋病的产品中的应用。
9、第三方面，本专利技术提供了所述的诊断标志物在制备识别和/或分离活的hiv-1感染的cd4+t淋巴细胞，和未感染cd4+t淋巴细胞的产品中的应用。
10、第四方面，本专利技术提供了所述的诊断标志物在制备特异性识别和/或分离活的hiv-1感染的cd4+t淋巴细胞的产品中的应用。
11、所述的应用，其特征在于，所述识别和/或分离的方法为荧光分析方法。
12、所述的应用，其特征在于，所述识别和/或分离的方法为流式细胞术。
13、第五方面，本专利技术提供了一种用于识别活的hictl的试剂盒，包含如权利要求1或2所述的诊断标志物。
14、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
15、1.本专利技术提供了一种基于hiv-1膜蛋白gp120的荧光标记抗体的诊断标志物，可以特异性识别大多数hiv-1病毒株感染的活的hictl，因为荧光标记抗体是和hictl细胞膜上的gp120非共价结合，在识别hictl时不会导致细胞死亡，在检测过程中和检测之后也不会导致样本中的细胞死亡，基于这个方法可以识别并分离活的hictl，为深入研究hictl的功能提供了可能。
16、2.本专利技术基于两种hiv-1膜蛋白gp120的荧光标记抗体进行分析以验证该方法的可行性，两种gp120的荧光标记抗体标记不同的荧光分子，通过流式细胞术识别两种不同的荧光分子，可以进行单荧光分子的识别和双荧光分子的识别，单荧光分子的识别是指识别一个荧光阳性的hictl(标记为gp120+)，双荧光分子的识别是指识别两个荧光均为阳性的hictl(标记为gp120++)，两个gp120荧光标记抗体的共同识别，可以降低单个gp120荧光标记抗体可能存在的非特异性结合，更精准地识别具本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于识别活的HICTL的诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物为HIV-1膜蛋白gp120的荧光标记中和抗体；
2.如权利要求1所述的一种用于识别活的HICTL的诊断标志物，其特征在于，所述中和抗体为gp120(0.5Beta)或gp120(5i20)。
3.如权利要求1所述的一种用于识别活的HICTL的诊断标志物，其特征在于，所述荧光标记为APC荧光素和/或FITC荧光素标记。
4.如权利要求1所述的诊断标志物在制备检测或诊断或治疗艾滋病的产品中的应用。
5.如权利要求1所述的诊断标志物在制备识别和/或分离活的HIV-1感染的CD4+T淋巴细胞，和活的未感染CD4+T淋巴细胞的产品中的应用。
6.如权利要求1所述的诊断标志物在制备特异性识别和/或分离活的HIV-1感染的CD4+T淋巴细胞的产品中的应用。
7.如权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述识别和/或分离的方法为荧光分析方法。
8.如权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述识别和/或分离的方法为流式细胞术。
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...【技术特征摘要】
1.一种用于识别活的hictl的诊断标志物，其特征在于，所述诊断标志物为hiv-1膜蛋白gp120的荧光标记中和抗体；
2.如权利要求1所述的一种用于识别活的hictl的诊断标志物，其特征在于，所述中和抗体为gp120(0.5beta)或gp120(5i20)。
3.如权利要求1所述的一种用于识别活的hictl的诊断标志物，其特征在于，所述荧光标记为apc荧光素和/或fitc荧光素标记。
4.如权利要求1所述的诊断标志物在制备检测或诊断或治疗艾滋病的产品中的应用。
5.如权利要求1所述的诊断...
【专利技术属性】
技术研发人员：王晓辉，杨峥嵘，黄志敏，练玉珊，赵锦，黎桂连，李浩，
申请(专利权)人：深圳市疾病预防控制中心深圳市卫生检验中心，深圳市预防医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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