【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测，特别涉及一种快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的引物组合物及应用。
技术介绍
1、血红蛋白病可分为地中海贫血(简称地贫)和异常血红蛋白两类，而异常血红蛋白是由于珠蛋白基因缺陷导致血红蛋白分子结构发生改变的一组遗传性血红蛋白病，比如：hbq-thai-land、hb newyork、hbe是最常见的异常血红蛋白，大多数异常血红蛋白并不引起临床表型，但仍有少数异常血红蛋白如hbs、hbe等可以单独存在或复合地中海贫血，引起明显的临床表现。
2、镰状细胞病(sickle cell disease.scd) 又称镰状细胞贫血，镰状细胞膜僵硬，变形性降低，造成以下病理现象或临床表现：①溶血：因镰变及切变力诱发红细胞在循环中破坏，造成血管内溶血。镰状细胞被单核-巨噬细胞系统识别和捕获，造成血管外溶血。患者在刚出生时，因血红蛋白f比例高，镰变现象不明显，3～4月后hbs逐渐替代hbf，出现贫血及黄疸，6个月后可见脾大；②急性事件：本病病程中可出现多种病情急剧恶化的情况或危象。血管阻塞“危象”最为常见，且常在病程中反复出现，系由镰状细胞变形性降低，血液粘度增加，在微循环内淤滞，造成血管阻塞所致。加之其他急性事件及危象均可给患者造成巨大病痛甚至危及患者生命；③慢性机体损害：表现为生长发育不良和广泛的器官损害。
3、目前，异常血红蛋白会导致以下健康问题：（1）儿童贫血伴有生长发育迟缓；（2）阳性家族史伴有贫血；（3）小儿反复出现手足肿痛；（4）不明原因反复感染与肝脾肿大。另外，镰状细胞病（sc
4、因此，开发一种能同时检测hbs病和hbe病，且应用到基因诊断做出产前诊断，可以降低发病率，具有长足的意义。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提出一种快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的引物组合物及应用，旨在解决目前没有能够快速且同时检测hbs病和hbe病的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提出一种快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的引物组合物，所述引物组合物包括：
3、针对hbs和hbe突变位点设计的引物组和探针组，其中：
4、所述引物组包括f3引物、b3引物、fip引物、bip引物、lf引物和lb引物，所述f3引物的核苷酸序列如seq id no:1所示，所述b3引物的核苷酸序列如seq id no:2所示，所述fip引物的核苷酸序列如seq id no:3所示，所述bip引物的核苷酸序列如seq id no:6所示，所述lf引物的核苷酸序列如seq id no:9所示，和所述lb引物的核苷酸序列如seq id no:10所示；
5、所述探针组包括多个探针，所述多个探针包括针对hbe突变位点设计的第一探针和第二探针，其中，所述第一探针的核苷酸序列如seq id no:11所示，所述第二探针的核苷酸序列如seq id no:12所示；
6、所述多个探针还包括针对hbs突变位点设计的第三探针和第四探针，其中，所述第三探针的核苷酸序列如seqid no:13所示，所述第四探针的核苷酸序列如seq id no:14所示。
7、可选地，所述fip引物由f2引物和f1c引物拼接而成，所述f2引物的核苷酸序列如seq id no:4所示，所述f1c引物的核苷酸序列如seq id no:5所示，所述bip引物由b2引物和b1c引物拼接而成，所述b2引物的核苷酸序列如seq id no:7所示，所述b1c引物的核苷酸序列如seq id no:8所示。
8、可选地，所述引物组针对的靶基因的核苷酸如seq id no:15所示。
9、可选地，所述探针组的探针为taqman探针，其中，所述taqman探针的5′端包括荧光报告基团，所述taqman探针的3′端包括荧光淬灭基团。
10、可选地，所述第一探针5’端标记有fam荧光基团，所述第二探针5’端标记有vic荧光基团，所述第三探针5’端标记有rox荧光基团，所述第四探针的5’端标记有cy5荧光基团。
11、可选地，所述第一探针3’端标记有bhq1淬灭基团，所述第二探针3’端标记有bhq1淬灭基团，所述第三探针3’端标记有bhq2淬灭基团，所述第四探针的3’端标记有bhq3淬灭基团。
12、本专利技术还提出一种快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的检测试剂盒，包括如上所述的快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的引物组合物。
13、可选地，还包括mg2+、dntp、dutp和bst dna聚合酶、udg酶。
14、可选地，所述mg2+的终浓度为4~8mm；和/或，
15、所述dntp的终浓度为0.8~1.6mm；和/或，
16、所述dutp的终浓度为0.1~0.5mm；和/或，
17、所述bst dna聚合酶终浓度为1~5u/反应；和/或，
18、所述udg酶终浓度为1~5u/反应；和/或，
19、所述检测试剂盒的引物组中f3、b3引物的终浓度为0.1~0.4μm；和/或，
20、所述检测试剂盒的引物组中fip、bip引物的终浓度为1.2~2μm；和/或，
21、所述检测试剂盒的引物组中lf、lb引物的终浓度为0.05~0.4μm；和/或，
