一种甾体激素复方片剂的检测方法技术

一种甾体激素复方片剂的检测方法，能够检测复方片剂的有效成分地诺孕素和戊酸雌二醇以及有关物质，该方法为利用高效液相色谱法，采用氰基色谱柱，以乙腈和水混合溶媒为流动相，以２０５～２２５ｎｍ为检测波长，并采用梯度淋洗的方法检测有关物质。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种药物制剂的检测方法，特别是一种甾体激素复方片剂有效成分的检测方法。
技术介绍
地诺孕素(dienogest， CAS: 65928-58-7)化学式如下图<formula>formula see original document page 4</formula>dienogest地诺孕素是一种混和性孕激素，它具有19-去甲睾丸酮衍生物和孕酮衍生物的职重性质， 并且兼具独特的药效学和药动学性质。地诺孕素的内分泌药理学非常理想，它因仅结合于孕 激素受体，故无雌激素、抗雌激素和雄激素活性，抗促性腺激素作用(抑制促卵泡激素和黄体 激素的分泌)亦很弱。戊酸雌二醇(estradiol valerate, CAS: 979-32-8)分子式如下<formula>formula see original document page 4</formula>、estradiol valerate'戊酸雌二醇是天然雌二醇的戊酸盐，具有天然雌二醇的药理作用，广泛适用于各种需要 补充雌激素的症状。Schring公司生产的地诺孕素与戊酸雌二醇复方片剂己于2001年在欧洲上市，商品名 Climodien，规格为每片含有2mg地诺孕素与2mg戊酸雌二醇，用于治疗更年期综合症。然 而对该地诺孕素与戊酸雌二醇复方片剂中两种有效成分的检测方法却并未一同公开。在研制 国产地诺孕素与戊酸雌二醇复方片剂的过程中，我们遇到了无法快速高效的检测制得的复方 片剂中有效成分含量的问题。现有技术中，Wehrberger, K.等((Centralinst. Microbiol. Exp. Therapy, Ger. Acad. Sci.， Jena GDR-6900, Ger. Dem. Rep.).Anal. Chem. Symp. Ser., 23(Adv. Steroid Anal. '84), 511-18 (English) 1985)公丌了对地诺孕素利用HPLC进行分析 的方法，色谱条件采用Lichrosorb RP-18固定相色谱柱，，以甲醇-水(55: 45)作为流动 相，然而该文献中并未公开色谱分析时使用检测波长，并且我们发现在该条件下虽然两者能够分离，但戊酸雌二醇的出峰时间过晚，超过了 60min，使仪器的利用效率大为降低。姜丽 霞(高效液相色谱法测定复方戊酸雌二醇片中戊酸雌二醇和炔诺酮含量，浙江省医学科学院 学报，2000年12月；21-21， 29)公开了用HPLC在氰基固定相色谱柱上测定复方戊酸雌二 醇片中戊酸雌二醇和炔诺酮含量的方法，色谱条件为色谱柱选用ZORBAX CN (5 u m，4.6mm X250mm)，流动相为乙腈水(47:53)，流速为1.0ml/min，检测波长为280nm， AUFS(absorbance units full scale,满量程的吸光度单位)为0.32，检测温度为室温，进样量15pL，采用内标法 定量，黄体酮为对照品。经过实验我们发现，与戊酸雌二醇的吸收度相比，地诺孕素在该方 法的检测波长下吸收度过低，并且用该方法在检测地诺孕素与戊酸雌二醇复方片时我们发现 该方法在测定该片剂的有关物质含量时，部分有关物质不能有效检出。陈宗岱等(用高效液 相色谱法测定复方己酸孕酮注射液中两组分的含量，药物分析杂志14 (6) 1994; 10-12)公 开了利用HPLC测定复方己酸孕酮注射液中戊酸雌二醇和己酸孕酮的方法，色谱条件为色 谱柱采用PORASIL 10 u m 3.9mmX30cm，流动相为正己烷-异丙醇(91: 9)，流速为0.6ml/min， 检测波长采用280nm，当我们用该文献色谱分析条件用来分析地诺孕素与戊酸雌二醇复方片 剂时，却发现，除了吸收度过低外，由于地诺孕素中具有强极性的氰基集团，在该条件下地 诺孕素的出峰时间过长，严重影响了分析工作的效率，使得该方法的实用性很差。
技术实现思路