22、所述检测试剂盒的探针组中各探针的终浓度为0.05~0.5μm。
23、本专利技术提出一种异常血红蛋白hbb基因的检测方法，包括步骤：
24、获取待检样品和如上任意一项快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的检测试剂盒；
25、将所述试剂盒对所述待检样品进行lamp扩增反应，得到扩增反应产物；
26、获取扩增反应产物的出峰时间值；
27、将扩增反应产物的出峰时间值与预设出峰时间值比较，根据比较结果判断待检样品的基因型。
28、本专利技术可以快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点，实现对hbs（镰状细胞病）与hbe病的临床辅助诊断，设计的一组引物组合和探针可以同时实现对两种位点突变的检测，且特异性好、灵敏度高，在短时间内即可实现对hbb基因多态位点进行快速检测，用于携带者筛查和产前诊断提供科学的依据，具有良好的应用前景。
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1.一种快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括：
2.如权利要求1所述的快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述FIP引物由F2引物和F1c引物拼接而成，所述F2引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:4所示，所述F1c引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，所述BIP引物由B2引物和B1c引物拼接而成，所述B2引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，所述B1c引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。
3.如权利要求1所述的快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物针对的靶基因的核苷酸如SEQ ID NO:15所示。
4.如权利要求1所述的快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述探针组的探针为Taqman探针，其中，所述Taqman探针的5′端包括荧光报告基团，所述Taqman探针的3′端包括荧光淬灭基团。
5.如权利要求1所述的快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位
6.如权利要求1所述的快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述第一探针3’端标记有BHQ1淬灭基团，所述第二探针3’端标记有BHQ1淬灭基团，所述第三探针3’端标记有BHQ2淬灭基团，所述第四探针的3’端标记有BHQ3淬灭基团。
7.一种快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位点的检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至6任意一项所述的快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位点的引物组合物。
8.如权利要求7所述的快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位点的检测试剂盒，其特征在于，还包括Bst 缓冲液、Mg2+、dNTP、dUTP和Bst DNA聚合酶、UDG酶。
9.如权利要求8所述的快速检测人异常血红蛋白HBB基因多态性位点的检测试剂盒，其特征在于：
10.一种异常血红蛋白HBB基因的检测方法，其特征在于，包括步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括：
2.如权利要求1所述的快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述fip引物由f2引物和f1c引物拼接而成，所述f2引物的核苷酸序列如seq idno:4所示，所述f1c引物的核苷酸序列如seq id no:5所示，所述bip引物由b2引物和b1c引物拼接而成，所述b2引物的核苷酸序列如seq id no:7所示，所述b1c引物的核苷酸序列如seq id no:8所示。
3.如权利要求1所述的快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物针对的靶基因的核苷酸如seq id no:15所示。
4.如权利要求1所述的快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的引物组合物，其特征在于，所述探针组的探针为taqman探针，其中，所述taqman探针的5′端包括荧光报告基团，所述taqman探针的3′端包括荧光淬灭基团。
5.如权利要求1所述的快速检测人异常血红蛋白hbb基因多态性位点的引物组合...
【专利技术属性】
技术研发人员：周利建，刘石金，孙芳，刘福平，
申请(专利权)人：深圳会众生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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