为克服现有技术中的上述缺陷，实现用高效液相色谱法测定地诺孕素与戊酸雌二醇复方 片剂中活性成分以及有关物质的目的，本专利技术提供了一种用高效液相色谱法检测地诺孕素与 戊酸雌二醇复方片中活性成分含量的技术方案，其特征是所述的分析条件如下所用的流动相为乙腈水二70: 30 50: 50 (体积比)所用的色谱柱为采用氰基键合硅胶为填料的色谱柱检测波长为205 225nm检测温度为20 40。C，优选在室温下检测(20 30°C)操作方法为，精密称取片粉适量，用流动相配制成样品浓度(以戊酸雌二醇计)为10 500ug/ml的溶液，量取5 50uL的溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。 如上所述的分析方法，其特征是优选 所用的流动相为乙腈水=60: 40 (体积比)； 用流动相配制成的样品溶液浓度为10 50ug/ml; 进样量为10 50uL。 流速为0.6 1.5ml/min 其中，特别优选 进样量为20L。 流速为lml/min用流动相配制成的样品溶液浓度(以戊酸雌二醇计)为40ug/ml; 更进一步地，本专利技术还提供了一种公开了一种用高效液相色谱法同时检测地诺孕素与戊 酸雌二醇复方片有效成分含量和有关物质含量的技术方案，其特征是于所述的分析条件如下: 所用的流动相为乙腈与水混和溶媒流动相，采用梯度淋洗方法，梯度程序见下表<table>table see original document page 5</column></row><table>0 1030 4060 7010 2570 8020 3025 3030 4060 7030 3530 4060 70所用的色谱柱为采用氰基键合硅胶为填料的色谱柱检测波长为205 225nm操作方法为，精密称取样品片粉适量，用流动相配制成浓度(以戊酸雌二醇计)为100 500yg/ml的溶液，量取10 50u L的溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。 如上所述的分析方法，其特征是梯度程序优选时间(min)乙腈％ (v/v)水％ (v/v)0 10307010 25802025 30307030 353070优选样品溶液浓度(以戊酸雌二醇计)为200ug/ml; 色谱仪进样量为20L。在确定本专利技术技术方案所用的检测波长，我们分别对戊酸雌二醇和地诺孕素进行了紫外-可见吸收光谱的检测(见图1和图2)，根据现有技术，应选取吸收度大的波长作为检测波长。 从光谱图中可以看出，在现有技术中使用的280nm波长下，地诺孕素的吸收度几乎为零，如 果使用该波长进行检测，则地诺孕素基本无法检出。而通过分析谱图，我们发现在205 220nm 的波长下，两种有效成分吸收度基本相同，因此在使用该波长范围作为检测波长时，两种有 效成分的校正因子基本一致，便于生产过程中对片剂质量的控制，并且通过检测我们发现， 在这个波长范围内两种有效成分的线性范围都足以满足检测需要。此外，在实验中我们意外 地发现，在检测制得片剂的有关物质含量时，在其它条件相同时，只有采用205 225run的 检测波长才能检测出所有的杂质种类，并且由于在此波长下，作为有效成分的地诺孕素和戊 酸雌二醇的吸收度相近，同时，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种地诺孕素与戊酸雌二醇复方片剂中活性成分含量的检测方法，其特征是采用高效液相色谱分析，色谱条件如下：　所用的流动相为乙腈∶水＝７０∶３０～５０∶５０（体积比）；　所用的色谱柱为采用氰基键合硅胶为填料的色谱柱；　检测波长为 ２０５～２２５ｎｍ；　检测温度为２０～４０℃。

【技术特征摘要】
1、一种地诺孕素与戊酸雌二醇复方片剂中活性成分含量的检测方法，其特征是采用高效液相色谱分析，色谱条件如下所用的流动相为乙腈∶水＝70∶30～50∶50(体积比)；所用的色谱柱为采用氰基键合硅胶为填料的色谱柱；检测波长为205～225nm；检测温度为20～40℃。2、 如权利要求1所述的色谱分析方法，其特征是 所用的流动相为乙腈水=60: 40 (体积比)。3、 如权利要求2所述的色谱分析方法，其特征是优选-用流动相配制成的供试液浓度以戊酸雌二醇计为10 50u g/ml; 进样量为10 50u L 流速为0.6 1.5ml/min。4、 如权利要求1至3中任一所述的色谱分析方法，其特征是-所用的流动相为乙腈水=70: 30 (体积比)。5、 如权利要求1至3中任一所述的色谱分析方法，其特征是-所用的流动相为乙腈水=50: 50 (体积比)。6、 一种地诺孕素与戊酸雌二醇复方片剂中活性成分和有关物质含量的检测方法，其特征是 采用高效液相色谱分析，色谱条件为 采用所用的色谱柱为采用氰基键合硅胶为填料的色谱柱；检测波长为205 225nm; 检测温度为20 4(TC;并采用梯度淋洗程序如下<table>ta...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志耕，刘要强，
申请(专利权)人：天津金耀集团有限公司，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]